考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒说明书.docx

《考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒说明书.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒说明书.docx（2页珍藏版）》请在第一文库网上搜索。

1、考马斯亮蓝法测蛋白含测定试剂盒说明书微法IoOT/96S注意B正式测定之前选择23个预期差异大的样本做预测定。澜定意义：样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。渊定原理：在酸性溶液中，考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合形成蓝色复合物；该复合物在620nm处有最大吸收峰，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。该方法灵敏度高，适合微量蛋白质分析。自备仪器和用品：离心机、醉标仪、96孔板、移液器和蒸储水。试剂组成和配制：试剂一：液体IIm1X1瓶，4保存。样品中可溶性蛋白质提取：1 .液体样品：澄清液体样品可以直接测定。2 .组织样品：按照组织质量（g）：提取液

2、体积（m1）为1：20的比例（建议称取约0.05g组织，加入Im1提取液（自备，根据需要选用衡提取缓冲液或者蒸储水或者生理盐水）冰浴匀浆，8000g,49离心IOmin,取上清，即待测液。（动物样品常常需要稀释）3 .细菌、真菌：按照细胞数量（IO4个）：提取液体积（m1）为5001000:1的比例（建议500万细胞加入Im1提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w,超声3秒，间隔7秒，总时间3min）;然后8000g,4,离心IOmin,取上清置于冰上待测。熏定操作：1.酶标仪预热30min。2.在96孔板中加入：试剂（H1）测定管空白管样本100蒸馀水100试剂一100100混匀后，测定波长620nm吸光值，AA=A测定-A空白。注意I空白管只需要测定一次。计算公式：标准曲线：y=7.1265x-0.0007R2=0.9997x:蛋白标准品浓度（mgm1）y：吸光值差值1.按液体样本体积计算：Cpr(mgm1)=(A+0.0007)7.1265=0.1403(A+0.0007)2.按组织样本质量计算：Cpr(mgg)=gA+0.0007)7.1265V总W=0.I403(A+0.0007)WV总：提取液体积，Im1;W：样本质量，g0优利科（上毒）生4字f1眼