消毒剂模拟现场和现场消毒鉴定试验.docx

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1、消毒剂模拟现场和现场消毒鉴定试验1消毒剂对食(饮)具消毒效果的模拟现场鉴定试验1.1 目的鉴定消毒剂对食(饮)具上细菌的杀灭作用，以验证该消毒剂对食(饮)具消毒的实用剂量。1.2 试验器材(1)大肠杆菌(8099)。对尚需用于杀灭其他特定细菌者,可增用该特定细菌进行试验。菌悬液制备按2.1.1.2规定的方法和要求进行。(2)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03mo11,pH7.2)(3)稀释液：见附录A。(4)中和齐U(按2.1.1.5方法鉴定合格者)(5)胰蛋白陈大豆琼脂培养基(6)无菌棉拭(7)规格板(用可略弯曲的软性材料制备，中央留一大小为5.0cm5.0cm空格作为采样部位)。(8)试验用食

2、(饮)具样本瓷碗(盘)或竹(木)筷前端(周长2.0cm,长度为12.5cm。1.3 操作程序(1)按产品使用说明书的用法，选定本试验拟用浓度和作用时间，分别进行大肠杆菌杀灭试验。(2)用无菌规格板在试验用瓷碗(盘)中间标出染菌区(5.0CmX5.0cm)。用无菌吸管吸取菌悬液，分别滴加于染菌区，每区0.1m1,用无菌1棒在区内涂匀，置37恒温箱干燥。对筷子取前端12.5Cm长度，蘸染预定量菌液后，并置37或室温干燥。(3)试验组：将30个染菌碗或3O个筷子样本，依次定时放入含消毒剂溶液的容器中，使其完全浸没。作用至规定时间后取出，弃掉消毒剂，向瓷碗(盘)内的染菌区加入5m1中和剂，用1棒刮洗染

3、菌区，作用IOmin后，分别取1OmI样液倾注接种2块平皿。将筷子放入含20m125m1中和剂的试管中，使其完全浸没在中和剂中，电动混匀器震荡60s或振敲200次,作用IOmin后，分别取1Om1样液倾注接种2块平皿。将接种好的平皿放37恒温箱培养48h,计数菌落数，作为试验组。(4)阳性对照组：将3个染菌碗或3只筷子样本不浸泡消毒剂，直接向瓷碗(盘)内的染菌区加入5m1中和剂，或直接将筷子放入含20m125m1中和剂的试管中。待试验组消毒处理完毕后，随试验组进行采样和检测。阳性对照组菌量应为1.25x1()7Cfu/样本1.25x1()8CfU/样本(相当于5105cfucm25106cfu

4、cm2)0(5)阴性对照组：待试验组与阳性对照组试验结束后，将未用过的同批次中和剂、PBS接种培养基和未种菌的培养基等与上述两组样本同时进行培养，作为阴性对照。(6)按下式计算每件食具上的生长菌落数。每件食具样本生长菌落数(cfu样本)=平板上平均菌落数X检测时样本稀释倍数(7)计算杀灭对数值。1.4 评价规定以每种食(饮)具30个样本中大肠杆菌杀灭对数值均与3.00所用消毒剂的浓度和作用时间为消毒合格剂量。1.5 注意事项(1)试验操作过程必须采取严格的无菌技术。直接或间接接触样本的器材必须经灭菌后使用。模拟现场试验所用食(饮)具在染菌前亦必须经灭菌处理。(2)每次试验必须设置阳性和阴性对照

5、，绝不可省略。2消毒剂对医疗器械的消毒模拟现场试验2.1 目的鉴定消毒剂对人工污染于医疗器械上细菌芽胞的杀灭作用作用，以验证对医疗器械处理的实用剂量。2.2 试验器材枯草杆菌黑色变种(AreC9372)芽胞(下简称芽抱，其悬液的制备按2.1.1.2.3规定进行)(2)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03mo11,pH7.2)(3)中和剂溶液(经按2.1.1.5规定方法鉴定合格者)(4)含中和剂的胰蛋白陈大豆肉汤培养基(5)模拟现场试验用样本(将医用止血钳截断，取其由轴至齿端部分，参照2.1.124(2)规定方法进行脱脂处理。经压力蒸汽灭菌后，烤干备用)。(6)塑料试管(18cm18cm)。2.3 操

