PCR实验室室内质量控制程序.docx

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1、PCR实验室室内质量控制程序1 .目的：保证检验结果的重复性。2 .范围：本室开展的2019-nCov、HBV、CT等项目PCR扩增检测的检测过程及结果。3 .操作人：4 .工作流程：4.1 质控品的来源：购买或自制质控品。4. 2绘制RCV图（对数图）a）在纵坐标上标出X、X+2s、X 2s、X+3s、X 3s的位置，并将其具体数值标在左侧标尺上（均换算为对数值）。b）用红笔画出X2s线，用蓝笔画出X3s线，即成为一张“空图”。其中每一小格代表实际检测数值的1/10。还正填齐图纸上方的各项，如：试验项目，质控血清来源及批号，起止日期，主要仪器等。还应填上RCV中测定中所得的X、s、CV。测定

2、过程中的特殊情况，应在备注栏内记录。c）在图纸下方“日期”、“测定值”、和“操作者”栏内按原始记录填入相应内容，边填写边核对。注意数据顺序应严格按实际操作情况，不得颠倒。日期一栏内，应填写实际日期。未做测定的日期在图上留出空格似更为合理，因为这样可以真实反应情况，便于分析误差原因。d）画出每个检测值所对应的图点。每个图点在图上的横坐标为其日期（或序号），而纵坐标（即与相距的小格数目）可按下式计算：该点对应的检测值一值每个点的纵坐（X）标= 图中每个小格所代表的检测数值e）计算结果为正数，则点在X轴上方，反之，则在X轴下方。各点画在图上后，用直线将各点顺序连接，以便于观察。4.3室内质控图的使用

3、方法4. 3. 1描点a）图中X线为靶线，X2s为警告线，X3s为失控线。对于同一批号的质控血清不论使用几个月，其空图均不变化。只要将图纸上方“时间”项填入当前实际月份即可。b）每次实验将该批号质控血清按有关规定程序复融随同病人的标本同时检测。将日期、检测结果和操作者如实记录在图下方的相应位置，并按前面的方法画出图上的对应点,用直线将该点与前一天的点连接。c）月底计算当月全部质控血清检测结果的X、s和CV,并进行图形分析和小结，将质量控制图存入质控资料档案。4. 3. 2图形分析a）如果在X3s线以外，则为失控，应立即报告有关负责人，迅速查找原因。必要时复测标本，然后方可发出报告，并将失控情况

4、、查找过程及处理结果等详细记录。b）如果在X2s线以外，或出现连续6点以上在一侧等规律变化，均应即刻向实验室负责人反映，并积极查找原因。但当天的检验结果一般可以发出。4. 3. 3通过观察图形的规律性变化进行误差分析，消除误差来源a）曲线漂移：提示有系统误差，准确度发生了一次性的向上或向下改变。这种变化往往是由于一个新的情况引起的。如更换不同批号试剂，启用新批号的质控血清、操作人员的变换等。在找原因时，应重点注意“漂移”前后发生了哪些变动的因素。b）趋势性变化：向下或向上的趋势性变化表明检测的准确度发生了渐渐地变化。这种变化往往是由于一个逐渐改变的因素造成的。如质控血清的降解，试剂效价的降低等

5、。c）连续多点分布在靶值一侧：目前，一般认为质控血清的检测结果连续6天以上出现在靶值同一侧，则应迅速查找原因，争取尽快使之回复围绕在靶值随机分布的状态。因为按照统计学原理,由纯随机误差造成的这种情况的可能性很小。连续6天以上出现在靶值同一侧可能性小于1.5%。因此凡出现连续6天以上出现在靶值同一侧者均有可能存在非随机误差因素。如结果与靶值偏离并不太大，不会给临床使用带来太大影响时，一般化验报告可以照常填发。d）其他规律变化：（周期性等）4. 3. 4通过图形的资料对比进行误差分析，消除误差来源a）每个月的月底将该月的全部质控血清检测结果的X和s与该批测定的X和s进行比较。如果X发生了变化，说明

6、准确度发生了变化提示有非随机误差存在。如果当月s不同侧表明检测的精密度发生了变化。b）将使用同一批号质控血清的CT值的X和s按月份列出。如果X逐在月上升，应考虑保存不当造成的试剂效价降低或质控血清本身出现降解。如果各月份X基本一致而S逐月加大，则主要提示常规工作的精密度下降，应重点从操作、管理上找原因。c）在数年中，把每个月的CV和失控规律列成表，可用作检测质量的历史性回顾及趋势分析。4.4自制血清质控品步骤4. 4. 1自制血清质量控制品a）自制的质量控制血清来自临床收集的已知HBV阳性血清,每收集到一份冻存于一2（rc。阴性血清从血站购买。b）预定室内质控品靶值为1X105,总量33. 5

7、ml,计算各份血清的混合量。c）室温下复融阴阳性血清，在玻璃摇瓶中按比例混合血清,充分混匀。d）用合格的0.5ml离心管盛装质控血清，每管90H 1，分装超过372管，剩余血清根据废弃物处理及生物防护操作程序处理。e）每31管质控品装一小袋，可分成12小袋，置于一2（TC冰箱备用。4. 4.2测定及计算RCV取准备用于下一阶段室内常规质量控制的血清，每天随病人标本测定一管，连续20次实验后计算各项目的测定结果的X、s和CV。此处的CV即RCV。RCV的计算公式如下：其中X为RCV测定中所得20份结果的均值。表示总和。n表示结果的份数（或天数）。-_（X-M）Wy n-l其中各符号代表的歙与X计

8、算公式相同。n-l为自由度。S计算也可以使用下面的公式J n-l其中EX2为各检测结果平方值之总和。（X） 2为各检测结果之和的平方。室间质评管理程序1 .目的：保证检验结果的准确性。2 .范围：卫生部或省临检中心下发的PCR室间质控血清检测。3 .职责：3.1 实验室工作人员均须熟知并遵守本程序。3. 2本程序的改动，可由任一使用本程序的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：实验室负责人、科室主任。4 .操作人：5 .工作程序：5. 1质控标本的接收和验收：收到部或省临检中心寄来的质控血清，先由接收人登记、签字，根据质控标本的有关说明对血清的数量、批号、包装进行验收，将质控标本按要求置-20

9、七保存于标本制备区，如发现异常应及时与临检中心联系，并进行登记。5. 2质控标本的检测按常规临床标本对待，检测前先根据说明进行血清的复溶。5. 3室间质评样本必须按实验室常规工作进行，由进行常规工作的人员测试，工作人员必须使用实验室的常规检测方法和试剂。实验室负责人和检测人员在由质评组织者提供的表上签字，标明室间质评的标本是按常规标本一样处理。5. 4实验室检测EQA样本的次数必须与常规检测病人样本的次数一样（即一次）。5. 5EQA样本的检测在部或省临检中心规定的时间内进行，检测结果的上报必须在截止日期前网上报或挂号信寄出。检测结果必须有检测者和实验室负责人签字。5.6室间质评的检测结果和反馈结果均记录于室间质评记录表,根据反馈结果分析室间质评的状态，如有失控应查找原因,并采取相应的措施。5. 7严禁与其它实验室交流室间质评样本的检测结果。5. 8每次室间质评结束后要进行结果总结，科主任签字。人民医院PCR实验室