IVD试剂性能评估灵敏度.docx

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1、IVD试剂性能评估-灵敏度灵敏度评估资料是评价拟上市产品有效性的重要依据，也是产品注册所需的重要申报材料之一0灵敏度的定义可以理解为体外诊断试剂对待测样本所能检测到的最小量，有两个含义：最小浓度或含量的变化可以引起检测信号的显著变化；具有适当的限度检测出区别于零的待测物的最小浓度或含量。分析灵敏度与功能灵敏度分析灵敏度体外诊断试剂的分析灵敏度也称为检测限，指检测方法可检测到的最低检测浓度，即在统计学意义上能与零剂量区别的量。一般用95%可信限计算：重复测定空白样本20次，计算20次反应测得的均值（X）和标准差（SD）,以A+2SD（夹心法）或X2SD（竞争法）计算出相应的浓度，即为体外诊断试剂

2、的分析灵敏度，也是注册资料所需提供的内容。分析灵敏度评估的具体方法，如下：1 .分析灵敏度评估需要的材料和基本要求空白样本的制备：空白样本应不含被测物，但其基质应与带测定常规样本相同。如空白样本难以获得，可采用5%牛血清或人血清白蛋白溶液，或根据具体项目选择相应基质的样本，但是需要注意的是，要将基质效应减到最小。2 .实验方法在一次运行中重复测定空白样本20次。3 .数据处理（1）数据记录：将结果记录于表格。如果检测系统对于低于零的报告为零，应记录初始响应值。（2）数据统计：计算20次平均值：和标准差SD标准差计算公式：XJ-XnAS=4 .结果报告分析灵敏度=X+2SD(夹心法)或X-2SD

3、(竞争法)功能灵敏度体外诊断试剂的功能灵敏度与精密度相关，是以天间变异系数(CV)为20%时所对应的检测限样本具有的平均浓度。计算方法为：将低值样本倍比稀释后重复测定10次以上，计算每个低值样本检测信号的均值、标准差和变异系数(CV),选择CV大于20%时所对应的低值样本平均浓度，这就是体外诊断试剂的功能灵敏度。天间精密度估计值的计算公式，如下：Xs0求出均值：n计算标准差s=V(%K57)计算变异系数C=-100%Xn为累计实验的天数分析灵敏度(ana1ytica1SenSitiVity)与功能灵敏度(functiona1SenSitiVity)均可作为测定方法检测某物质的灵敏度,但两者所适

4、用的范围与表达的临床意义有差异:分析灵敏度又称检测限量(Iimitofdetection),是基于零浓度基础上,用于区分从无到有的分析能力.功能灵敏度又称临床灵敏度(c1inica1SenSitMty),是基于低浓度的基础上,用于区分从有到无的分析能力.该值的确定是通过标准品(如SI)作梯度稀释,采用同一台仪器,同一批号试剂,同一标准曲线,每天1次,每次3遍进行测定,共测3周以上时间的数据,根据批间变异系数(CV)20%时的最大稀释管浓度作为功能灵敏度.最通俗的比喻为:飞机从遥远的地方向你飞来,从看不见到看见这一点,是区分从无到有的分界点为“分析灵敏度”;而你站在飞机场,看着飞机由近到远飞去,

5、从看得见到看不见,即从有到无的分界点为“功能灵敏度”.一般分析灵敏度比功能灵敏度高10倍左右。如何提高体外诊断试剂的灵敏度？影响灵敏度的因素(1)抗原和抗体的亲和性：两者的亲和性越高，灵敏度越高。(2)抗体的标记方法：标记信号物的放大效应可以提高灵敏度，如化学发光、胶体金、胶乳标记等。(3)抗原抗体反应时间：反应时间的适当延长，可以使抗原抗体的结合反应达到反应平衡，进而灵敏度也提高了。如在化学发光免疫诊断试剂中，抗原与抗体在液相中充分混合至少反应10分钟以上，有时还需要震荡反应以提高反应速率，这样比较容易获得较高灵敏度。(4)包被抗体与标记物的量：在达到反应平衡的条件下，可以适当增加包被抗体和

6、标记物的浓度，来提高灵敏度。如NC膜上的包被抗体、胶体金标记抗体，微球标记的抗体等。但NC膜的抗体吸附量有限，可以通过优化标记来提高灵敏度。微球是以公家偶联的方式与抗体结合，其灵敏度较高于胶体金。提高灵敏度的方法(1)选择灵敏度更高的表标记材料胶体金是常用的标记物，但由于其具有较低的发光强度及较少的抗体吸附量，限制了胶体金免疫层析方法的灵敏度。而与抗体共价结合的材料，如锢系元素，量子点，叫咤酯，胶乳微球等，有利于提高体外诊断试剂灵敏度。(2)发展信号放大系统免疫层析技术灵敏度不高的原因主要是T、C线位置标记物信号不强，可以根据这一不足，优化放大系统的反应条件。有研究表明，通过添加银增敏剂到胶体

7、金免疫层析试剂条NC膜的方法可以提高检测灵敏度IO-IOO倍。另外，改变胶体金颗粒的大小，也可以提高灵敏度。(3)浓缩样品通过浓缩的方法增加样品的浓度，可以提高体外诊断试剂的灵敏度10倍左右。(4)选择优质的试纸条如在胶体金免疫层析检测方法中，不同的NC膜具有不同的孔径、疏水性、亲水性及其他性能的不同，会导致灵敏度的差异。(5)缓冲液体系合适的缓冲液体系可以稳定抗原抗体的结合能力及抗干扰能力，因此，合适的缓冲液体系也可以体外诊断试剂的灵敏度。参考文献黄杰，高尚先，张艳丽,等.体外诊断试剂注册检测的不同灵敏度概念之详解J.首都食品与医药,2009,16(14):6-6.张丽.关于体外诊断试剂质量

8、研究的建议J.中国生物制品学杂志,2006,19(5):548-549.张志清.体外诊断试剂性能测试的分析J中国医疗器械信息,2010,16(6):47-49.徐伟文.体外诊断试剂研制常用技术指标之分析性能评估J分子诊断与治疗杂志,2010,2(2):140-144.王景云.提高免疫层析试纸条灵敏度方法的研究D.南昌大学,2016.1OB(1imitofbIank)1就是我们通常讲的空白检测限。1OB指的是用空白样本去测试，在一定的概率下能测得的最高测量结果，请注意一定的概率。1OD(1imitofdetection)1就是我们通常讲的检测限，就不是用空白样本去检测了，是对低浓度的分析物样本进行测试，在一定的概率的条件下能测得的最低值。1OQ(1imitofquantitation)1就是我们通常讲的定量限，这个也是用低浓度的分析物样本进行测试得出的较低的值，这个值的准确性是有要求的，就是不光要能测到，而且还要保证结果是准确的。