三七茎叶皂苷提取工艺固液萃取法编制说明.docx

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1、三七茎叶皂昔提取工艺固液萃取法地方标准编制说明一工作简况（一）任务来源2020年3月，云南省农业科学院农产品加工研究所申请三七茎叶皂菩提取工艺固液萃取法地方标准的立项，经云南省市场监督管理局批准，将其列入2020年度上半年云南省地方标准制修订项目计划，批准由云南省农业科学院农产品加工研究所牵头三七茎叶皂菩提取工艺固液萃取法地方标准的制定。（二）起草单位本标准主要起草单位为：云南省农业科学院农产品加工研究所、云南省标准化研究院。（三）主要起草人主要起草人基本情况见表1。表1主要起草人员名单姓名性别职务/职称工作单位任务分工田浩男副研究员云南省农业科学院农产品加工研究所组织协调、技术指导及标准起草

2、李宝珠女正高级工程师云南省标准化研究院组织协调、技术指导及标准起草李宏男研究员云南省农业科学院农产品加工研究所组织协调、技术指导刘秀搬女助理研究员云南省农业科学院农产品加工研究所资料收集、调研潘俊男副研究员云南省农业科学院农产品加工研究所工艺研究，标准起草康燕妮女高级工程师云南省标准化研究院组织协调、技术指导易霞女云南省农业科学院农产品加工研究所工艺研究李智敏女副研究员云南省农业科学院农产品加工研究所调研及资料收集李晚谊女研究员云南省农业科学院农产品加工研究所意见征询肖丹女研究员云南省农业科学院农产品加工研究所意见征询二、制定标准的必要性和意义三七（Panax notoginseng （Bur

3、k. F.H. Chen）是云南的道地药材，多年来国内外对三七的研究多以地下部分（根）为主，对地上部分（茎叶和花）的开发应用较少。现代研究发现，三七的地上部分由于富含三七皂甘及三七黄酮，表现特殊的功效性。三七地上部分以人参二醇型皂昔为主，目前己从三七茎叶中分离得到了人参皂昔Rbi、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、F2、Rgi、Rg3、Rh? Me、Fi、Rhi,三七皂昔 Fa、Fc、Fe,绞股蓝皂昔IX、XIIL XVII等。药理学研究表明，三七叶中的总皂普以及某些单体皂首均具有一定的药效作用；三七茎叶总皂甘则具有抗炎，镇静，镇痛，抗抑郁，抗肿瘤,延缓衰老，提高免疫力等作用。2016年云南省

4、三七产业“十三五”发展规划等相关文件中都将三七地上部分纳入生物医药和大健康产业发展规划，明确需要开发含有大量皂昔成分的三七绒根、剪口、花、茎、叶、果梗相应产品，满足市场需求。经国家卫生计生委批复2017年云南省正式将三七花及茎叶纳入地方特色食品管理，并颁布DBS 53/024-2017干制三七茎叶地方标准。云南是三七的原产地和主产区，其产量占全国95%,是我省最具特色的优势生物资源，其茎叶、花的地上部分产量巨大。据文山州相关部门统计，三七地上部分获得食品生产许可后，将促进全省三七产业的可持续发展。目前三七地上部分产品仍存在开发利用率低、产品附加值不高、产品质量参差不齐等问题。究其原因，主要是对

5、三七地上部分的精深加工程度太低。皂甘类化合物是三七地上部分的主要功效成分，与三七地上部分提取物镇静、安神等功效密切相关。充分有效利用三七皂普类化合物，在此基础上开发功能性食品和日用品是提升三七地上部分价值的重要途径。因此，提高三七地上部分的精深加工水平，并形成规范产品加工工艺与质量的标准化体系，对进一步提升三七茎叶利用价值，充分挖掘三七茎叶产品市场潜力具有重要意义。目前，云南可合法生产三七地上部分产品企业有15家。应用于三七地上部分提取的方法也较多，三七花茎叶类食品多采用水解、低温、冻干、提纯工艺，不同的方法促进了三七地上部分的提取与资源利用，但也因各方法提取效果不一,导致目前三七地上部分皂昔

