《牛乳及其制品中α-乳白蛋白和β-乳球蛋白的测定 液相色谱法》编制说明.docx

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1、农业行业标准乳及乳制品中-乳白蛋白和0-乳球蛋白的测定液相色谱法（征求意见稿）编制说明中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业农村部奶产品质量安全风险评估实验室（北京）农业农村部奶及奶制品质量监督检验测试中心（北京）内蒙古智慧质量中心有限公司黑龙江飞鹤乳业有限公司一、工作简况（-）任务来源2018年10月，中国农业科学院北京畜牧兽医研究所完成了乳及乳制品中（X-乳白蛋白和-乳球蛋白的测定液相色谱法标准草案和项目建议书等书面材料，向全国畜牧业标准化技术委员会提出申报。2019年6月，农业农村部发布关于下达2019年农业国家、行业标准制定和修订项目任务的通知（农质标函（2019）77号）批准项目立项，

2、项目计划编号：农质标函（2019）77号2019-20,标准起草单位为中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，协助单位包括农业农村部奶产品质量安全风险评估实验室（北京）、农业农村部奶及奶制品质量监督检验测试中心（北京）、内蒙古智慧质量中心有限公司、黑龙江飞鹤乳业有限公司。（二）制定背景牛奶是人们饮食结构中十分重要的食品，具备较高的营养价值,被认为是最完美的天然食品之一，在预防各种慢性疾病，促进人体各项机能成长等方面有着显著功效。乳蛋白是牛奶中主要的营养物质，它的含量是衡量牛奶营养价值高低的重要指标之一。-乳白蛋白和P-乳球蛋白为牛奶乳清蛋白中重要的组分，具有较高的营养价值及功能特性。研究显示，-乳白

3、蛋白是必需氨基酸和支链氨基酸的极好来源，具有调节蛋白质平衡，促进免疫系统发育的作用。-乳白蛋白与锌离子结合可以激活免疫因子，减少腹泻。此外，-乳白蛋白富含的色氨酸是神经发育的重要因子，能够显著改善婴幼儿的睡眠质量。乳球蛋白能够与脂溶性维生素结合，从而促进他们的吸收；-乳球蛋白有抗高血压、抗病毒、有助于钙、矿物质吸收等功能特性，已经被越来越多地应用于乳制品、婴幼儿配方食品中。-乳白蛋白和P-乳球蛋白是乳制品质量评判的重要指标之一。目前，国内外均无奶及奶制品中乳白蛋白和-乳球蛋白的检测方法标准，建立高灵敏检测方法一直是制约奶业高质量发展的关键技术难题之一，迫在眉睫。（）起草过程第一阶段：起草阶段1

4、）成立起草组在接到标准制定任务后，2019年6月成立了标准起草组，包括XXX共11人（见表1）o2019年7月，标准起草组围绕-乳白蛋白、B乳球蛋白的检测技术等方面，制定了详细的实施方案和技术路线。表1标准起草组成员及分工序号姓名单位分工1XXX中国农业科学院北京畜牧兽医研究所整体方案设计，组织协调2XXX中国农业科学院北京畜牧兽医研究所标准征求意见、方法验证3XXX中国农业科学院北京畜牧兽医研究所方法优化、标准文本撰写。4XXX中国农业科学院北京畜牧兽医研究所方法优化、材料完善5XXX中国农业科学院北京畜牧兽医研究所方法优化、材料完善6XXX中国农业科学院北京畜牧兽医研究所材料检查修改7XX

5、X中国农业科学院北京畜牧兽医研究所材料检查修改8XXX中国农业科学院北京畜牧兽医研究所材料检查修改9XXX中国农业科学院北京畜牧兽医研究所材料检查修改10XXX内蒙古智慧质量中心有限公司方法验证I1XXX黑龙江飞鹤乳业有限公司方法验证2）收集和分析相关参考文献2019年6月到12月，收集到如下国内外相关法律法规、标准、书和文章，为标准起草提供了参考。1曹阳.-乳白蛋白研究现状.食品科学，2002,2312:132-138.程金波.不同热处理方式对牛奶中IgG和-乳白蛋白的影响.华北农学报，2010,25:170-174.3程静.反相高效液相色谱法检测牛初乳乳白蛋白的方法研究.乳业科学与技术20

6、09,321:30-31.4顾媛.毛细管电泳法检测婴幼儿乳粉中乳白蛋白的质量分数.中国乳品工业，2011,395:54-6.5兰欣怡.不同加热条件和添加复原乳对牛奶热敏感指标的影响硕士学位论文.湖南：湖南农业大学，2010.6李慧.反相高效液相色谱法测定乳清蛋白中的和（X-乳白蛋白.色谱，2007,251:116-117.7任璐.采用HP1C测定乳白蛋白质量浓度的方法研究.中国乳品工业，2009,372:49-52.8王飞.反相高效高效液相色谱法测定婴儿乳粉中-乳白蛋白的含量.中国酿造，2012,317:167-168.9许宁.高效毛细管电泳法测定牛-乳白蛋白的含量.中国医院药学杂志，2005

7、,254:296-297.10许宁.牛-乳白蛋白的反相高效液相色谱法含量测定.药物分析杂志，2004,1:49-51.11岳虹.高效高效液相色谱法测定乳品中乳白蛋白的含量.乳业科学与技术，2014,374:18-21.12张红.-乳白蛋白热稳定性及热变性动力学的研究.中国乳品工业，2006,344:20-23.13张京顺.乳与乳制品中主要乳清蛋白组分的定量分析检测方法研究博士学位论文.杭州：浙江大学，2012.14张林田.反相高效液相色谱法测定食品添加剂（X-乳白蛋白.理化检验:化学分册，2010,317:65-66.15章寅.乳制品中乳白蛋白的测定.现代农业科技，2013,16:291-29

