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1、 病毒学检验的特点 病毒学检验的内容和应用范围满足硬件生物安全要求F原则标本的采集原则做好采样规划,保护病毒,标记W品,运送正确质量控制原则血清学/免疫学诊断主要内容病毒的分离培养定量检测滴度测定,病毒核酸载量测定病毒的纯化,浓缩和保存病毒感谢病毒Oi的诊断朗如专染满口节肢动物的检测应用范围新发病毒性疾病的病原和防治研究性传蜩的检验与栩性人兽共患病的检疫 新发传染病病毒检测的特点 选择用于病毒培养的细胞遵循的原则细胞对病毒的敏感性(易感)不同研究目的螃细胞株或系细胞谢圣原则了解病毒在不同细胞培养中增殖特征邮培养方法:静止培养,旋转培养,悬浮培养常见细胞污染的来源,种类及防控措施选择无菌动物或无
2、特定病原体动物的组织严格无菌操作以及规范的接种操作抖斯砧g/选择无特病原体动物作为血清的提供者加入抗生素未污染的细胞注意冷冻保存,定期测定其是否存在感染来源组织,血清消化液,操作,空气,器材细胞培养技术在病毒学检验中的应用细胞病变检查法:细胞圆缩,细胞聚合,细胞同形成台胞体(特征性包涵体)病毒鉴定方法h病毒的分离培养和鉴定一子主题三o病毒纯化:纯化过程网寺生物学性质和感染性空斑试验胞不能形成中性红蝌出现不染色的空感定量检测50魁点法测定病毒滴度药物体9附病毒试验I肿瘤病毒致癌机制研究第二章 鸡胚接种途径,以新城疫病毒接种为例,请说明接种方法好过程 血凝和血凝抑制试验的原理,如何判断结果 动物实
3、验遵循的原则 鸡胚和动物实验的主要用途 实验动物按微生物控制分类的目的,如何分类第五章 电子显微镜技术在病毒鉴定方面的优势快速负染技术简单,负染技术操作简单。准确:电镜检测的结果主要是发现病毒颗粒的存在是证明病毒存在的最直接证据,对具有明显形态特征的病毒即刻可做出准确的判断。具有同时检测多种病原的潜力,依赖于已知的核酸序列抗原或抗体信息。 对病毒进行检测的常规电子显微镜技术负染技术,超薄切片制样技术,免疫电子显微镜技术 负染样本制作过程病毒灭活的方法负染色是一种反衬染色,通过重金属盐溶液染色,增加标本外围密度,在生物标本的外围形成均质的电子不透明环境,而电子能够通过主要由碳,氢氧氮等元素组成的
4、密度较低的生物样本。形成电子透亮的白色,而时生物标本,显示出负的(较透明的)反差,成像后的效果为在黑色背景下低密度的标本(病毒颗粒)呈现白色透亮状态,从而形成负染色成像。优点。大大提高了标本的反差和分辨力,既能够清晰显示出病毒的超微结构。简便易行,不要求高纯度的标本制备技术技通常不需要对样本进行纯化,有杂质也不会影响对病毒形态8的辨别。染色技术本身不改变生物样本的活性剂,不因染色造成病毒形态的改变。第六章 流感病毒和腺病毒的核酸检测方法的异同 鼻咽拭子是呼吸道病毒检测常用的标本,采集此类标本是注意事项。除鼻咽拭子之外,呼吸道病毒感染检测还可以采集哪些标本 举例说明常见呼吸道感染病毒分离培养时使
5、用的敏感细胞系 肠道病毒和引起肠胃炎的腹泻病毒通常包括哪些,其病毒学地位分别是什么,其基因组特征分别是什么? 肠道病毒和腹泻病毒的区别是什么?肠道病毒EV是小RNA病毒科肠道病毒属,包括脊髓灰质炎病毒,柯萨奇病毒,埃可病毒,新型肠道病毒。可感染人或动物,在宿主消化道中复制增殖,表现为隐性感染腹泻病毒包括轮状病毒,诺如病毒,札如病毒,星状病毒,肠道腺病毒,可引起急性肠胃炎。 可用于检测肠道病毒和腹泻病毒的标本有哪些。肠道病毒:感染急性期从病变部位或具有临床症状部位采集的相应标本:如疱疹液,脑脊液,心包积液,粪便标本,咽拭子标本,其他。腹泻病毒为粪便 轮状病毒有几种抗原,其分型是如何确定的?病毒性
