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1、酸性土壤速效磷试剂盒说明书微量法100T/96S注意:正式测定之前选择23个预期差异大的样本做预测定。测定意义:速效磷是土壤中可被植物吸收的磷组分,包括全部水溶性磷、部分吸附态磷及有机态磷,土壤中速效磷是限制植物生长主要因子之一。测定原理:用双酸法提取酸溶性磷和吸附态磷,用铝镶抗比色法测定。自备实验用品及仪器:天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、震荡仪。试剂组成和配制:提取液:液体IoOm1X1瓶,49保存。试剂一:液体6m11支,4保存。试剂二:粉剂X1支,4C避光保存。临用前加2m1蒸储水溶解。用不完的试剂49保存。试剂三:粉剂x3支,4C避光保存。临用前加
2、Im1蒸储水溶解。现配现用。样本处理I新鲜土样风干,过30-50目筛,按照土壤质量(g):提取液体积(m1)为1:510的比例(建议称取约0.1g土样,加入Im1提取液),振荡提取30min,100g,25C离心IOmin,取上清液待测。测定步骤I1、取试剂三一支,加入Im1蒸储水充分溶解待用。2、显色液的配制(可测50个样):取EP管一支,加入6601试剂一,再加入IOoiI1试剂二,充分混匀后,再加入2401试剂三,充分混匀待用:配好的显色液应为黄色,若变蓝则为磷污染:显色液必须现配现用;若一次性测不了50个样,可按比例缩小各试剂体积。3、操作表空白管测定管样本(1)40提取液(H1)40
3、显色液(1)2020H2O(1)140140充分混匀,25静置30min于微量石英比色皿/96孔板中,蒸饱水调零,测定66Onm处吸光值A,分别记为A空白管和A测定管,A=A测定管-A空白管。空白管只要做一管。计算公式,a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线:y=0.1252-0.0041,R2=0.9957,X为标准品浓度(mg1),y为吸光值。速效磷含量(mgkg干重)=(A+0.0041)0.1252XV样(WXV样V样总)=7.987(A+0.41)WV样:样本体积,0.04m1;V样总:加入提取液体积,1m1,W:样本质量,约01gb.用96孔板测定的计算公式如下标准曲线:y=0.0626-0.0041,R2=0.9957,X为标准品浓度(mg1),y为吸光值。速效璘含量(mgkg干重)=(A+0.0041)0.0626V样(WXV样V样总)=15.97(A+0.41)WV样:样本体积,0.04m1:V样总:加入提取液体枳,1m1,W:样本质量,约6:Ig注意事项I1 .配好的显色液当天用完,变蓝则不能使用。2 .AA线性范围为:0.01-1.503 .标准曲线线性范围为:(Umg1-20mg1