氨基酸车间发酵作业指导书.docx

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1、氨基酸车间发酵作业指导书1 .目的为规范发酵操作工日常操作，安全生产，杜绝污染环境，保证正常生产，特制订本规范化操作规程。2 .适用范围氨基酸车间发酵工序3 .职责氨基酸车间技术员负责发酵作业指导书的编制及监督实施；发酵工段长负责协助车间对发酵作业指导书的修订，负责规程的具体实施情况监督；发酵带班长负责执行本操作规程，并且监督本班人员遵守操作规程；发酵工序操作工负责执行本操作规程，按照操作规程的内容进行操作。4 .设备规程4.1 岗位设备明细序号设备名称规格型号材质数量用途备注1发酵罐780m3碳钢12谷氨酸发酵2种子罐60m3不锈钢8培养二级种3种子罐90m3不锈钢4培养二级种4尾风罐70m

2、3碳钢2过滤尾风5流加糖罐IOOm3不锈钢8储存糖液6一级过滤器7m3不锈钢14过滤空气7二级过滤器不锈钢24过滤空气8消油罐3m3不锈钢2实消油9变频器380V560KW/14控制电机转速10油储罐3m3不锈钢2储存油11电磁流量计/12流加糖用12提升机0.5T/1搬运物品4.2设备的管理与维护4.2.1设备检查4.2.1.1罐内检查：根据设备实际情况每月维修人员和发酵人员共同检查一轮：风帽、搅拌齿、打沫齿、托板、挡板、夹板、联轴器、槽钢、稳轴板、轴套、各处紧固螺丝、罐皮腐蚀情况，搅拌轴的同心度，冷却管。4.2.1.2阀门检查：根据设备实际情况约每月检查一轮进料阀、流加糖阀、接种阀、加油阀

3、总风阀，放料阀，水阀，排风阀，氨阀，取样阀，顶风阀，汽阀等根据使用情况适时检修。检修要求：四氟乙烯垫平整光滑，阀头间隙小而均匀，阀座密封口光滑无破损，紧固螺丝及压垫牢固。4.2.13查罐注意事项:a查罐时，要切断搅拌电源，并挂警示牌，实施专人操作，专人监护，确认氨考克,汽考克排空后，挂警示牌，确认放料阀，排风阀关严，罐内洗净吹干，通风换氧。b.罐外系统（管路、阀门）采用非发酵时间的间隙，实施检查，检查的重点是阀头密封，管路焊口。c.罐内系统中冷却管的打压，控制压力0.40-0.60MPa之间。4.2.2过滤器4.2.2.1一级过滤器过滤棉的更换正常情况下每个一级过滤器的过滤棉的累积使用时间应W

4、3000小时，某段时间连续出现了染菌现象，也要考虑更换过滤棉，所以过滤棉使用时间要远远小于3000小时。4.2.2.2一级过滤器的灭菌灭菌前，全面检查各管道、阀门、压力表有无漏气、失灵堵塞等现象，发现问题及时修复。关闭总风阀和风阀，打开排污阀排压至0。打开汽阀，排尽管内冷凝水，开气阀向过滤器通蒸气，并同时打开风考克。排污阀排气畅通，表压升至0.18-0.2mpa、开始计时灭菌50-60分钟。待各考克排气畅通后，关小即可，以排污阀排气为主。灭菌结束后，关闭蒸汽阀，待过滤器压力小于风压后，缓慢打开风阀，打开考克,查漏，关闭风考克，关小排污阀，吹凉吹干过滤器。用手感排风阀无潮气证明风已吹干，关闭排污

5、阀，即可使用。4. 2.2.3二级过滤器的灭菌关闭风阀，打开考克、排污阀排空。打开蒸汽阀，排污阀，汽阀，考克排尽冷凝水后，缓慢稍开气阀。待各考克排气后，关小各排气阀，调整进气阀，控制表压0.08-0.12mpa,温度118-120oC,计时灭菌30-40分钟。灭菌结束，稍开风阀，关闭汽阀，关闭风考克，打开蒸汽考克。待过滤器吹干吹凉后，关闭各考克，开大风阀，即可使用。5.工艺操作规程5.1 工艺流程图空消一一接料一一降温一一参数复核一一接种一一发酵控制一一放罐5.2 空消5. 2.1空消操作方法：5.1. 1.1夹层排水：检查进出水阀，确认关严后，开排水阀，排净冷却管内降温水。检查进出水阀，确认