6、作程序(1)以载体浸泡定量杀菌试验进行消毒效果的测定。按产品使用说明书的剂量，选定本试验拟用浓度和和作用时间。(2)染菌时，用无菌镶子将止血钳样本齿面朝上，并固定在无菌支撑物上。用0.1m1无菌吸管或定量无菌移液器，将0.02m1芽抱悬液滴染于齿部，用无菌1型钳金丝涂匀，置37恒温箱内干燥备用。(3)取无菌平皿，按每个载体IOmI用量加入消毒液，置20C2C水浴中保温5min。(4)将30个染菌样本浸没于消毒液中进行消毒处理。(5)作用至规定时间，取出样本，分别移入含IOmI中和剂溶液的塑料试管内。在手掌上振敲200次，分别取样液1Om1倾注接种两个无菌平皿，放37恒温箱培养72h,计数菌落数

7、，作为试验组。(6)以无菌蒸储水代替消毒液，将3个染菌样同样条件处理，然后与试验组样本同法进行活菌培养计数，作为阳性对照组，其菌量应在5105cfu样本5x106CfW样本。试验结束后，将用过的同批次中和剂、采样液、稀释液接种培养基，进行培养;另将未用过的同批培养基亦放入恒温箱内培养，作为阴性对照。2.4 评价规定在规定作用时间内，阳性对照组均有菌生长，活菌培养计数达到规定的数量，阴性对照均无菌生长时，以对试验组30个样本上人工污染芽胞的杀灭率对数均值与3.00,可判为消毒合格。2.5 注意事项与本试验有关的其它试验中的注意事项亦适用于本试验。3消毒剂对医疗器械的模拟现场灭菌试验3.1 目的用

8、于验证消毒剂对人工染有芽胞的医疗器械灭菌效果。3.2 试验器材枯草杆菌黑色变种(ATCC9372)芽胞(下简称芽抱，其悬液的制备按2.1.123(2)规定进行)(2)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03mo11,pH7.2)(3)中和剂溶液(经按2.1.1.5规定方法鉴定合格者)(4)含中和剂的胰蛋白陈大豆肉汤培养基(5)模拟现场试验用样本(将医用止血钳截断，取其由轴至齿端部分，参照2.1.124(2)规定方法进行脱脂处理。经压力蒸汽灭菌后，烤干备用)。(6)塑料试管(18cmx18cm)3.3 操作程序(1)按产品使用说明书中的最低使用浓度与0.5倍最短作用时间。(2) 25个染菌样本制备按2.3

9、中(2)规定进行。(3)无菌平皿，按每个载体IOmI用量加入消毒液，置20C2C水浴中保温5min。(4)将20个染菌样本浸没于消毒液中进行灭菌处理，作用至规定时间，将样本取出，分别放于含IOm1中和剂肉汤的试管内(共20支)，置37培养箱中定性培养7d,观察最终结果，作为试验组。有菌生长者，肉汤培养基呈轻度浑浊，有皱褶状菌菌膜，轻轻振摇可见絮状沉淀，无菌生长者肉汤清澈透明。(5)以标准硬水代替消毒液，将2个染菌载体依上同样条件处理，然后与试验组载体同法接种、培养、观察结果，作为阳性对照组。(6)另取3个染菌样本，分别放入IOm1中和剂溶液塑料试管内。振荡Imin,或在手掌上振敲200次，取样

10、液进行活菌培养计数。培养72h计数菌落。作为菌数对照组，其菌量应为5x1()5cfu/样本5x16cfu/样本。(7)试验结束后，将用过的同批次中和剂、采样液和稀释液接种培养基，进行培养，另将未用过的同批培养基亦放入恒温箱内培养，作为阴性对照。(8)试验重复3次。3.4 评价规定各次试验组所有60个样本均无菌生长，同时阳性对照组均有菌生长，菌数对照组活菌培养计数达到规定的数量，阴性对照组均无菌生长时，可判定为灭菌合格。3.5 注意事项(1)灭菌效果观察时，应严格无菌操作，否则可将灭菌合格误判为失败。(2)于本试验有关的其它试验中的注意事项亦适用于本试验。4连续使用稳定性试验4.1 目的验证消毒

