DB6505T 0952023驴人工授精技术操作规程.docx

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1、ICS65.020.30B41DB65O5市地方标准DB6505095-202320231230实施驴人工授精技术操作规程2023-11-30哈密市市场监督管理局发布-X-X-刖本标准根据中华人民共和国国家标准GB/T1.1-2009标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写给出的规则起草。本标准由哈密市畜牧工作站首次制定。本标准由哈密市农业农村局归口。本标准起草单位：哈密市畜牧工作站。本标准主要起草人：罗生金、黄浩、张磊、克热木司马义。驴人工授精技术操作规程1范围本标准规定了驴人工授精的术语和定义、器材准备、采精、精液品质检查、精液稀释、母驴发情期鉴定、输精、妊娠鉴定、繁殖评价的要求。本标准适

2、用于驴鲜精人工授精技术应用。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB18596畜禽养殖业污染物排放标准NY/T388畜禽场环境防量标准DB65/T3649-2014马人工授精技术操作规程3术语和定义下列术语和定义适用于本规程。3.1 人工授精用器械采集公驴精液，经检查处理后再用器械把精液注入到发情母驴子宫腔内，以代替自然交配，使其受孕的一种方法。3.2 台驴选取发情母驴保定好用来引诱公驴爬跨后人工采集精液的驴。3.3 精子活率在36C38环境下，镜检呈直线前

3、进运动的精子数占精子总数的百分比。3.4 精子密度每毫升精液中所含的精子数。3.5 精子畸形率精液中畸形精子数占总精子数的百分比。3.6 精液稀释在精液中加入一定量按特定配方配制稀释液、适宜于精子存活并保持精子活力。3.7 发情鉴定通过外部观察、直肠检查、试情或B超等方法对母驴发情情况进行判定。3.8 B超利用B超技术对驴的发情和妊娠进行鉴定。3.9 卵泡卵巢皮质内由一个卵母细胞和其周围许多小型卵泡细胞所组成。3.10 排卵指成熟卵泡发育成熟后，卵泡破裂，卵细胞从卵巢排卵窝排出的过程。3. 11声像图指利用B型超声仪器，将回波信号转换成高频率电信号，通过显示系统以波形、声音或光点阴暗的形式显示

4、被检部位二维断层图像或切面图像。3.12 保定以人为器械或化学药物控制动物行动。4器材准备3.13 材准备见附录A3.14 材消毒4. 2.1假阴道消毒依次用苏打液、温开水、氯化钠液冲洗，再用干净纱布擦净后，用75%酒精棉球消毒。4.2.2 镜子、输精器和各种玻璃器材消毒用苏打液、温开水洗净，再用高压消毒30min后，放入电热鼓风干燥箱里进行烘干处理。4.2.3 盖玻片、载玻片盖玻片、载玻片应一次性使用。4. 2.4凡士林罐置于水中煮沸消毒30min,氯化钠液现配现用，连同盛装容器一同置于水中煮沸消毒15InirU5采精4.1 采精场地应在宽敞安静、平坦干燥、防滑、防风洁净的场地采精。4.2

5、台驴的选择与保定台母驴应处在发情旺期，体格健壮、无病而温顺的母驴。将台母驴保定在采精栏内。4.3 假阴道的准备将内胎内膜套装在已消毒的假阴道上，调温、调压、涂润滑剂：先灌入1500In12000m1的42C温水，用温度计测试假阴道内壁的温度，保持在3941C之间的最佳温度，然后吹气加压，根据驴阴茎大小粗细合理调整气压，使采精筒大口内胎缩成三角形为宜，最后用玻璃棒蘸润滑剂涂抹至假阴道内壁的前1/3处。4.4 采精操作5. 4.1将公驴牵至采精场，以台驴刺激其性欲。清洗公驴外生殖器，阴茎勃起后，用温热的2%碳酸氢钠液擦洗生殖器及包皮，温开水冲净后用干净纱布擦干。5.4.2采精时，采精员右手持假阴道

