细胞内氧化应激活性氧ROS初级荧光测定试剂盒产品说明书中文版主要用途.docx

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1、细胞内氧化应激活性氧（RoS）初级荧光测定试剂盒产品说明书（中文版）主要用途细胞内氧化应激活性氧（ROS）初级荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂二氯荧光乙酰乙酸盐，在细胞氧化条件下，产生荧光，来定量检测细胞内活性氧族的生成和增加的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。技术背景超氧自由基阴离子（superoxideradica1：O2）过氧化氢（hydrogenperoxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxy1radica1：0H）、过

2、氧化基（peroxy1radica1；R00氢过氧自由基Chydroperoxy1;H00烷氧自由基（a1coxy!radica1）.氮氧基（niiricOxide；NO）、过氧亚硝基阴离子（PeroXyniIri1eanion；ONOO）次氯酸（hyoch1orousacid；HoC1）、半酸自由基（semiquinoneradica1单线态氧气（Sing1etoxygen）等细胞内活性氧族（ReaciiveOxygenSpecies;ROS）的产生和增多，将导致细胞哀老或凋亡。2,7-二氯荧光乙酰乙酸盐（2.7idich1orof1uOreSCeindiaCe1ate,DCFH-DA）一种

3、完全自由通过细胞膜的染色剂。一旦被过氧化氢、过氧化基、过氧亚硝基阴离子等氧化，便产生荧光。据此测定细胞内活性氧族的浓度。产品内容清理液（Reagen1A）亳升染色液（Reagen1B）微升稀释液（Reagen1e）亳升保存液（Reagen1D）受升产品说明书1份保存方式保存染色液（Reagen1B）在一20七冰箱里，严格避免光照；其余的保存在4C冰箱里，有效保证12月用户自备胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于细胞脱离完全细胞培养液（GMSI2052）：用于细胞操作所需的培养基15亳升锥形离心管：用于细胞操作的容器15亮升离心管：用于细胞染色的容器血细胞计数仪：用于细胞计数台式

4、离心机：用于沉淀细胞细胞流式仪：用于细胞荧光分析（共聚焦）荧光显微镜：用于观察荧光细胞荧光分光光度仪或衡标仪：用于定量检测荧光细胞实验步骤一、间接法实验开始前，将一20冰箱里的试剂盒中的染色液（ReagentB）置入冰槽里融化，稀释液（ReagentC）放进37C恒温水槽里预热。然后移出XX微升染色液（ReagentB）到新的1.5亳升离心管，加入xx微升稀释液（ReagentC）,混匀后，标记为染色工作液，置入暗室里。然后进行卜列操作。1 .准备1瓶25cm2细胞培养瓶的待测细胞2 .小心抽去细胞培养液3 .加入XX亳升清理液（ReagentA）到细胞培养瓶，覆或培养瓶表面4 .小心抽去清理

5、液（ReagentA）5 .加入1亳升用户自备的胰蛋白醉乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面6 .置入37X:培养箱1分种7 .振动培养瓶，使细胞脱落8 .加入4亳升用户自备的完全细胞培养液9 .移入15亳升锥形离心管，充分混匀（注意：悬浮细胞直接从这一步骤开始）10 .移取10微升在血细胞计数仪上进行细胞计数11 .移出IXIO6细胞到新的15受升锥形离心管12 .放入台式离心机离心5分钟，速度为30Og13 .小心抽去上清液14 .加入XX亳升含有染色液（ReagentB）和稀释液（ReagentC）的染色工作液，轻柔混匀15 .放进37C恒温水槽孵育20分钟，避免光照16 .放入台式离心

6、机离心5分钟，速度为30Og17 .小心抽去上清液18 .加入预冷的XX微升保存液（ReagentD）,轻柔混匀细胞颗粒群19 .放进冰槽里20 .选择下列方式之一进行操作：（A） 即刻进行细胞流式仪分析：波长488nm氢离子激光，观察50000个细胞以上一一（B） 或使用（共聚焦）荧光显微镜观察（定性检测）：1）移取10微升上述细胞悬液到载波片上，盖上盖玻片2）激发波长49Onm,散发波长53Onm（C） 或使用荧光分光光度仪检测（定量检测）：1）移取400微升上述细胞悬液到1亳升比色杯2）加入XX微升保存液（ReagentD）3）上下倾倒混匀数次二、4）放进荧光分光光度仪：三、直接法实验开

7、始前，将一20匕冰箱里的试剂盒中的染色液（ReagentB）置入冰槽里融化，稀释液（ReagentC）放进37P恒温水槽里预热。然后移出XX微升染色液（ReagentB）到新的1.5亳升离心管，加入XX微升稀释液（ReagentC）,混匀后，标记为染色工作液，置入暗室里。然后进行下列操作。1 .准备1个细胞培养24孔板的待测细胞，细胞铺满率达70%（注意：可以使用载玻片,载玻片培养皿,35mm培养皿,和其它培养孔板，见注意事项4）2 .小心抽去细胞培养液3 .小心沿着孔壁加入XX微升含有染色液（ReagentB）和稀释液（ReagentC）的染色工作液到1个细胞培养孔，覆盖培养孔表面4 .放进

8、37*C细胞培养箱里孵育20分钟5 .小心抽去含有染色工作液的细胞培养液6 .小心沿着孔壁加入XX微升37P预热的保存液（ReagentD）到细胞培养孔7 .选择下列方式之一进行操作：（A）使用倒置荧光显微镜观察（定性检测）：（8） 使用荧光酶标仪检测（定量检测）：注意事项1 .本产品为50次（24孔细胞培养板）或25次（1亳升规格）操作2 .操作时，须戴手套3 .孵育时，必须避免光照4 .本产品适合各种规格的培养细胞：载玻片，载玻片培养皿，35mm培养皿，和各种培养孔板，须相应调整操作用量:操作容器操作用量我玻片IOO微升我玻片培养皿1毫升35mm培养皿1亳升96孔培养板100微升48孔培养板200微升24孔培养板500微升12孔培养板I毫升6孔培养板2毫升25cm2细胞培养瓶3品升5 .建议细胞染色完成后，即刻进行细胞荧光分析6 .本公司提供阳性对照甲茶醍溶液，观察细胞荧光增强现象7 .本公司同时提供细胞内活性氧高质荧光测定试剂盒（MBIOoI6.1）,满足不同用户需求8 .本公司提供系列活性氧分析试剂产品质量标准1 .本产品经鉴定性能稳定2 .本产品经鉴定荧光清晰