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1、使用酶联免疫分析检测基本信息、测定用途、结果解释注意事项等要点总结使用酶联免疫分析检测蛋白质是诊断工具之一，测试用于监控和疾病监测以及诊断工具。检测基本信息E1ISA检测旨在检测针对细菌或病毒的抗原或抗体。抗原是刺激抗体产生的外来蛋白质。E1ISA直接靶向细菌或病毒的蛋白质称为抗原E1ISA,目标动物对细菌或病毒抗体反应称为抗体E1ISAo通过E11SA检测抗体或抗原的概念和过程完全相同，它从获得目标蛋白开始。对单个蛋白质，需要单独方法来获得该单个蛋白质纯化浓度，确定目标蛋白是科学而复杂过程。步骤1：用目标抗原或抗体预涂微孔板。步骤2：添加样品测试并孵育，以使抗原和抗体之间发生附着。步骤3：移
2、除样品，并添加附着在抗体相对侧的特定抗体。然后孵育样品以确保附着，并洗涤以确保去除任何非附着抗体或抗原。步骤4：添加用能发出荧光的检测器标记的抗体，并将其附着在步骤3中添加的特殊抗体上。然后再次孵育样品以确保附着，并洗涤以确保去除任何未附着的标记抗体。步骤5：添加将触发残留的标记抗体荧光的试剂，然后进行孵育以确保附着。步骤6：读取样品，通常使用特定波长的专用机器来量化颜色变化。这一过程在检测方法是直接、间接还是夹心E11SA方面有一些细微的差异，每种检测方法都有不同的优点和缺点，但最终结果相同；吸光度或颜色变化越高，测试样品中目标抗原或抗体预期浓度越高。直接E1ISA：1 .将样品加入微孔2
3、.蛋白质附着于塑料上3 .偶联检测抗体与固E1ISA定化分析物结合4 .酶促显色反应与结合抗体成正比夹心E1ISA：1 .用捕获抗体预涂微孔2 .添加样品，分析物与捕获抗体结合3 .偶联检测抗体与固定化分析物结合4 .间接检测，酶促反应与分析物成正比竞争E1ISA：1 .用第二捕获抗体预涂微孔2 .同时加入捕获抗体、偶联物和样品3 .偶联物和样品结合4.酶促显色反应与结合偶联物成正比在竞争E1ISA的情况下，关键是所使用的过程实际上会产生相反的结果。将样品和已知量的标记抗原或抗体添加到待评估的样品中，以便将它们添加到标记孔中，原始样品和添加的标记蛋白竞争附着在预涂孔上。当洗涤样品时，任何未附着
4、的标记蛋白将通过洗涤去除。当样品中目标蛋白的浓度高时导致低吸光度，高值表示低浓度或阴性结果，无法量化阳性样品抗原/抗体浓度。合并用于测试的样本E1ISA测定是浓度依赖性的，不要合并进行检测，合并可显著增加丢失阳性样本的可能性。E1ISA测定用途：检测是否存在针对目标病原体抗体-抗体E1ISA-最常见用途；确定病原体暴露；确定动物的疫苗接种状态；确定感染时间（抗体水平的变化）随时间的变化；通过检测目标病原体的蛋白质/抗原来检测目标病原体存在-抗原E1ISAoE1ISA结果解释注意事项1、暴露于病原体的猪需要一段时间才能产生足够抗体，以通过E1ISA检测。2、2、抗体E1ISA检测是无法区分母源抗
5、体与暴露于病原体而产生的抗体。3、抗体E1ISA检测通常无法区分疫苗产生抗体和野生型暴露产生的抗体。4、在少数情况下，可以开发特殊的E1ISA检测，以区分感染动物和接种动物。5、抗体E11SA结果并不意味着保护，保护可能来自不同的抗体,这些抗体无法通过检测或细胞介导免疫进行测量，细胞介导免疫与体液或抗体介导的免疫力完全不同，并且不能通过E1ISA进行测量。6、与PCR相比，抗原E11SA在检测抗原的灵敏度方面明显较低。PCR检测可有效复制存在DNA/RNA,可检测极低水平病毒或细菌。另一方面，抗原E1ISA需要显著更高浓度病毒或细菌产生足够颜色变化以使其能够被检测到。7、当使用商品E1ISA试