6、把柄并靠在右臂肘处，公驴爬跨时立即站于台驴右后侧，左手辅助顺势轻托公驴阴茎，导入假阴道。假阴道以3035角度固定于台驴尻侧；公驴射精后，立即将假阴道的气孔打开，慢慢放气。假阴道随之逐步竖起，使全部精液流入集精杯内。以纱布封口，送入精液处理室。6精液品质检查取下集精杯,用4层无菌纱布或专用滤网过滤除去胶状物,在35C38C环境下进行备查。6.1 外观检查6.1.1 射精量用量杯测量精液量。6.1.2 色泽正常情况下呈淡乳白色或浅灰白色。带有淡绿色、淡红色、黄色、红褐色等异常颜色的精液应废弃。6.1.3 1.3气味新鲜精液略有腥味，气味异常的应废弃。6.2 显微镜检查载物台温度应保持35C380C

7、o检查时用移液枪蘸取一小滴精液，放在载玻片上加盖玻片，在400倍600倍率显微镜下观察，每个滴片不得少于3个视野，上下调节旋钮，观察不同层次内的精子运动情况，求其活力的平均值。6.2.1精子密度检查平时用目测法估测精子密度为“密”、“中”、“稀”、“无”四级。“密”即精子之间几乎无空隙，精子含量每亳升2亿以上，“中”即精子间隙相当一个精子长度，每亳升含精子2亿；“稀”即精子间隙超过一个精子长度，每亳升含精子1亿以下；“无”即无精子，应废弃。6.2.2精子活力评定100%的精子做直线前进运动者为一级；80%为二级;60%为三级；40%为四级；20%以下者为五级。三级以上者可用于输精。6.2.3存

8、活时间检查6.2.3.1在使用保存的精子前应对保存的精液进行精子活力评定。6. 2.3.2保存在48温度条件下，精子存活时间应在24h48ho常温保存精液，精子活率20.6,保存时间48ho6.3精液品质检查记录精液品质检查记录表见附录及7精液的稀释7.1 精液稀释液的配制稀释液的配制，可参照DB65/T3649-2014,做到现配现用。7.2 稀释倍数根据精液密度及活率确定适宜的稀释倍数,一般不超过4倍。精液稀释后,精子数不少于5000万个/m1。7.3 精液稀释操作稀释液用前20min置于36C38水浴锅中预热备用。将精液和稀释液作同温处理。稀释时，将稀释液沿杯（瓶）壁缓缓加入精液中，然后

9、用无菌玻棒轻轻搅拌，使之混合均匀。稀释完毕后，必须作活力检查，如稀释前后活力一样，即可进行分装与保存。在进行高倍稀释时需分两步进行，先进行低倍稀释，数分钟后再作高倍稀释。7.4 精液的分装、保存和运输7.4.1 分装将稀释好的精液用塑料细管，按每次每头输精剂量进行分装。7.4.2 保存将盛精液的塑料细管置于冰箱内，在40C8C的低温状态下保存。7.4.3 运输在运输途中，要继续维持低温，避光、防震和碰撞。储精器应附标识卡，注明公驴号、采精日期、精液剂量、稀释倍数、精子活力、密度和输精量数等。8母驴发情期鉴定8.1 外部观察法发情母驴常表现四肢撑开直立，耳向后背，头颈伸直，上下颌开合发出“吧嗒吧

10、嗒”声。接受爬跨或用手压母驴背部时，出现“拌嘴”，同时有口涎流出。主动接近公驴，塌腰叉腿，阴门红肿，阴核闪动，频频排尿，并将臀部转向公驴，阴道不断流出黏稠液体，为最佳配种期。8.2 直肠检查直肠触摸卵巢，卵泡发育侧增大并下沉,卵泡直径35mm50mm。卵巢壁薄，触诊弹性强、波动明显，有一触即破之感；排卵窝浅。触摸卵巢，部分母驴有疼痛感，有不安或回头看腹的表现。8.3 B超检查法母驴发情后，运用B超适时监测卵巢的卵泡发育情况，一般早晚检查。当卵泡直径20mm-30Inm时，间隔24h检查一次；直径23OnIm时，间隔时间IOh12h,检查1次；卵泡直径达到35mm开始输精直至排卵，见附录D。9输

