河医大生药学实验指导21石蜡切片法.docx

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1、附录五石蜡切片法一、取材与固定:将新鲜材料切成适当大小,一般以不超过0.5Imm3为宜。材料切好后,立即投入固定液中,固定的目的是使植物组织很快被杀死,以保持其生科学研究时状态。固定的时间须视材料而定,常用的固定液为F.A.A固定液。干燥材料不需要固定,可用水或甘油浸软后,切成小块即行脱水。二、冲洗:材料经固定后,必须充分除去固定液,可以流动冲洗或以清水换洗数次,使固定液全部除净。三、脱水:一般用乙醇脱水,每次调换乙醇浓度的时间视材料而定材料坚硬者每隔3小时为宜。乙醇浓度通常为10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、100%(二次)。四、透明:二甲苯为透明剂。一

2、般将二甲苯用无水乙醇配成25%、50%、75%的浓度至纯二甲苯,23小时更换一次,至材料透明为止。五、浸蜡:材料脱水至二甲苯时,可加少量石蜡;以后再逐渐增加熔融石蜡至全部为石蜡浸透止,此操作须在熔蜡炉或恒温箱中进行,一般温度以较石蜡溶点高24。C为宜,约3小时调蜡一次。六、包埋:将烧融石蜡倒在小纸盒(或气埋模子)内,立即将已浸透石蜡的材料放在纸盒中央排列好位置,待石蜡渐泠凝成块状,或石蜡表面冷凝时,即抽入水中,使其迅速冷却成硬块。七、切片:将包埋的石蜡块切成四方形或略长方形,材料在中央,其四周边距离相等而平整,将下端用蜡粘于金属固定器或木块上使之牢固。夹木块于旋转切片机上,另将刀装妥,并夹紧,

3、然后刀口与蜡块接近,再调节厚度(一般为105m),切片,将切下的蜡片,置于切片盘中。八、贴片:取蛋白粘贴剂少许,置于洁净的玻片上,均匀涂沫后,加蒸储水一滴,将蜡片的光滑面置于玻片上,移至烘片台上,待蜡片伸展平直后,倒去多余的水,烘干。九、溶蜡:将烘干的玻片置于二甲苯中,溶去石蜡,数分钟后,移入二甲苯与无水乙醇的等量混合液中,再移入无水醇中,各需数分钟。十、染色:材料复水至与染色液浓度相等时可染色,常用番红亮绿染色,染色时间须视染色液和材料而定,染色过程在染色缸中进行。十一、脱水与封藏:依次加乙醇、无水乙醇、二甲苯脱水至切片透明清晰为止。然后加加拿大树胶12滴于切片上,小心盖上盖玻片。在载玻片左方贴上标签,注明切片名称,切面和日期即可。附1:F.A.A固定液的配置50%或70%乙醇90m1冰醋酸5m140%甲醛5m1附2:蛋白粘剂的配制新鲜鸡蛋白25m1甘油25m1水杨酸钠0.5g

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