6、剂盒时，结果是标准化的，并且在实验室之间是一致的。8、并非所有病原体都会产生可测量免疫反应。9、每个E1ISA试剂盒通常会测试不同的蛋白质，这会对同一样本产生截然不同结果。10、暴露剂量和或途径可能影响免疫反应水平。11、重要的是了解检测的灵敏度和特异性。12、可能会出现假阳性和假阴性结果，个体猪接触剂量和对病原体免疫反应不同，并且存在一些无法完全消除背景或交叉反应。13、抗体通常在接触/接种后几个月内保持存在或可测量。阴性结果解读：1、样本/群体对病原体真正阴性。2、尽管动物接种疫苗，但样本猪群对病原体确实呈阴性。3、样本中没有足够的抗原用于检测。4、在疾病早期采集样本，猪尚未产生可检测的免
7、疫反应。猪繁殖与呼吸综合征通常需要7-10天才能发生血清转化。胞内劳森菌感染通常需要4-6周才能发生血清转化，具体取决于暴露剂量。5、采集样本的时间太晚，病原体不再存在。流感病毒仅在感染的前3-4天出现在鼻分泌物中。6、靶向抗体/抗原错配。不同的流感病毒株：H1N1和H3N3之间的差异，以及HIN1不同分支之间的差异）。7、猪群中的流行率低，且采样的动物未受感染，需要增加动物样本数量。8、特定疾病可能没有刺激产生足够抗体进行检测。猪肺炎支原体主要附着在肺纤毛上，不会刺激产生大量血清IgG;最近田间感染产生更强的E1ISA结果；猪肺炎支原体疫苗不会刺激强烈的IgG免疫反应；不同E11SA检测以不
8、同方式检测疫苗；只有大约30%的接种动物会发生血清转化；合并而稀释弱阳性样本。9、强烈反对合并样本。阳性样本解读：1 .样本/猪群对病原体暴露真正呈阳性；2 .无法区分样本是否具有传染性或非传染性；3 .无法将母源抗体与自然暴露或接种而产生的抗体区分开来。大多数母源抗体会在8-12周龄时消失。随着猪日龄增长，E1ISA值应随时间显著降低。随着时间推移，可以对猪进行检测，以确认母源抗体衰退以及缺乏田间暴露。4 .根据目标病原体，蛋白质检测并不总是能确认疾病检测猪圆环病毒2型血清抗体E1ISA呈阳性，证实接种疫苗或感染动物暴露于PCV2,需要对肺和/或淋巴组织进行免疫组织病理学检查，以证明与PCV
9、2相关的疾病。检测无法区分暴露于疫苗病毒/细菌、改良活疫苗和野生型感染。5 .适用于灭活疫苗和改良活疫苗6 .有助于了解疫苗使用时间，动物在很长一段时间内对某些疾病保持阳性。7 .交叉污染不太可能，因为需要大量污染才产生阳性结果。8.单个E1ISA值可能无法完全确定感染阶段。OX=E1ISA值爆发中三个不同点可以产生相同E1ISA但所需解释和行动会完全不同：A点一感染初期一爆发开始；可采取相应措施；B点一感染晚期一疫情即将结束；在这一时间点上没必要采取任何措施;C点一第二次爆发一第二次爆发正在开始，必须解决生物安全措施/重新爆发原因；需要在10天至2周后从同一动物上第二次采集样本，以进一步确定
10、暴发阶段。第二个样本结果较高，则可能在点A第二个样本结果显著较高，则可能在C点第二个样本结果不发生变化，则可能处于平稳阶段第二个样本结果下降，那么很可能在B点9,高S:P值与最近的暴露有关在第二次暴露或加强免疫接种后。猪繁殖和呼吸综合征病毒。猪可以是E11SA阴性，但仍然是病毒血症。具有高抗体E11SA值，但不是病毒血症。PCR检测用于确定动物的病毒血症状态。10.低S:P值特定疾病可能不会刺激足够的抗体检测；猪肺炎支原体主要附着在肺纤毛上，不刺激产生高血清IgG;最近田间感染产生更强E1ISA结果；猪肺炎支原体疫苗不会刺激强烈IgG免疫反应；不同E1ISA检测方法检测疫苗的效果不同；大约30%的接种动物会发生血清转化。I1用抗生素治疗几周的猪可能会在这段时间内抑制细菌生长，减少疾病暴露，导致对暴露免疫反应较慢或较弱。使用抗生素治疗猪肺炎支原体；早期和中期保育阶段的猪肺炎支原体；在早期和中期使用抗生素治疗肠道病原体。
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