糜蛋白酶Chymotrypsin试剂盒说明书.docx

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1、糜蛋白酶(Chymotrypsin)试剂盒说明书微量法100T/96S注意X正式测定之前选择2.3个预期差异大的样本做预测定。澜定意义:糜蛋白酶,又称胰凝乳蛋白酶,是胰腺分泌的一种蛋白水解酶,能迅速分解变性蛋白质。糜蛋白酶的功能与胰蛋白醉相似,但是具有分解能力强、毒性低和不良反应小等优点。临床上糜蛋白酶用于痰液稀化,对脓性和非脓性痰液均有效;也用于创伤或手术后伤口愈合,如白内障摘除。渊定原理:糜蛋白酶催化ATEE水解,产物在237nm有特征光吸收;通过测定237nm光吸收增加速率,来计算糜蛋白酶活性。自备仪器和用品:台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿

2、/96孔板(UV板)、冰和蒸储水。试剂组成和配制:试剂一:液体IOOm1XI瓶,4C保存。试剂二:粉剂X1瓶,4避光保存。临用前加入20m1蒸储水充分溶解。粗液提取:组织样品:按照组织质量(g):试剂一体积(m1)为1:510的比例(建议称取约0.1g组织,加入Im1试剂一)冰浴匀浆,8000g,4C离心IOmin,取上清,即粗酶液。渊定步骤:1 .分光光度计/函标仪预热30min,调节波长到237nm,蒸储水调零。2 .试剂二置于37水浴中保温30min3 .空白管:取微量石英比色皿/96孔板,加入201试剂一,2001试剂二,混匀于237nm测定4min内吸光值变化,记为空白管。(从吸光值

3、稳定增加开始计时)4 .测定管:取微量石英比色皿/96孔板,加入201粗酶液,2001试剂二,混匀于237nm测定4min内吸光值变化,记为aA测定管。(从吸光值稳定增加开始计时)注意I空白管只需要测定一次。皮蛋白活性计售公式:a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下(1)按蛋白浓度计算活性单位定义:25C每亳克蛋白每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。糜蛋白酶(Umgpro)=(ZA测定管一ZXA空白管)xV反总(CprxV1)T=2.75(A测定管一ZkA空白管)Cpr(2)按样本质量计算活性单位定义:25C每克样品每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。糜蛋白酶(U/g鲜重)=(ZA测定管

4、一ZXA空白管)xV反总(WxV1V2)T=2.75(A测定管一AA空白管)WW:样品质量(g);Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mgm1),需要另外测定;VI:加入反应体系中粗醉液体积(m1),201=210-2m1;V2:粗醉液总体积(m1),1m1:V反总:反应总体积,22O1=O.22m1;T:反应时间(min),4min0b.使用96孔板测定的计算公式如下(1)按蛋白浓度计算活性单位定义:25C每亳克蛋白每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。糜蛋白酶(U/mgprot)=(ZA测定管一ZA空白管)xV反总(CprxV1)T=2.75(A测定管一ZXA空白管)Cpr(2)按样本质量计算活性单位定义:25C每克样品每分钟催化吸光值增加1为一个醉活单位。糜蛋白酶(U/g鲜重)=(ZA测定管一ZXA空H管)xV反总(WxV1V2)T=2.75(A测定管一ZA空白管)WW:样品质量(g);Cpr:粗酶液蛋H质浓度(mgm1),需要另外测定;VI:加入反应体系中粗酶液体积(m1),201=2102m1;V2:粗醉液总体积(m1),1m1;V反总:反应总体积,2201=0.22m1;T:反应时间(min),4min.注意事项I临用前配制的试剂配置好后3天内使用完毕。优利科(上海)生科学有限.一X

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