6、提取技术高低不一、规模化和标准化程度不高。由于皂昔存在不稳定性，导致提取过程中皂昔转化、降解现象发生，直接影响最终产品的功效。经检索，截止目前，尚无国家标准、行业标准和地方标准规范三七茎叶皂菁的提取方法。现依托云南省科技厅重点研发专项新资源食品原料（三七地上部分）功能成分挖掘及特征营养物质加工利用技术研究研究成果，编制标准三七茎叶皂菩提取工艺固液萃取法。本标准以有机溶剂浸提为主，结合热回流提取技术，规范三七茎叶皂普提取方法。本标准中规定的三七茎叶皂菁提取方法不但技术简单、易操作，而且具有提取时间短、提取率高，方法普遍适用、易推广的优势。通过规范三七茎叶皂昔类化合物的提取，对深度挖掘其功能特性、

7、开发新产品、延伸产业链、提升产品附加值有重要的经济价值和现实意义，有利于推动云南省三七茎叶产业规范、有序、健康、高质量发展。三、 主要起草过程（一）成立标准编写小组三七茎叶皂菩提取工艺固液萃取法地方标准获得立项后，由云南省农业科学院农产品加工研究所牵头，组织成立标准编写小组，制定工作原则，明确工作计划，确定起草组成员，进行了任务分工。（二）广泛收集资料、分析研究、形成标准初稿标准编写小组系统收集了中华人民共和国药典、食品相关国家标准、行业及其他省市区已出台的相关地方标准，并经过大量实验验证和对比的基础上形成了地方标准初稿。（三）征求意见、送审、报批为确保标准的可行性，起草单位向有关管理部门、科

8、研机构、相关专家及生产企业广泛征求意见，在对反馈意见进行分析研究和处理之后，进一步修改和完善了标准征求意见稿，形成三七茎叶皂菩提取工艺固液萃取法地方标准送审稿，通过技术审查后再次修改完善，形成了报批稿。四、制定标准的原则和依据，与现行法律 法规、标准的关系（一）标准制定的原则1 .先进性原则：目前国内尚无三七茎叶皂菩提取工艺的国家标准、行业标准，该标准的制定让三七茎叶加工的技术达到一定的先进标准，能够为三七茎叶的加工提供有效的技术依据，更利于三七茎叶的贸易和流通。2 .协调性原则：本标准应基于中华人民共和国药典、食品相关国家标准、行业标准的要求编写，能够与上级标准相协调，又根据三七茎叶自身的特

9、性，保证了标准的针对性和统一性，并与国家法律、法规保持一致。3 .适用性、可操作性原则：本标准应从实际出发，制定过程中应充分调查、研究，广泛征求有关专家意见和建议,保证标准的适用性和操作性。4 .科学性原则：本标准中涉及的指标参数应经过多次科学实验、反复论证以及统计分析得出，其结果和结论应符合科学性的原则。5 .规范性原则：本标准按照GB/T1.1标准工作导则第1部分：标准的结构和编写的相关规定进行编写，应格式规范。（二）标准制定的依据制定本标准的主要依据为：中华人民共和国药典、DBS 53/024-2017干制三七茎叶等。（三）标准与现行法律法规及标准的关系本标准与相关的法律法规相衔接、无冲

10、突，能与现行有效的相关标准相协调、相一致。五、主要条款的说明，主要技术指标、参数、试验验证的论述本标准规定了三七茎叶皂昔的提取和纯化方法，包括定义、工艺流程、设施设备、原料质量要求、工艺要求、提取物质量控制及包装、贮存和运输。适用于三七茎叶皂昔的制备。主要技术指标、参数、试验验证：(一)提取工艺研究三七茎叶样品：采自文山州广南县，按DBS 53/024-2017的方法检测，人参皂昔Rb3的含量为1.37虬本标准以Rb3的含量为质控指标，对提取主要工艺(酶辅助提取、超声提取、热回流提取、常温浸提、渗漉提取、高温高压提取、微波提取)进行筛选，获得最佳提取方案。1.酶辅助提取方法的筛选根据文献报道利