8、2.16赵凌国.阳离子交换色谱及动态涂层毛细管电泳法检测牛奶中（X-乳白蛋白含量.分析测试学报，2014,333:339-343.17朱鑫鑫.RP-HP1C法分离和定量测定未变性的乳清蛋白成分.中国乳品工业，2012,405:51-54.18程静.反相高效液相色谱法检测牛初乳0-乳球蛋白的方法研究.乳业科学与技术2009,321:30-31.19顾媛.毛细管电泳法检测婴幼儿乳粉中P乳球蛋白的质量分数.中国乳品工业，2011,395:54-6.20金瑛.复原乳鉴别指标探讨.中国乳品工业，2006,348:43-45.21兰欣怡.不同加热条件和添加复原乳对牛奶热敏感指标的影响硕士学位论文.湖南：湖

9、南农业大学，2010.22李慧.反相高效液相色谱法测定乳清蛋白中的和P-乳球蛋白.色谱，2007,251:116-117.23李文.低乳糖奶的褐变抑制技术.中国乳品工业，2004,326:20-23.24任璐.采用HP1C测定乳球蛋白质量浓度的方法研究.中国乳品工业,2009,372:49-52.25孙琦.不同热处理工艺对牛乳中热敏感成分的影响.食品与发酵工业，2012,3811:47-53.26王飞.反相高效液相色谱法测定婴儿乳粉中B-乳球蛋白的含量.中国酿造，2012,317:167-168.27许宁.高效毛细管电泳法测定牛-乳球蛋白的含量.中国医院药学杂志，2005,254:296-29

10、7.28许宁.牛P-乳球蛋白的反相高效液相色谱法含量测定.药物分析杂志，2004,1:49-51.29岳虹.高效液相色谱法测定乳品中-乳球蛋白的含量.乳业科学与技术，2014,374:18-21.30张红.。-乳球蛋白热稳定性及热变性动力学的研究.中国乳品工业，2006,344:20-23.31张京顺.乳与乳制品中主要乳清蛋白组分的定量分析检测方法研究博士学位论文.杭州：浙江大学，2012.32张林田.反相高效液相色谱法测定食品添加剂P-乳球蛋白.理化检验:化学分册，2010,317:65-66.33章寅.乳制品中-乳球蛋白的测定.现代农业科技，2013,16:291-292.34赵凌国.阳离

11、子交换色谱及动杰涂层毛细管电泳法检测牛奶中-乳球蛋白含量.分析测试学报，2014,333:339-343.35Char1esJ.S1angenandServaasVisser.UseofMassSpectrometrytoRapid1yCharacterizetheHeterogeneityofBovinea-1acta1bumin.JAgricFoodChem,1999,47(11):4549-4556.36JHarveyE.Deve1opmentandapp1icationofanoptica1biosensorimmunoassayfora-1acta1bumininbovinemi1k

12、.InterDairyJ.2009,19(1):36-42.37 JacksonJ.G,eta1.Amu1tinationa1studyofa-1acta1buminconcentrationsinhumanmi1k.JNuiriBiochem,2004,15(9):517-521.38 YipingR,ZhengH,XiaojunC,JingshunZ,ZengxuanC,YongjiangW.Simu1taneousdeterminationofbovinea-1acta1buminand-1actog1obu1inininfantformu1aebyu1tra-high-perfbrma

13、nce1iquidchromatography-massspectrometry.Ana1yticaChimActa,2010,667:96-102.39 DingX,eta1.Ana1ysisofa-1acta1bumin,-1actog1obu1inAandBinwheyproteinpowder,co1ostrum,rawmi1k,andinfantformu1abyCEand1C.DairyScience&Techno1ogy,2011,912:213-225.40 StandardizationIDF,1iquidmi1k.Determinationofacidso1ub1eb-1a

14、ctog1obu1incontent.Reverse-phaseHP1Cmethod.2005.41 DEWC,eta1.Bioactivityof-1actog1obu1inanda-1acta1buminTechno1ogica1imp1icationsforprocessing.InterDairyJ,2006,1611:1229-1240.42 MeixiaChen,eta1.Determinationofnative1actoferrininmi1kbyHP1ConHiTn1PTMHeparinHPco1umn.FoodAna1Methods,2019,12(11):2518-252

15、6.由于本文件涉及的内容在奶业发达国家已经具有成熟的研究基础，考虑到我国奶业发展现状以及与国际奶业发达国家有效接轨，标准起草组首先查阅了以上相关参考文献，认为参考文献中关于-乳白蛋白和0乳球蛋白的检测对起草本标准具有参考或是引用价值。3）实验工作，方法建立标准起草组在广泛查阅收集国内外相关技术资料和标准基础上，拟定了样品前处理方法和仪器检测条件等初步实验方案，开展了乳及乳制品中-乳白蛋白和B-乳球蛋白的检测技术研究。本方法主要围绕生乳、巴氏杀菌乳、高温杀菌乳、灭菌乳和乳粉中乳白蛋白和P-乳球蛋白的检测，从色谱柱的选择、检测波长的选择、前处理方法的确定、调PH后静置时间的确定、方法选择性、方法线性范围、标准溶液保存稳定性、方法定量限、方法准确度与精密度、实际样品的测定等多个方面对反相液相色谱法和凝胶渗透色谱法进行了优化实验和验证实验。4）试验验证情况2023年5月委托农业农村部乳品质量监督检验测试中心（北京）、农业农村部乳品质量监督检验测