仪器分析检测学习摘抄笔记 很多小技巧.docx

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1、PH计测定的含有有机相的PH值都不靠谱。一般情况下，PH电极里面的保护液都是盐的水饱和溶液，测有机物的时候电解什么的都不是正常规律，根据PH判定没根据。乙懵的碱性强度对硅羟基没有任何威胁，就算PH值到9或者更高，那也只是因为浓度比例太大。一钥匙的蜂蜜比一加仑醋能吸引更多的苍蝇。分析纯的乙懵是比色谱级的在低波段吸收更大，不过也只是国产试剂才这么明显，好多假冒的默克的乙牌都是进口的工业级的分装，除了机械杂质和偶尔有鬼峰，整体品质比国产色谱级的还好用一些。另外，流动相和溶解稀释液里面的含氧量也会引起本底的变化，楼主的情况也许是冤枉了试剂也不一定。因为流动相大部分都会脱气或有在线脱气机，但是样品溶剂脱

2、气的不多，大家普遍不太注意。5YUANSI05A0052154615845055352YUANS102A000232549320424085容量因子K”是指在一定温度和压力下，组分在两相间分配达平衡时，分配在固定相和流动相中的质量比。它不仅随柱温、柱压变化而变化，而且还与流动相及固定相的体积有关。主要的影响因素是固定相性质和流动相组成。通过改变色谱柱，流动组成，温度等都会引起容量因子的变化，一般复杂成分要求IVKV20,组成简单的可以调节为2vK25分配系数K,容量因子k与保留时间之间有如下关系：k=K=,fR=kt0o上式说明容量因子的物理意义：表示一个组分在固定相中停留的时间(tR)是不保

3、留组分保留时间(t)的几倍。k=0时，化合物全部存在于流动相中，在固定相中不保留，tR=O:k越大，说明固定相对此组分的容量越大，出柱慢，保留时间越长。容量因子与分配系数的不同点是：K取决于组分、流动相、固定相的性质及温度，而与体积Vs、Vm无关；k除了与性质及温度有关外，还与Vs、Vm有关。由于t”R、t较Vs、Vm易于测定，所以容量因子比分配系数应用更广泛。分配系数K和分配比k的关系：K=kB为相比率，是反映各种色谱柱柱形特点的又一个参数，对填充柱其B值一般为635,对毛细管其值为60-600o在反相高效液相色谱分析中，选择正确的缓冲液PH值，对可离解的化合物分析的重现性十分重要，不恰当的

4、PH值可能导致不对称峰，宽峰，分裂峰或肩峰，而尖锐的，对称的峰是定量分析中获得低的检测限以，两次分析之间较低的相对标准偏差(RSD)和保留时间的高重现性的前提。我们将讨论在使用缓冲液时如何选择缓冲液的PH值，以及如何选择正确的缓冲体系。什么时候需要缓冲溶液？在反相液相色谱分析中，流动相的PH值一般在2.5-7之间，当被分析物在反相条件下可离解，或样品的PH值在2.57之外时，就需要缓冲液。在反相条件下可离解的化合物一般都有氨基和竣基，他们的Pka在111之间，选择正确的缓冲液PH值可保证可离解的官能团以一种形式存在，离子形式或中性化合物的形式。如果样品的PH值对柱子有伤害，则缓冲溶液可使其变温

5、和从而减小其危害。如何选择缓冲液PH值在选择缓冲液PH值之前，应先了解被分析物的Pka,高于或低于Pka两个PH值单位的，有助于获得好的、尖锐的峰，从HH公式：PH=Pka+1og(A-A)得知，溶液PH值高于或低于Pka两个单位，化合物中99%以一种形式存在，而一种形式存在的化合物才能获得好的尖锐的峰。当化合物只有氨基时，缓冲体系的选择十分简单，大多数氨基化合物在PH值小于9时都被质子化，所以所有PH值在7或更低的溶液均适合应用，你也许会问水的PH值大约是7,为什么还用缓冲盐，因为缓冲盐有助于增加方法的可靠性，以及色谱峰的尖锐性，PH值的降低有助于氨基化合物保留的减弱，减小化合物与硅胶表面硅