11、用酶辅助提取可有效提高目标产物的提取效率，本研究利用不同酶辅助处理的方法进行三七茎叶皂昔提取的多次实验，确定提取方法并考察三七茎叶皂苔在提取过程中的稳定性。方法：(1)胰酶处理：三七茎叶粉置锥形瓶中，在37下，分别加入胰酶，静置反应2 h,调pH至7.00,过滤取滤液浓缩至干。(2)脂肪酶处理：三七茎叶粉置锥形瓶中，在37下，分别加入脂肪酶，静置反应2 h,调pH至7.00,过滤取滤液浓缩至干。(3)蛋白酶处理：三七茎叶粉置锥形瓶中，在37下，分别加入胃蛋白酶，静置反应lh,调pH至7.00,过滤取滤液浓缩至干。(4) a-淀粉酶处理：三七茎叶粉置锥形瓶中，在37下，分别加入a-淀粉酶，静置反

12、应15 min,调PH至7.00,过滤取滤液浓缩至干。(5)纤维素酶处理：三七茎叶粉置锥形瓶中，在37下，分别加入纤维素酶，静置反应16h,调pH至7.00,过滤取滤液浓缩至干。分别将不同酶处理的与未处理的三七茎叶粉置于圆底烧瓶中，分别加入水中，80水浴3。01吊，提取2次，过滤合并滤液浓缩至干。结果：由图1可知，不同的酶处理对三七茎叶中人参皂昔Rb3的提取率有较大影响。a-淀粉酶处理下，Rb3的提取率为65.856.47%,水提组提取率为58.031.62%。但a-淀粉酶处理下的提取率与水提组相比无显著性差异(p 0.05)。胰酶、脂肪酶、木瓜淀粉酶、纤维素酶处理下，Rb3的提取率分别为 2

13、6.450.82%、20.041.91%、42.392.39%和 38.156.47%,均低于水提组。因此，酶辅助处理下，除a-淀粉酶外，其余酶处理不利于人参皂昔的提取。由图2可知，不同的酶处理对三七茎叶提取物中总皂昔含量有较大影响。胰酶辅助提取所得浸膏中总皂甘含量为240.6214.68 mg,脂肪酶辅助提取所得浸膏中总皂昔含量为232.0736.52mg,木瓜蛋白酶辅助提取所得浸膏中总皂昔含量为216.906.79 mg,纤维素酶辅助提取所得浸膏中总皂昔含量为 73.4618.92 mg,水提组提取所得浸膏中总皂音含量为248.54L55 mg,其中胰酶、脂肪酶所得提取物中总皂昔与对照组相

14、比无显著差异。其余酶处理条件下，提取物中总皂昔的含量均显著减少（p0.05）。结论：综合图1和图2,可知虽然a-淀粉酶处理下，人参皂昔的Rb3的提取率与水提组相当，但是其总皂音的得率较水提组低。同时通过图3、图4和图5对比可知（红箭头处为Rb3）,胰酶和脂肪酶处理条件下，三七茎叶中人参皂普Rb3提取率较低。因此，综上所述在三七茎叶中皂昔的提取过程中，不建议采用酶辅助提取。图1不同酶辅助处理对人参皂昔Rb3提取率影响不同酶辅助处理对浸膏中三七总皂音含量的影响图3脂肪酶辅助处理下所得三七茎叶浸膏的HPLC图图4胰酶辅助处理下所得三七茎叶浸膏的HPLC图mAU3000-2500-2000-1500-1000-500-0-170140 mid图5对照组所得三七茎叶浸膏的HPLC图2.其他提取方法的筛选利用现有文献专利报道的总皂音提取方法如超声提取、热回流提取、常温浸提、渗漉提取、高温高压提取、微波提取等对三七茎叶皂菩提取进行多次实验，考察适宜的提取方法，并考察三七茎叶皂昔在提取过程中的稳定性。方法：(1)超声提取：三七茎叶粉置于锥形瓶中，以液料比10:1的比例加入水，进行超声提取，每次