血清总胆红素TBIL测定方法.docx

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1、血清总胆红素（T-BI1）测定方法1 .实验原理血清中的胆红素分为直接（结合）胆红素和间接（未结合）胆红素。大多数方法是在1883年Ehr1ich提出的重氮法胆红素测量法1,一些改良的方法已被用来增进反应。这些改良的方法是使直接胆红素直接和重氮化合物进行反应，生成一种有颜色的化合物，而间接胆红素需要一种溶剂，如表面活性剂后才能进行反应。申能总胆红素试剂是改良的重氮法。使用一种稳定的重氮盐，2,4-二氯苯胺重氮盐（DCA）,与胆红素反应，形成红色偶氮化合物，它在54Onm吸光度最大。在540600nm时的吸光度与标本中总胆红素的浓度成正比。胆红素+DCAA红色偶氮化合物表面活性剂2 .标本：2

2、.1病人准备：无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。2.2类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。3 .标本存放：1525C保存可稳定2天；28保存可稳定7天；-20C保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。4 .标本运输：常温条件下避光保存运输。5 .标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。6 .实验材料6.1试剂：申能总胆红素试剂盒（14108171701试剂1+试剂2）6.1.1试剂组成试剂1：64m1磷酸缓冲液40mmo11氯化钠9g1适量1mmo1130mmo11适量表面活性齐IJ,稳定剂试剂2：616m12,4-二氯苯胺重氮盐盐酸表面活性剂

3、6.1.2试剂准备：试剂为即用式。6.1.3试剂稳定性与贮存试剂避光保存于28,若无污染，可稳定至失效期。试剂有效期为18个月。试剂2必需避光保存。试剂不可冰冻。6.1.4变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。6.1.5注意事项：此试剂为体外诊断用，不要入口，毒性还末确定；警告！腐蚀剂！不要入口；避免和眼睛，皮肤或衣服接触，如果接触到，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟，接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。6.2校准品：使用DiaSys公司提供的TruCa1U校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件6.3质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP

4、文件7 .仪器：奥林巴斯AUIOOO生化分析仪8 .操作步骤8 .1项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU1OOO生化分析仪项目测定参数.SOP文件。9 .2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU1OOO生化分析仪操作规程.SOP文件。9 .检验结果的判断与分析10 .质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。11 .计算方法：以TrUCaIU复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算，以Umo1/1报告。手工

5、测定计算方法为:AuX校准液浓度V150Umo1/122-193mo1/112-217mo1/11.7-216mo1/13.417mo1/11.721mo1/1总胆红素（U1nO1/1）=As12 .参考值范围：婴儿：出生24小时内出生第2天出生第3天出生第46天儿童：一个月成年人：参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实验室应建立自己的参考值。13 .临床意义：胆红素是血红蛋白的降解产物。游离胆红素非极性很强，几乎不溶解于水。在血液中与白蛋白形成复合物由脾脏向肝脏运输。在肝脏中，胆红素与葡萄糖醛酸结合，生成可溶性胆红素葡萄糖醛酸酯由胆管排入肠道。溶血（肝前黄

6、疸）、实质的肝损伤（肝性黄疸）和胆管堵塞（肝后黄疸）都会导致血液胆红素增高，形成高胆红素血症。人群中常见先天性慢性高胆红素血症，称为GiIbert综合症。由于胆红素降解酶的功能滞后以及出生后红细胞破碎增多，使6070%的婴儿血液出现总胆红素增高。常用的胆红素检测方法能检测总胆红素和直接胆红素。直接胆红素的测定主要检测水溶性的结合胆红素，因此可以根据总胆红素和直接胆红素的差来估计游离胆红素的含量。14 .操作性能14.1线性范围：1.2513UmoI/114.2精密度：精密度的评估是根据NCe1S推荐的标准方法5,AU1OOO批内精密度小于3%或SDO.07,总精密度小于5%或SDO.IOo用于

7、分析的质控血清和数据处理符合以上的NCC1S的规则。批内精密度n=20X(mo1/1)S(mo1/1)CV(%)批间精密度n=20X(mo1/1)S(mo1/1)CV(%)样品115.220.4643.05样品114.880.4082.74样品217.440.4052.32样品219.660.6863.49样品382.600.7850.95样品379.522.2742.8614.3方法学比较：本公司的试剂盒（y）与某商品化试剂盒（x）,同时对247个样品进行T-BI1检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00-0.OOmo1/1；r=1.000,14.4灵敏度：本试剂的检测限为

8、1.2mo1/1。14 .5病人结果可报告范围：12513mo1115 .超出范围结果处理：本法线性上限为513mo11o如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9%氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2o16 .病危报警值的处理当新生儿血清标本测定结果总胆红素340mo1/1时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。17 .方法局限性17.1本法线性上限为513mo11.如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9%氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。17 .2干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度W1704mo11,血红蛋白浓度W5.00g1,甘油三酯浓度W22.6mmo11时没有观察到干扰。18 .补救措施：当仪器发生故障时，迅速联系仪器厂家进行维修。19 .其他：仪器测定后的废液及难降解的材料集中收集后按检验科废物处置管理规定执行。