乙肝e抗原标准操作程序SOP文件.docx

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1、ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-17乙肝e抗原版序：ABCD页码：第1页，共3页用途：用免疫学方法定性测定人血清或血浆中的乙肝e抗原（HbeAg）。电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏Elecsys2010免疫测定分析仪。概述：HBeAg可出现在急性乙肝病毒感染者的血清中，但维持在可检测水平上的时间较短（几天-几周）。HBeAg阳性提示有大量病毒存在。恢复期HBeAg转阴，取而代之的是相应的抗体，即抗HBe阳性。原理：采用双抗体夹心法原理，整个过程18分钟完成。 第1步：35ul标本、生物素化抗HBeAg单克隆抗体和钉（Ru）标记的抗IIBe抗体混匀，形成夹心复合物。 第2步：加

2、入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 检测结果由Elecsys软件自动测出，与预先用抗HBe标定的标本Cutoff值比较得出.试齐小M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6. 5mlo粒子浓度0.72mgl,生物素结合能力：470ng生物素mg粒子。含防腐剂。R1：生物素标记的抗HBeAg单克隆抗体（灰盖）,1瓶，12ml,浓度0.8mgl, Tris缓冲液0.05moll, pH7.4含防腐剂。R2：

3、Ru（bpy）32+标记的抗HBeAg单克隆抗体（黑盖），1瓶，12ml。浓度R3mgl,Tris缓冲液0.05moll, pH7.4含防腐剂。Cal 1阴性对照液（白盖），2瓶，lml瓶人血清，含防腐剂.Cal 2阳性对照液（黑盖）,2瓶,lml瓶,HBeAg （重组抗原）=3. 5Uml, HEPES缓冲液pH7. 4储存和稳定性：存放在2-8度，切莫倒置。未开封，可稳定至标明的保质期。M, RI , R2试剂开封后，2-8度，8周;在仪器上，8周。Cal 1, Cal 2开封后，2 8度，8周；在仪器上，5小时。ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-17乙肝e抗原版序：ABCD

4、页码：第2页，共3页注意：对照液瓶应直放，保证液体不接触瓶塞。标本采集和准备：血清：按标准常规方法采集。血浆：肝素、EDTA-K3或枸椽酸钠和草酸盐抗凝。标本在2 8度可稳定7天，-20度可稳定3个月。标本可冻融6次。冻融的标本，有沉淀的标本和反复检测的标本使用前需离心。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。检测步骤：提供的材料：货号：1820583, 100人份的Elecsys HBeAg试剂盒包含： M链霉亲和素包被的微粒 R1生物素化的抗HBeAg抗体 R2三联毗咤钉标记的抗HBeAg抗体 Cal 1阴性对照液1 Cal 2阳性对照液2需要的材料(未提供)： Elecsys HBeAg质控品 1

5、和2 (PreciControl)货号 1876376 Elecsys通用稀释液货号1732277 Elecsys 系统缓冲液(ProCe)货号 1662988 Elecsys测量池清洗液(CleanCell)货号 1662970 Elecsys 添加剂液(SysWash)货号 1930346 Elecsys 系统清洗液(SysClean)货号 1298500方法：按仪器操作说明进行操作。检查试剂与消耗品是否充足。使用前需混匀微粒。仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参数，不需手工输入。如果特殊情况下仪器无法阅读条形码,可以手工输入15位数字。将冷藏试剂预温到20度后放置于Elec

6、sys2010的试剂盘上，避免产生泡沫。系统自动控制试剂温度和开/关试剂瓶盖。将HBeAgCall和Cal2放在2010分析仪的标本测试区。只在标定时打开瓶盖。条形码自动提供定标所需的数据资料。定标完成后，将Cal 1和Cal 2放回28度保存。定标：Elecsys HBeAg已经用德国Paul Ehrlich研究所的“HBe参照抗原82(HBeAg),标定。所用单位(U/ml)是Paul Ehrl ich研究所单位。每批HBeAg试剂盒必须用新鲜试剂和HBeAgCall, Cal2定标一次。另外，以下情况需要再次定标：ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-17版序：ABCD乙肝e抗

7、原页码：第3页，共3页 一个月以后（使用同一批号试剂） 7天以后（使用同一只试剂盒） 根据需要进行标定：如质控结果超出范围时。定标范围：阴性（Cal 1） 300-2000阳性（Cal 2） 20000-100000质控：ElecsysHBeAg质控1和2 （PreciControl） 0质控1和质控2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。计算：2010仪器会自动根据Call和Cal2的测定值计算Cut-off值。每一个标本的结果以“有反应性”或“无反应性”以及Cut-off指数形式或标本

8、信号/Cut-off报告。结果解释：标本的Cut off指数1. 0判断为HBeAg阴性。标本的Cut off指数21. 0判断为HBeAg阳性。干扰因素：该方法不受黄疸（胆红素25mgdl）、溶血（血红蛋白1.6gdl）、脂血（脂质1500mgdl）和生物素40ngml等干扰。接受高剂量生物素（5mg天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干（2400Uml） o没有钩状效应。19种常用药物经试验对本测定无干扰。接受过小鼠单抗治疗或诊断的病人会出现假阳性反应。Elecsys HBeAg检测结果应结合病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。稀释：可用Elecsys通用稀释液稀释标本。HBV阴性的正常人血清也可用来稀释标本。