6、羟基的作用，而使峰更尖锐，从表1可值，任何缓冲液均可应用于氨基化合物的分析，但我们认为PH值等于3的磷酸钾盐最适合用于氨基化合物的分析。在上面两个例子中，PH=3的磷酸钾盐都能获得良好的应用，在一般情况下，它是含竣基和氨基化合物分析中最好的缓冲液，并且我们认为在氨基化合物分析中钾盐比钠盐更好。为离子对试剂选择缓冲液为应用离子对试剂的方法选择缓冲液的过程是相似的，离子对试剂例如四丁基铁的盐，十四烷基磺酸钠等，在流动相中可与化合物中可离解的官能团配对，在缓冲液中以离子形式存在的化合物就需要应用离子对试剂。应用缓冲液PH值来调节方法选择性如前面提到的，氨基化合物的保留随PH的减小而降低，这个特性可以

7、用来调节方法的选择性，如果两个化合物共流出，一个含有氨基，适当改变PH值就可以用来分离这一物质对。由于可离解化合物的选择性依靠PH值，所以变化PH值也可以用来鉴别未知化合物的官能团，如果PH值变小，出峰便快，则化合物中可能存在氨基，当PH变大,化合物出峰很快,或流出在死时间处，化合物可能是一种段酸，因为峻基离子化后流出大大快于比质子化的中性化合物。总结正确选择缓冲溶液在反相液相色谱方法中对于优化尖峰，捡出限，以及获得稳定的保留时间十分重要，如果你知道化合物官能团信息和化合物的Pka值这一过程将十分简单。能够开发一个新方法对于HP1C的初学者来说有很大吸引力，但是新手往往会感觉无法下手，其实完全

8、不是那么一PI事，只要你有一台双泵或者四元泵的HP1C,看了本文，就可以上手去做了。首先我们要保证的一个根本原则是：我们要做出来的是一个有稳定，明显的分离，并且在检测器的响应明显，有定量理论基础的方法。这句话中的“稳定”、“明显”是必要条件，有一点不达标方法就没意义。然后，对于新手来说，最好遵守这样一个小原则：我们从不新建，我们只是套用。你已经接触到或看到的HP1C检测条件，反相的条件下，有机相不外乎甲醇乙Bt,水相梢微复杂点，但也就是那么几套缓冲液或酸的体系。那么我们建立方法时候如何选择它们呢？它们都有什么区别呢？听我一一道来。先讲有机相，选择甲醇或是乙月青？在一般条件下，我给你这样的建议：

9、你平时用甲醇多，就用甲醇的条件；平时用乙睛多，就用乙H青的条件。建立的方法，少不得自己要用，当然是自己越方便越好。如果能使用和其他常做的样品一样或相似的条件,会省下很多工作量和时间。甲醇和乙懵是的主要区别，就是乙懵价格贵，毒性大，但是洗脱能力强一通俗点讲，就是把柱子里面的样品冲出来的能力比甲醇高，比如50%的甲醇水和35%的乙睛水做同样的样品出峰时间可能差不多，当然，有的样品也许出现相反的情况，我们只讲大多数。甲醇的特点就是便宜，毒性相对小，洗脱力差。还有一个要注意的是，甲醇在低波长（低于21Onm）的检测条件下，一般是不用的。因为本身有紫外吸收，会让你的基线很难看一你不用紫外或DAD检测器？

10、哦，当我没说。至于甲醇是质子体，乙般不是的话题，我们不展开说原理和区别了，一般来说知道有这回事就好，那就是有时用乙懵分不开或峰型难看的样品，换了甲醇会好很多，这样的样品并不多见，大多数时候水相会承担甲醇的这个作用。水相的体系选择要复杂点，一般常见的酸性体系有磷酸，甲酸，乙酸，三氟乙酸，高氯酸等，由于现在的色谱柱绝大部分都是硅胶填的，碱性的液体会跟硅胶起作用，所以碱性的流动相体系不常用，很特别的色谱柱广告宣传可以在PH=I2下使用，那是针对特别的样品了。缓冲盐体系有磷酸缓冲盐体系，三乙胺缓冲体系（一般用乙酸或磷酸调整其pH）,乙酸钺缓冲体系等。其他的就是离子对试剂，X烷磺酸纳，四丁基X铉之类，也

11、算他们是缓冲盐吧。注意，缓冲盐的适用波长参照其对应的酸，另外，缓冲盐一般都不适用于液质联用和蒸发光散射检测器。下面是重点内容了，先声明，我介绍的是自己的经验，有大方向不对的请多指正，但是化学品结构千变万化，有个性的样品也不是没有，不可能有个统一的理论适用于所有样品，因此个案我就抛在一边，你运气不好遇到了无非多试几个流动相体系而已，不要跑来找我算账，说我文章里怎么怎么说了，你听了我的话浪费感情的话，我不承担责任的。什么情况下用酸，用什么酸？回答：对于有酸碱性的样品，酸都是很好的选择。选择的原则就是，保证PKa和流动相内的PH相差2以上（我们仪器信息网有个常见化合物PKa数值表，Pdf文件，五星推

