组织无机磷含量测定试剂盒说明书.docx

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1、组织无机磷含量测定试剂盒说明书微量法100T/96S注意：正式测定之前选择23个预期差异大的样本做预测定。澜定意义：无机磷主要指磷酸根，参与生物体内多种代谢，包括能量代谢、核酸代谢、蛋H质磷酸化和脱磷酸化等等,此外促进碳水化合物的合成、转化和转运。渊定原理：粗蓝与磷酸根生成66Onm有特征吸收峰的物质，通过测定66Onm光吸收，即可计算无机磷含量。自备仪器和用品：离心机、水浴锅、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、和蒸馆水。试剂组成和配Ih试剂一：液体IoOm1X1瓶，4匕保存。试剂二：液体5m1x1瓶，4tC保存。试剂三：粉剂X1瓶，4避光保存。临用前配制，加入I

2、Om1蒸储水，充分溶解后加入试剂二（全部），混匀。标准品：液体X1支。无机磷提取：按照组织质量（g）：试剂一体积（m1）为1：510的比例（建议称取约0.1g组织，加入Im1试剂一）进行冰浴匀浆。IOOOOrpm,4离心IOmin,取上清，置冰上待测。渊定：1 .分光光度计/衡标仪预热30min,调节波长到660nm,蒸储水调零。2 .打开水浴锅，调节温度到40C。3 .空白管：取0.5m1EP管，依次力口入1001蒸饱水，1001试剂三，混匀后置于40C水浴保温Iomin,室温冷却IOmin后于66Onm测定吸光度，记为A空白管。4 .标准管：取0.5m1EP管，依次加入101标准液，901

3、蒸储水，1001试剂三，混匀后置于40水浴保温IOmin,室温冷却IOmin后于66Onm测定吸光度，记为A标准管。5 .测定管：取0.5m1EP管，依次加入101上清液，901蒸储水，1001试剂三，混匀后置于40水浴保温IOmin,室温冷却10min后于660nm测定吸光度，记为A测定管。注意：空白管和标准管只需测定一次。组织无机磷含量计算：（1）按照蛋白含量计算无机磷含量（mo1mgprot）=C标准液X（A测定管一A空白管）（A标准管一A空白管RxV总Cpr=IX（A测定管一A空白管）（A标准管一A空白管）Cpr（2）按照样本质量计算无机璘含量（mo1g鲜重尸C标准液X（A测定管一A空白管H（A标准管一A空白管）xV总W=1（A测定管一A空白管）（A标准管一A空白管）WC标准液：Immo1/1；V总：上清液总体积，1m1=0.0011；W：样品质量，g。注意事项I1 .试剂三需临用前配制，并且当天使用完毕。2 .40min内完成比色。3 .最低检出限为10mo1/1o