6、关严后，开排水阀，开夹层汽顶净冷却管内降温水。5.2. 12空消开始：确认进排风阀及总风阀关严，联系热电用汽，打开打料阀，关闭打料考克，通知配料进行消罐。5.3. 1.3微开尾风阀、流量计阀，打开底风阀，然后打开汽阀内层进汽，同时打开打料阀，通过连消管道向罐内进汽。5. 2.1.4待罐压升至0.18-0.22mpa时，关小打料阀（保持微开），稍开氨旁通阀考克,打料考克，接种阀考克，流加糖阀考克，油阀考克，顶风阀压力表考克，总风阀考克，取样阀，进行排气空消。5215打开顶风阀，关闭底风阀，打开放料阀，将罐内污水全部排到污水，严禁外排。5.2. 1.6通过放料阀上的考克确认污水排进后，关闭放料阀，

7、微开排污考克，打开底风阀，继续内层进汽。5. 2.1.7温度升至125C时，开始计时空消30分钟（罐压维持0.2mpa左右,温度130-140）,5.2. 18空消结束：空罐灭菌结束时，排净污水，并迅速通无菌风保压，准备进料。5. 2.2空消注意事项：5. 2.2.1夹层排水一定要彻底。5.2. 2.2空消开始前，要对总风阀，氨阀进行试漏检查。5.2.23各排气阀门及排气考克以排尽蒸偈水为原则，只要保证蒸汽流通，排气越小越好。目的是节约蒸汽，减小噪音。5.2.2.4为保证灭菌效果，空消过程每20分钟排污一次，同时多次认真检查各考克排气情况，确保各处的考克排气畅通，杜绝死角。5.2.2.5整个空

8、消过程，必须设专人监护，防止汽压波动造成灭菌不彻底或压力过高造成危险事故。5.2.2.6开进汽阀时一定要缓慢，以防震裂冷却管。5.2.2.7确认总风阀关严并且试漏，以防损坏风过滤器。5.2.2.8严控温度及压力，不能向正在空消的罐上冲水。5.2.2.9排污完成后，要先打开底风阀，再开放料阀，排污考克，以防有废液排出去污染环境。5.3接料5.3.1接料操作方法：连消接料开始：空消结束，依次关闭汽阀（中间考可打开），氨旁通阀考克，底风阀打料阀考克，接种上阀（考克）取样阀，压力表考克，放料阀考克。打开外放料阀，向污水排压，确认排完污后，关闭放料双阀，打开排污考克。待罐压降至O.Impa时，关闭放料阀

9、，排水阀，总风考克，压力表考克，油阀考克。打开总风阀，底风阀，打料上阀，放料阀考克（查漏），关闭顶风阀及考克，然后通知配料连消进料。换入无菌风后，通过调整底风阀和排风阀，使罐压稳定在0.05-0.1OmPa。接料结束：接到配料人员的压料通知后，密切注意压料情况，待打料考克排汽后，确认压料完毕，及时通知配料人员停汽，并及时关闭打料阀，打开打料上阀考克进行试漏。5. 3.2接料注意事项：进料时，料阀必须全部打开。换风至降温前后，发酵罐压力波动较大，监护人要特别注意调节底风阀罐压稳定在O.05mpa,严禁形成负压导致染菌或安全事故。打料至接种前，尾风排量以便于调节罐压为宜，排放量越小越好。打料注意事

10、项：一定要等罐压低于风压时，才能开总风阀，防止蒸汽倒如风过滤器。在罐压降至0.1-0.15mpa时，就应稍开底风阀，压力缓慢降至0.05mpa,不能在压力降至0.05mpa后，才猛开底风阀，这样既会缩短滤芯的使用寿命，又会造成染菌,还会跌压。开降温水要慢，并且要关注罐压防止突然跌压或形成负压。打料完毕后，一定要等配料关闭汽阀后，再关打料阀，防止压力骤升发生危险，同时应防止回料。水降温时，罐皮降温水不要开的过大，防止冲入密封而染菌。林风不同时期发酵罐所需风量是不同的，风量的高低是通过排风阀及风流量计下方的阀门来调节的。5.4降温待发酵罐来料后，罐温降至80以下，缓慢打开出水阀（一总二分），缓慢打