11、精9.1 输精前的准备9.1.1 器材的消毒输精前所有的器材要消毒灭菌，对于输精器蒸煮或在高温干燥箱内消毒。输精器以每只母驴准备1支为宜，当输精器不足时,可在每次用后先用蒸储水棉球擦净外壁,再以酒精棉球擦洗，待酒精挥发后再用生理盐水冲洗3次5次，方可使用。9.1.2 操作人员的消毒输精人员穿工作服，手指甲剪短磨光，手洗净擦干，用75%酒精消毒，再用生理盐水冲洗。9.1.3 母驴保定把待输精母驴保定在输精架，若没有输精架，可采用六柱栏保定.9.1.4 1.4确定输精量和输精次数鲜精和冷藏精液输精剂量为15m120m1每头，输入有效精子数25亿，每日或隔日1次。9.2 输精操作9.2.1将处于适配

12、期的母驴保定好，对其外阴部进行消毒，再用沸后温水冲洗，并用消毒纱布擦干。9 .2.2输精员手臂用消毒液消毒,再用沸后温水冲洗,用消毒纱布擦干,穿戴一次性长臂手套。10 2.3输精输精员站在母驴后方偏左侧，右手提输精枪，五指形成锥形，缓慢插入母驴阴道内，将输精枪顶端插入子宫颈口内5Cm6Cm处，左手握注射器并抬高，缓缓将精液推入排卵侧母驴子宫内。左手慢慢拔出输精枪，右手缓慢从母驴阴道内抽出，持续轻揉子宫外阴。9.3 填写记录做好母驴配种记录，配种记录表见附录C。记录内容包括母驴号、毛色特征、腰情、产驹时间、卵泡超声检查、输精时间、公驴及精液信息、输精操作人员等。9.4 废弃物处理输储精后的废弃物

13、处理执行GB18596的规定。10妊娠检查10.1 直肠检查将母驴保定，用0.1%新洁尔灭清洗外阴，并用沸后温水冲洗。检查人员剪短并磨光指甲，洗净手臂，戴一次性手套，五指并拢成锥形，轻轻插入直肠内，掏出蓄粪。通过直肠触摸到卵巢，沿着输卵管及阔韧带下移就可以摸到子宫角和子宫体，触摸时感到子宫体内壁组织增厚，两角变粗短，质地硬而圆滑，可判断为早期妊娠。随着妊娠期延长可触摸到胎胞。10.2 B超检查10.3 2.1B超操作技术员右手戴长臂手套并涂抹润滑剂，按直肠检查的方式清除直肠内粪便。清除粪便后，五指握紧探头以圆锥形缓慢旋转由肛门进入直肠，而后轻柔的左右移动探头寻找膀胱，在B超仪显示器上看到膀胱后

14、顺膀胱方向前进寻找子宫壁并观察整个子宫壁的状况。当深入至直肠狭窄部肠管处（即子宫角分叉处）时，将探头贴紧肠壁缓慢向左上方向旋转，观察子宫角横切面，而后顺子宫角方向继续向左上方观察左侧卵巢,直至卵巢影像消失后原路返回至子宫角分叉处,再按同样的方法，向右上方旋转观察右侧子宫及卵巢。10. 2.2声像图显示在母驴输精排卵后12d13d,利用B超直肠扫描子宫，妊娠则反射为圆形清晰的胚泡声像图案。见附录E。11繁殖评价11.1 情期受胎率情期受胎率按式（1）计算。F=F.1I100%（1）式中：F一情期受胎率，%;F.1一一同期受胎母驴数，头；I一一情期数同期输精，头次。11.2 受胎率受胎率按式（2）

15、计算。C=C1I1100%（2）式中：C一一受胎率，%；C1一一同期受胎母驴数，头；I1一一同期输精母驴数，头。11.3 繁殖率繁殖率按式（3）计算。R=C2I2100%（3）式中：R繁殖率，%；C2一一同期产驹母驴数，头；12一一同期应繁殖母驴数，头。11.4 繁殖成活率繁殖成活率按式（4）计算。G=C3I3100%(4)式中：G一一繁殖成活率，%；C3一一同期繁殖成活幼驹数，头；13一一同期繁殖幼驹数，头。附录A（资料性附录）驴人工授精工作常用器具配置表序号设备材料名称规格单位数量序号设备材料名称规格单位数量1采、输精器材2.16玻璃量杯100m1个21.1采精器械套32.17搪瓷杯500m1个21.2输精器械套42.18搪瓷方盘40cm*50cm个21.3一