神经元特异性烯醇化酶NSE标准操作程序SOP文件.docx

《神经元特异性烯醇化酶NSE标准操作程序SOP文件.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《神经元特异性烯醇化酶NSE标准操作程序SOP文件.docx（4页珍藏版）》请在第一文库网上搜索。

1、ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-33NSE版序：ABCD页码：第1页，共4页概述：神经元特异性烯醇化酶(neurone specific enolase,NSE),是烯醇酶的异构体。乂称2磷酸.D-甘油酸水解酶同工酶，是参与甘油分解的最后一个酶，使2-磷酸甘油酸向烯醇化丙酮酸转化。仅存在于神经元和神经内分泌细胞内及APUD组织。由3个独立的基因片段编码3种免疫学性质不同的亚基a、0、,组成5种形式的同工酶 a, o二聚体是该酶分子的活性形式，y亚基同工酶存在于神经原和神经内分泌组织，称为NSE。a亚基同工酶定位于胶质细胞，称为非神经原特异性烯醇化酶(NNE)。NSE和NNE的分

2、子量分另J为78ku和87ku。临床应用：小细胞肺癌诊断、鉴别诊断1) (small cell lung cancer,SCLC)是一种来源于神经内分泌系统的恶性肿瘤，约占肺癌的25%-30%,可表现神经内分泌细胞的特性，有过量的NSE表达，比其它肺癌和正常对照高5-10倍以上。恶性程度很高，但对放疗、化疗敏感。SCLC患者血清NSE检出的阳性率可高达65%-100%,目前已公认为NSE可作为SCLC高特异性、高灵敏性的肿瘤标志物，有报道，NSE水平与SCLC转移程度相关，但与转移的部位无关，NSE水平与其对治疗的反应性之间也有一个良好的相关性。2) SCLC与NSCLC (非小细胞肺癌)的鉴

3、别诊断。据报道,如果以20ugL为诊断界限，90%以上的SCLC呈阳性，而NSCLC阳性率仅为12%左右；3) SCLC与良性肺部疾病的鉴别诊断据报道，良性肺病的NSE20 ug/L阳性率仅为3%左右。神经母细胞瘤神经母细胞瘤是常见的儿童肿瘤，占1-14岁儿童肿瘤的NSE作为神经母细胞瘤的标志物，对该病的早期诊断具有较高的临床应用价值。神经母细胞瘤患者的尿中NSE水平也有一定升高，治疗后血清NSE水平降至正常。血清NSF水平的测定对于监测疗效和预报复发均具有重要参考价值，比测定尿液中儿茶酚胺的代谢物更有意义。其他肿瘤甲状腺髓样癌、嗜铭细胞瘤、转移性精原细胞癌、黑色素瘤、胰内分泌瘤等也能导致NS

4、E增高。ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-33NSE版序：ABCD页码：第2页，共4页原理：采用双抗体夹心法，整个过程18分钟完成。 第1步：标本、生物素化的抗NSE单克隆抗体和钉（Ru）标记的抗NSE单抗混匀，形成夹心复合物。 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。试剂：M：链

5、霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6. 5mlo含防腐剂。R1：生物素化的抗NSE单克隆抗体（灰盖），1瓶，10ml。含防腐剂。R2： Ru（bpy）32 +标记的抗NSE单克隆抗体（黑盖），1瓶，10ml。含防腐剂。储存和稳定性：存放在2-8度，切莫倒置。未开封，可稳定至标明的保质期。开封后，2-8度，12周；放在Elecsys2010, 8周；（室温20 25度；开盖时间累计不超过20小时）。标本采集和准备：血清：按标准常规方法采集。血浆：EDTA-K3或柠檬酸钠抗凝。（不要使用肝素抗凝血浆或草酸盐/氟化物抗凝血浆。确保标本不被肝素污染。）标本在28度可稳定24小时，-20度可稳定12

6、个月。只可冻融一次。含沉淀的标本使用前需离心。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。标本、定标液和质控品在测定前的温度应与室温平衡；放入仪器后应在2小时内测定以避免蒸发的影响。检测步骤：提供的材料：货号：100人份的Elecsys NSE试剂盒包含： M链霉亲和素包被的微粒 R1生物素化的抗NSE抗体 R2三联毗咤钉标记的抗NSE抗体需要的材料（未提供）：ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-33NSE版序：ABCD页码：第3页，共4页 ElecsysNSE定标液(CalSet) ElecsysNSE质控品(PreciControl Cardiac) Elecsys通用稀释液 Elecsys2

7、010 分析仪 Elecsys 系统缓冲液(ProCell) Elecsys 测量池清洗液(CleanCell) Elecsys 添加剂液(SysWash) Elecsys 系统清洗液支架(Adapter for SysClean) Elecsys 2010反应杯(Assay Cup) Elecsys 2010吸样头(Assay Tip)方法：按仪器操作说明进行操作。检查试剂与消耗品是否充足。仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参数，不需手工输入如果特殊情况下仪器无法阅读条阅读条形码，可以手工输入15位数字。将冷藏试剂预温到20度后放置于仪器的试剂盘上，避免产生泡沫。仪器自动控制试

8、剂温度和开/关试剂瓶盖。定标：每批NSE试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用CalSet定标液定标。定标频率：每批试剂必须用新鲜试剂(试剂经仪器注册24小时以内)标定一次，如再次标定即根据下列要求： 一个月(同一批号试剂) 7天(放置仪器上的同一试剂盒) 根据要求进行标定：如质控结果超出范围时。质控：ElecsysNSE质控品(PreciControlCardiac) 1和2或其它合适的质控品。各浓度区域的质控至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。计算：对每一个标本，仪

9、器会自动计算结果，单位是ng/ml或mg/L。ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-33版序：ABCDNSE页码：第4页，共4页干扰因素：该方法不受黄疸（胆红素27mgdl）、溶血（血红蛋白l.lgdl）、脂血（脂质1500gdl）和生物素50ngl干扰。接受高剂量生物素（5g天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（2000Uml） o 50种常用药物经试验对本测定无干扰作用。接受过小鼠单抗治疗或体内诊断的病人会出现假阳性反应。NSE测定结果应结合病人的病史、临床症状和其他检查结果进行诊断。检测范围：稀释：高于检测范围的标本可用通用稀释液稀释。如用手工稀释，结果应乘上稀释倍数。如果是机器自动稀释，机器会自动计算结果。 正常参考范围（Roche Elecsys系统）：15. 2ugL建议各实验室建立自己的正常参考范围