11、开总进水阀及下分进水阀，进行降温争取降到接种温度35-40oCo5. 5参数复核开启搅拌：压料完毕，联系电工开启发酵罐搅拌，变频调至40HZ,继续降温。(2)取无菌样：缓慢开起发取样口汽阀，对取样口灭菌5分钟，使用无菌试管按照无菌操作要求，取无菌培养基2-3川1,送化验室进行无菌检测。(3)调节PH：待培养基温度降至35-40,关闭降温水阀，打开氨阀，开氨阀之前,必须检查氨管道排空考克关闭后方可开启氨阀。调PH6.8-7.0,然后关闭氨阀。5.6 接种5. 6.1接种前的准备：打开相连种子罐和发酵罐下接种阀考克，缓慢开启蒸汽阀，将管道内残液排净，缓慢打开相应种子罐和发酵罐下接种阀，调节各接种阀

12、考克排气量，以排尽蒸镭水为原则，排汽要尽可能节约，压力0.25-030pa,灭菌40分钟以上，中间过程多次检查考克排汽情况，杜绝死角。A复核发酵罐培养基的PH值6.8-7.0,温度32.5-34度根据设备实际情况。B发酵罐罐压0.05mpa,准确标风4500-5500,并重新调整底风阀将罐压稳定在0.05MPa待接种。C种子质量鉴定：对种子镜检，平板，PH值，OD值进行复核，确定种子质量合格，才能使用。6. 6.2接种：A管道消好准备工作做完，俩人合作，先将发酵罐和种子罐所有接种阀门的考克关闭,然后关闭汽阀。整个过程快而准确，确保管道保持正压。B打开发酵罐上接种阀，并通知种子室人员，关闭种子罐

13、排风阀，打开种子罐上接种阀，用风将种子液接入发酵罐。C接种完毕，通知种子是人员并及时关闭接种阀，打开考克，缓慢开启蒸汽阀对接种管道进行短时间灭菌，然后关闭蒸汽阀。7. 6.3接种注意事项:种子罐号，一级种子标识，保压时间及异常情况必须在发酵记录表中记录清楚。种子罐上罐批次，根据发酵罐发酵时间，确保发酵用种，又要避免种子罐过长保压。所有废液一律排到收集槽内不准外排。发酵罐接种过程必须连续通氨，维持PH6.8-7.Oo接种完毕及时调大底风阀（目的是维持通风量）。消接种管道，排污考克不能够开的过大，防止废液溅出废液槽而污染环境。开接种下阀，一定要缓慢，待考克排出的全为蒸汽时，再完全打开此阀，以防因接

14、种阀漏而导致染菌。接种时复核PH6.8-7.0,温度32.5-34。作好种子的复核工作，不能将染菌种子接入发酵罐。5.7 发酵控制5.7.1温度的控制我们根据工艺的要求，结合现有设备配置情况，总结出一个比较合适的温度控制模式。在现有设备冷却条件可以满足的情况下，应遵循以下模式进行温度控制。0小时一OD值1.25时，32.52C,OD值21.25时，36.52,一小时后382C5.7.2PH的控制目前，谷氨酸发酵生产的PH控制，我们采用流加液氨（或气氨）进行控制。以台式PH计检测：运行过程：7.00.2;控制要点；整个过程PH控制必须平稳禁止忽高忽低。前期过高过低影响菌体生长，中后期过高过低影响菌体耗糖和产酸。PH值测定必须真实，取样口部位的料液必须排尽后才能测定，同时注意节约料液。PH值控制准确的前提下，近可能减少测定次数。测样完毕，需用消毒液对漏斗进行灭菌。5.7.3风量的控制谷氨酸发酵的效率，在菌体生长期，希望糖的消耗最大限度地用于合成菌体，谷氨酸生成期，希望糖的消耗最大限度地用于合成谷氨酸。因此，在菌体生长期，供氧必须满足菌体呼吸的需氧量，菌体生长速率最大值。若菌体的需氧量的不到满足，菌体生长缓慢，菌体密度较低。但在菌体生长期供氧远远大于需氧，也会抑制生长,最终影响到谷氨酸的生成。与菌体生长期向比较，谷氨酸生成期更加需要大量的氧,谷氨酸发酵在细胞最大呼吸速率时，谷氨酸产量