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1、血清乙型肝炎病毒e抗体检测(E11SA)作业指导书1 .原理在微孔条上预包被被纯化乙肝e抗体(HBeAb),配以酶标记抗原(HBeAb-HRP)、中和抗原(HBeAg)及TMB等其它试剂,采用竞争法原理检测人血清(或血浆)中乙肝。抗体(HBeAb)o2 .标本采集2. 1采集前病人准备:受检者应空腹。3. 2标本种类:血清或血浆。2.3标本要求:采集病人静脉血3m1(可用EDTA抗凝),室温放置不超过4小时,分离血清备用。4. 标本储存:2-8C保存不应超过24小时,-20C不应超过3个月,-70长期保存,应避免反复冻融。4 .标本运输:密封,室温运输。5 .标本拒收标准:污染、标本量不足、严
2、重溶血或脂血标本不宜作此项检测。6 .试剂6. 1试剂名称:乙型肝炎病毒e抗体诊断试剂盒6.2试剂生产厂家:英科新创(厦门)科技有限公司。6. 3包装规格:96TestKit6.4 试剂盒组成:HBeAb微孔板,HBeAb酶标记抗原,中和抗原,HBeAb阳性对照血清,HBeAb阴性对照血清,浓缩洗涤液,底物A,底物B,终止液,封口膜,自封袋。6.5 试剂储存条件及有效期:2-8C避光保存,有效期9个月。7.仪器设备7.1仪器名称:自动酶标仪7. 2仪器厂家:Rayto7. 3仪器型号:RT-2100C8. 操作步骤8.1平衡:将试剂盒各组分取出,平衡至室温(18-25oC),微孔板开封后,余者
3、及时以自封袋封存。8.2 配液:浓缩洗涤液配制前充分摇匀(如有晶体应充分溶解),浓缩洗涤液和蒸储水或去离子水按1:19稀释后使用。8.3 编号:将微孔条固定于支架,按序编号。8.4 加样:分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各501于相应孔中。8.5 加醉:分别在每孔中加入酶标记抗体501,轻拍混匀。8. 6中和:分别在每孔中加入中和抗原(HBeAg)501,轻拍混匀。8.7 温育:置37C温育60分钟,室温平衡5分钟。8.8 洗涤:用洗涤液充分洗涤5次,洗涤完扣干(每次应保持30-60秒的浸泡时间)。8.9 显色:每孔加入底物A、B各501,轻拍混匀,置37暗处15分钟。8.10终止:
4、每孔加终止液501,混匀。8 .11测定:用酶标仪单波长450nm或双波长450630nm测定各孔OD值(用单波长测定时需设空白对照一孔,30分钟内完成测定,并记录结果)。9.结果判断与分析9. 1临界值(C.O.)的计算:待测样品为原倍血清时,临界值=阴性对照孔OD值NXO.2,待测样品为非原倍血清时,临界值=阴性对照孔OD值NXO.5,(非原倍血清是指稀释血清、质控血清等)。9 .2结果判定:样品OD值SC.(K=I者为HBeAb阳性样品OD值S/C.01者为HBeAb阴性10 .质量控制:每次试验用含量为2NCUm1的HBeAb质控血清同步检测,S/CO值应在控制范围内;如失控,则要检查
5、试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确,直至重新试验使其在控。11 .参考范围:阴性12 .临床意义:HBeAb阳性可作为体内HBV处在复制状态及血清具有传染性的一个标志。阳性表示机体已产生免疫力,病毒活力降低,传染性减弱,预后好。13 .操作性能:灵敏度高,特异性好。14 .方法局限性:样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定相关。15 .注意事项15. 1每板建议设阴阳性对照血清各两孔,设空白对照时,不加样品及酶标记抗体,其余各步相同。15.2洗涤时各孔均须加满,防止孔口内有游离酶未能洗净。15. 3加试剂前应将试剂瓶翻转数次,使液体混匀。如果滴加,滴加前应弃去1-2滴。滴加
6、时瓶身应保持垂直,以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。15.4所有样品都应按传染源处理。15. 5封口膜使用说明15.5 .1微孔板拆封后,在取出当天所需的微孔条后,其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时,注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部,以免影响其透光性。15.6 .2微孔板温育时,以封口膜覆盖孔口,可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。15.6不同品名、不同批号的试剂不可混用,以免产生错误结果。16 .当检测系统(仪器)不能工作时,所采取的补救措施:应保证所有操作步骤正确无误;可以比对阴阳对照,肉眼判读;无法准确判读者,应留样待系统正常后复查。17 .参考文献:中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程(第二版)412-413页。18 .其它,必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。