甲状旁腺素PTH标准操作程序SOP文件.docx

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1、ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-39甲状旁腺素PTH版序：ABCD页码：第1页，共3页用途:用免疫学方法定量测定人血清或血浆的甲状旁腺素（PTH）的含量。电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏ElecsyslOlO、2010和E170免疫测定分析仪。概述：甲状旁腺素（PTH）由甲状旁腺合成并分泌入血流中。完整的PTH由一条肽链组成，含84个氨基酸，分子量为9.5KD。具有生物活性的N端片段半衰期只有几分钟。因此 有选择地检测完整的甲状旁腺素，可以直接了解甲状旁腺体的分泌活性。PTH与维生素D和降钙素一起，动员骨骼系统的钙和磷酸，增加小肠对钙的吸收和肾脏对磷的排泄。PTH和降钙素的相

2、互作用维持血钙水平的稳定性。血钙升高抑制PTH的分泌，血钙降低则促进PTH的分泌。（高钙血症或低钙血症）。检查甲状旁腺机能低下症要求灵敏的试验，以便检测低于正常范围的PTH水平。甲状旁腺机能功能亢进症导致PTH分泌上升，主要由甲状旁腺腺瘤引起。继发性的甲状旁腺机能功能亢进症中，血钙低下，这是由于其它病理状态引起的。目前，对甲状旁腺机能亢进的诊断中，PTH和血钙含量测定更加引起重视，在甲状旁腺腺瘤切除手术前后测定PTH能帮助外科医生了解手术效果，完全切除可使PTH快速下降。PTH测定法采用双抗体夹心法原理，生物素化的单抗与N端结合（1-37）,钉标记的单抗与C端结合（38-84） o对应的抗原决

3、定簇氨基酸序列在26-32和55-64区域。原理：采用双抗体夹心法，整个过程18分钟完成。 第1步：50l标本、生物素化的抗PTH单克隆抗体和钉（Ru）标记的抗PTH单抗混匀，形成夹心复合物。 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。试剂：M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6. 5ml

4、o粒子浓度0.72mgml,生物素结合能力：470ng生物素g粒子。含防腐剂。R1：生物素化的抗PTH抗体（灰盖），1瓶，10ml。浓度2 3mgl,磷酸缓冲液0.lmoll,pH7.0o含防腐剂。R2：钉（Ru）标记的抗PTH抗体（黑盖）,1, 10mlo浓度2.0mgl,磷酸缓冲液0. lmoll, pH7. 0o 含防腐剂。ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-39甲状旁腺素PTH版序：ABCD页码：第2页，共3页储存和稳定性：存放在2 8度，切莫倒置。未开封，可稳定至标明的保质期。开封后，2-8度12周；放在Elecsys2010上,8周。(使用后放回28度;如置2025度,

5、约20小时)。标本采集和准备：血清：按标准常规方法采集。血浆：EDTA-K3抗凝。建议用血浆，因为比血清稳定。标本在15 25度可稳定2天,在2 8度可稳定3天，-20度可稳定6个月。含沉淀的标本使用前需离心。标本和质控液禁用叠氮钠防腐。标本、定标液和质控品在测定前的温度应与室温平衡；放入仪器后应在2小时内测定以避免蒸发的影响。.检测步骤：提供的材料：货号：11972103, 100人份的Elecsys PTH试剂盒包含： M链霉亲和素包被的微粒 R1生物素化的抗PTH抗体 R2钉(Ru)标记的抗PTH抗体需要的材料(未提供)： Elecsys PTH定标液(PTH CalSet)货号 119

6、72219 Elecsys 骨质控品(PreciControl Bone)货号 11972227 Elecsys2010分析仪需要 Elecsys系统缓冲液(ProCell)货号 11662988 Elecsys 测量池清洗液(CleanCell)货号 11662970 Elecsys 添加剂液(SysWash)货号 11930346 Elecsys 系统清洗液支架(Adapter for SysClean)货号 11933159 Elecsys 2010反应杯(Assay Cup)货号 11706802 Elecsys 2010吸样头(Assay Tip)货号 11706799方法：按仪器操

7、作说明进行操作。检查试剂与消耗品是否充足。使用前需混匀微粒。仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参数，不需手工输入。如果特殊情况下仪器无法阅读条形码，可以手工输入15位数字。将冷藏试剂预温到20度后放置于仪器的试剂盘上，避免产生泡沫。仪器自动控制试剂温度和开/关试剂瓶盖。ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-39甲状旁腺素PTH版序：ABCD页码：第3页，共3页定标：每批PTH试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用PTH定标液定标。定标频率：每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册24小时以内）标定一次，如再次标定即根据下列要求： 一个月（同一批号试剂）

8、7天（放置仪器上的同一试剂盒） 根据要求进行标定：如质控结果超出范围时。质控：Elecsys骨质控品1、2和3以及其它合适的质控品。各浓度区域的质控至少每24工作时、每个试剂盒或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。计算：对每一个标本，仪器会自动计算含量，单位是pg/ml或pmol/1。换算方法是pmol/1X9. 43=pgml或pg/nilXO. 106=pmoll干扰因素：该方法不受黄疸（胆红素65mgdl）、溶血（血红蛋白L5gdl）、脂血（脂质1500mgdl）生物素50ngM等干扰，接受高剂量生物素（5mg天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子（1500Uml）干扰。PTH浓度高达17000pgml也不出现钩状效应。16种常用药物经试验对本测定无干扰。偶尔会遇到抗链酶亲和素抗体的干扰。Elecsys PTH测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。检测范围：1. 205000pgd或0. 127-530poll稀释：因检测范围足够宽,标本不需稀释。正常参考值：15-65pgml或1 6-6. 9pmoll如有必要，各实验室应自己测定一个正常值范围。