6、腹泻的临床诊断标准和实验室诊断标准分别是什么?诺如病毒实验室检测:固相免疫电镜将病毒进行抗原分型,分子生物学,RT-PCR测定病毒的基因组第八章 皮肤和粘膜病毒是指哪一类,其种类和引起的临床表现类型有哪些?双链DNA,痘病毒,疱疹病毒,乳头瘤病毒 皮肤和粘膜病毒感染可采集的样本类型由哪些由哪些采集方法?水泡液,咽喉拭子,阴道拭子,脑脊液或脑活检组织,角膜刮取物(角膜拭子),痰液,唾液,血液,尿液 疱疹病毒在电镜下表现的基本生物特征是什么,其传播途径有哪些?中等大小,有包膜的DNA病毒。病毒颗粒呈球形,内有一病毒核心,核心外依次为病毒衣壳,内膜,包膜。核心和衣壳共同构成病毒核衣壳。HSV接触,空
7、气传播,HSV-2型可性传播VZV接触传播,空气传播人巨细胞病毒:垂直传播,水平传播,医源性感染(直接/间接接触)乳头瘤病毒:性传播,母婴传播 诊断单纯疱疹病毒感染的检测方法有哪些?直接检测病毒抗原(免疫荧光或免疫酶法)直接检测病毒抗体:补体结核试验,中和试验,免疫荧光试验,E1ISA和放射免疫荧光直接检测病毒核酸:PCR或原位杂交法病毒分离:血清学诊断 分离单纯疱疹病毒的方法有哪些,单纯疱疹病毒感染的细胞病变表现如何?第十章 HIV与HEV在生物学形状,致病性和免疫性方面的异同点有哪些? 简述各型肝炎病毒血清学检测的指标。 试述HBV血清标志物检测的意义。机体感染HBV后最早出现的血清标志物
8、HBsAg(表面抗原)/阳性:急性乙肝的潜伏期和急性期,慢性乙肝,=无症状HBV携带者,无症状HBSAg携带者,与HBV感染有关的肝硬化和原发性肝癌是HBSAg刺激机体产生的特异性中和抗体,是保护性抗体。抗HBs(表面抗体)/v阳性:乙肝恢复期,自身产生抗体卜表面机体已产生免疫力/急性感染的重要畴,也是慢性活动肝炎的重要标志Vk抗HBC(核心抗体)/阳性:乙肝恢复期,慢性感染和既往感染U可溶性蛋白质,急性乙肝的辅助诊断,预后的指标HBeAg(e抗原)X-弋阳性:HBSAg阳性的乙肝患者和HBSAg携带者存在于无症状HBV携带者及活动期慢性肝炎患抗HBe(e抗体)者中血清学检测的五项指标:HBs
9、Ag(表面抗原)、抗-HBs(表面抗体)、抗-HBc(核心抗体)、HBeAg(e抗原)、抗-HBe(e抗体)乙肝病毒血清学检查三种主要抗体及其意义1、抗-HBe一般存在于无症状HBV携带者及活动期慢性肝炎患者中。2、抗-HBS:是HBsAg刺激机体产生的特异性中和抗体,是保护性抗体。阳性表明机体已经产生免疫力3、抗-HBc:包括抗-HBCIgM、抗-HbcIgG,前者是急性感染的重要指标,也是慢性活动肝炎的重要标志。阳性主要见于乙肝恢复期,慢性感染和既往感染。 简述各型肝炎病毒的传播途径。 简述Dane颗粒的结构。大球形颗粒。乙肝血清中,为具有感染性的完整的HBV病毒,有双层衣壳,外衣壳由双层
10、脂质和蛋白质组成,HBsAg及S1前抗原和前S2抗原既镶嵌在此脂质双层中。 试述各型肝炎病毒的实验室诊断标准。第十二章 常见虫媒传染病及其病原体,重要虫媒传染病有哪些临床症状黄热病:黄热病毒,蚊传播登革热:登革热病毒,伊蚊森林脑炎:虫卑,睥传脑炎病毒,中枢神经系统病变基孔肯雅热:基孔肯雅热病毒,伊蚊,发热、皮疹、剧烈关节疼痛 虫媒病毒的实验室检测方法,各有什么优缺点直接检测法,血清诊断法,病毒分离和鉴定 虫媒病毒的主要传播途径及防控措施控制传染源:患者隔离切断传播途径:防蚊,灭蚊,防睥,灭蝉保护易感人群:提高人群免疫力,知识宣教,疫苗接种加强国境卫生检疫,严防疾病输入HIV的实验室检测项目和方法抗原检测血清p24抗原阴性(血清转换),早期筛查*/班合洵O定量(用拷贝数或国际单位表示病毒载病毒分离培养抗赧si吸附,峥罐检测肮体/抗体确证试验免疫印迹试验:测H1V抗体蛋白(B4,B7,B17)病毒分离与培养恒河猴,出现细胞病变小于(CPE)免疫缺陷试验检查CD4+和CD8+T淋巴细胞计数,外周血淋巴计数,CD4/CD8比值性检测艾滋病患者HIVH1V稣和CD4+细胞种W征gH1V抗体确证阳性H液分离出H1V病毒株/有急性H1V感酒合征或流行病学史,不同时间v的两次H1V核酸检测结果阳性符合一项即可