拆分蛋白质多聚体为单体的试验方法.docx

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1、拆分蛋白质多聚体为单体的试验方法以前回答网友提问时写的。拆分蛋白质多聚体为单体的试验方法可以参考亲和层析的试验方法：1.转变川值或离子强度：比如可以使用NaCl梯度拆解，主要是用于静电作用引起的相互作用的蛋白质多聚体，转变pH值可以跟缓冲溶液的组成加入相应的酸或者碱；2.假如蛋白质多聚体主要为疏水相互作用，而且转变pH值的结果不够有效，则需要用激烈的条件，比如加入聚乙二醇（最多到到60%,要分梯度加入）或二甲基亚飒（dimethylsulfoxide）（一般最多到到10%,要分梯度加入）以降低水溶液的极性3.可以考虑加入加入去垢剂（表面活性剂），它们是具有亲水基又具有疏水基的物质，能够在低于临

2、界胶束浓度（Citical Micelle Concentration ,简称：CMC）时有效结合于蛋白质的疏水区域，因此一般具有乳化、分散、和增溶作用，可分阴离子、阳离子和中性去垢剂等多种类型，中性去垢剂在蛋白提取钟应用的较多。“一般考虑使用的是：中性去垢剂或生物表面活性剂。中性去垢剂乂称非离子表面活性剂，对蛋白质的变性作用影响较少，宜于蛋白质或酶提取之用。一般市售中性去垢剂有聚乙二醇类，如PEG200；多元醇类表面活性剂，如山梨醇、司盘类和吐温类；聚氧乙烯脂肪醇酸，如苇泽类、平平加类；聚氧乙烯烷基苯酚醛，如TgepalC0、乳化剂OP、Triton. Pluronic（用作消泡剂、润湿剂、

3、增溶剂）、泡敌。中性去垢剂作用后可通过Sophadcx LH-50柱除去；也可直接上DEAE-Sophadcx柱层析分别目的蛋白，不必先除去去垢剂。也可以用自然 表面活性剂又称为生物表面活性剂，包括种类较为广泛，如各种树胶（阿拉伯胶、杏胶、桃胶、果胶）、明胶、皂贰、卵磷脂、豆磷脂、琼脂、海藻酸钠、酪蛋白、胆笛醇、胆酸类、多糖类（如环糊精）等。详细用法可以参考有关试剂使用说明。浓度尽量低一些为好，浓度不能超过临界胶束浓度（Citical Micelle Concentration ,简称：CMC）。临界胶束浓度cmc的含义如下：在水中的表面活性剂低浓度时呈分子状态，并且三三两两地把亲油基团靠拢而

4、分散在水中，当浓度渐渐增大肯定程度时，很多表面活性剂分子立即结合成大基团，形成“胶束”表面活性剂在水中形胶束所需的最低浓度称为临街胶束浓度，即CMC.意义：CMC可作为表面活性剂表面活性的一种度量，CMC越小，表明这种活性剂形成胶束所需的浓度越低，达到表面饱和吸附的浓度越低。因而转变表面性质从而起到润湿，乳化，增溶，起泡等作用所需的浓度也越低。此外，临街胶束浓度也是表面活性剂溶液性质发生显著变化的一个分水岭，CMC值对表面活性剂的讨论有着及其重要的参考价值的数据。临界胶束浓度测定方法很多，用不同方法验证即可（1）表面张力法pdf（2）电导率法方法&原理（3）紫外汲取分光光谱4. ） .花荧光探

5、针光谱法其中花荧光探针光谱法可信度较高5. ） Citical Micelle Concentration byConductance and Ramanhttped. augie. eduawaspaaspchem 1 abscccmc. html ,引号内是从网上摘来的，我核对了高分子化学有机关教材，没有什么错就贴上去了，主要是我不愿打着字，感谢首发者。4.也可以采纳高浓度的（到3molL）的离子解离盐（比如KCN或KI）或中低浓度的变性剂（低于4molL）的尿素或盐酸胭，都是分梯度加入。总之，只要能拆解开多聚体即可，尽量少或不要变性，拆解后可用层析方法或者离心方法分别开多聚体和单体，分别开的多聚体在如法循环操作分别到单体。参考文献：R.M.坎普等，施蕴渝等译，蛋白质结构分析：制备、鉴定与微量测序，科学出版社，2000, pl4,原书写的是亲和层析洗脱方法，我结合自己的试验做了些修改写成了拆分多聚体的试验protocols.