11、剂在反复取放浸泡医疗器械条件下的使用有效期。4.2 试验器材枯草杆菌黑色变种(ATeC9372)芽胞(下简称芽抱，其悬液的制备按2.1.123(2)规定进行)(2)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03mo11,pH7.2)(3)中和剂溶液(经按2.1.1.5规定方法鉴定合格者)(4)含中和剂的胰蛋白陈大豆肉汤培养基：见附录A。(5)试验样本参照2.112.4(2)o(6)满载用医疗器械(选用医用剪刀、止血钳等小型器械，或根据需要选用其他器械。(7)无菌带盖搪瓷盘。4.3 操作程序(1)以枯草杆菌黑色变种芽胞为试验菌。(2)试验时，配制双份200OmI消毒液，分别盛装于2个无菌带盖搪瓷盘中。各放入清洁

12、的试验用医疗器械，使达满载要求。每次试验，同时分别对2个搪瓷盘中的消毒液进行检测。(3)搪瓷盘内放入器械后，每日将器械取出，用清水洗涤，沥干，再回放入消毒液中。连续每日将器械取出、洗涤、沥干、再放入，直至试验结束。(4)放入器械至说明书上连续使用的最长时间，吸取消毒液样本，医疗器械消毒按消毒剂对医疗器械的消毒模拟现场试验(2),医疗器械灭菌按消毒剂对医疗器械的模拟现场灭菌试验(3)的方法，测定该消毒液对芽胞的杀灭效果。4.4 评价规定试验重复3次，以3次试验均达到合格要求，可判为连续使用稳定性试验合格。4.5 注意事项(1)盛装消毒液的搪瓷盘，在每次操作完毕后应加盖。(2)灭菌效果观察时，应严

13、格无菌操作，否则可将灭菌合格误判为失败。(3)本试验有关的其它试验中的注意事项亦适用于本试验。5消毒剂对手消毒模拟现场试验5.1目的用于测定消毒剂对人工污染于手表面细菌的杀灭作用，并作为确定该消毒剂对手消毒实用剂量的参考。5.2试验器材(I)大肠杆菌8099或NeTC1o538,对尚需用于杀灭其他特定细菌目的者，可增用该特定细菌进行试验。菌悬液制备按2.1.1.2规定的方法和要求进行。(2)胰蛋白陈大豆琼脂培养基(TSA)：见附录A。(3)胰蛋白陈大豆肉汤培养基(TSB)：见附录A。(4)中和剂(以TSB为溶剂，经鉴定合格)。(5)液体肥皂200g1o(6)参考样品：正丙醇60%(V/V)与异

14、丙醇60%(VV)0(7)标准硬水：见附录A。(8)磷酸盐缓冲液(PBS,0.03mo11,pH7.2)0(9)无菌纱布巾。(10)吸管、试管、平皿若干。(11)振荡混合器。5.3试验步骤(1)菌悬液的制备取2支在TSB中培养18h24h的大肠杆菌培养物分别接种于I1TSB大三角烧瓶中，在361培养箱中培养18h24h,用TSB将其稀释为2108cfum1-2109cfum1菌悬液。(2)将12名15名志愿者随机分为两组，第一组使用参考样品，第二组使用试验样品(3)使用液体肥皂洗手Imin去除手表面污染的自然菌，然后用无菌纱布将手擦干。(4)将2108cfum1-2109cfum1大肠杆菌的菌

15、悬液放入一无菌容器中，(5)将手掌中间到指尖部位浸入菌悬液中，手指分开，停留5s,将手离开菌悬液，在空气中干燥3(6)干燥后立即将拇指与其他手指尖在含10m1TSB的平皿中搓洗Imin,取适当稀释度接种平皿。计数菌落数，作为试验前菌数。(7)不再重复污染手，立即进行消毒处理。(8)试验样品组：按说明书介绍的用量、作用时间和使用频率以标准的洗手方法(如图2-1)搓擦30s60s(卫生手消毒)或最长5min(外科手消毒)。以流动的自来水冲洗5s,抖掉手上残留的水。立刻将拇指与其它手指尖在含IOm1中和剂的平皿中搓洗Imin,做适当稀释后，分别取样液1Om1以倾注法接种两个无菌平皿，放37恒温箱培养48h,计数菌落数。1.掌心对掌心搓擦2.手指交错掌心对手背搓擦(9)参考样品组：对于卫生手消毒，取60%异丙醇3m1到入手心中，按标准的洗手方法用力搓擦30s。以确保手的所有部位均匀接触异丙醇。重复使用异丙醇按上述方法搓擦使总的搓擦时间为60s。对于外科手消毒，使用60%正丙醇3m1,按标准的洗手方法用力搓擦，当接近干燥时，再加3m1正丙醇搓擦。以保持作用3min。用流动的自来水冲洗5s,抖掉手上