12、荐）。忘记PKa是什么东西的同学们，如果不想看书的话，我告诉你我的理解：就是保证我们的酸比样品的酸性强很多或弱很多，如果样品是碱性，那么要比它对应的酸性强很多或弱很多，总之不和样品接近（一般我们选择强于样品的酸性）。选择顺序是：按需求来，优先考虑有机酸，优先考虑腐蚀性小的酸。出来混的都不容易，能用安全的当然要用安全的。希望下个表格能对你有所帮助。P磷酸*端/甲陶三氟乙酸P高獭,pH适用范部2-W471aI-W，21CInm下是否可用C是否群是C，有机如否Q是C是C否一，腐蚀性C一般。一般，甲酸强一些晚遇，挥发也厉害,非常强，使用要小心。是否适用于液质联用或蒸发光散射检测器）否。却是C否二ffi

13、icrfwwwinstrum&ntcomCn什么情况下用缓冲盐？单独用酸不行的时候用缓冲盐。如果样品的粒子性不强，那单独靠PH的抑制不起作用的时候，需要加一些盐进去，进行其他方面的抑制。一般情况下，磷酸缓冲体系是首选，因为配制简单。有时我们也会用到三乙胺，但是现在它的出场几率越来越少。因为色谱柱的科技含量越来越高，绝大部分色谱柱都是封尾过的。所以曾经大受欢迎的扫尾剂三乙胺的作用越来越小。如果不考虑PH的影响，三乙胺大部分时候只能锦上添花，雪中送炭指望不上了。就是说，如果峰型有点难看，但还是凑合，那么可以考虑加点进去改善一下；如果已经惨不忍睹，那就要考虑其他因素，三乙胺加了作用不大。缓冲盐的选择

14、原则是：越简单越稳定就越好。缓冲能力要强，如果受到一点影响PH就会有明显变化，那保留时间就可能飘；配制要简单，需要调PH值的话也要有相应的酸或碱。别问我为什么不用盐酸，我前面说过了，我们不新建，我们只是套用。为什么我们要冒风险去选择大多数人都不用的东西呢。另外，除非你手头有类似的结构采用离子对试剂的成熟方法，或者你有大量的HP1C使用经验（这样的话本文您就当娱乐看，多指点指点俺的错误），否则一开始选离子对试剂是不明智的。离子对缓冲体系平衡时间长，做完样品后需要清洗的时间也长。我们只能是先易后难，至少可以先用常见的缓冲体系看看什么PH值下峰型相对最好看，然后再上离子对试剂。缓冲盐体系下，出峰太早

15、，峰型很难看，两个相似结构的峰因为拖尾或峰型太宽的原因不能分离，这样的情况下，离子对试剂是你可以期望的选择。贴士：对于酸碱性不明显，但是结构式看起来体积比较大的样品，一般缓冲盐比较好。面对如此多的选择，当然不能挨个实验下去，那样本文就没有意义了。那么先试哪个后试哪个呢？我可以很负责的告诉你，第一选择应该是一水。废话，谁没事喜欢给自己找麻烦。然后能用单独的酸就用单独的酸，不能再上缓冲盐。最后考虑离子对的缓冲盐。样品在色谱柱内的情况，我们可以打个比方，大家都看过电影节走红地毯的明星们吧，把色谱柱看成红地毯，然后一群明星（样品）要走过红地毯，地毯旁边会有一大群的记者和影迷，他们就是色谱柱的填料，假设治安状况不够好，明星都需要带着保镖过地毯，保镖我们认为是推着样品前进的流动相，由举办电影节的我们雇佣使用。我们的目的，就是把不同影片的明星分开来，地毯旁的记者影迷（色谱柱填料），负责跟明星握手合影等，这样人气旺的行进速度就会慢，没人搭理的明星们就走的快，在地毯那头，我们的目的达到，明星们分开了。我要开始理论解释了（汗一个先），我们是电影节的组织者，我们要知道那些明星收了出场费但是人没来，所以必须点清明星的个数。在这个过程中，保镖（流动相）是我们雇佣的，有什么问题优先找他们，影迷（色谱柱）是其次可以下手的，明星（样品）我们得罪不起，一般不考虑改变他们来达到目的。就跟踢球