乙肝核心抗原的IgM型抗体anti-HBc IgM标准操作程序SOP文件.docx

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1、ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-20anti-HBc IgM版序：ABCD页码：第1页，共3页用途：用免疫学方法定性测定人血清或血浆中乙肝核心抗原的IgM型抗体（抗-HBcIgM） o电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏Elecsys2010免疫测定分析仪。概述：乙型肝炎核心抗原（HBcAg）是一种非糖基化蛋白质（P22）,形成乙型肝炎病毒的核壳，包裹HBV-DNA和DNA聚合酶。在产病毒的肝细胞胞浆中，核壳又被乙型肝炎表面抗原（HBsAg）包裹形成病毒颗粒。因此，血清中测不到游离的HBcAg或裸露的病毒核心抗原。在乙型肝炎病毒的复制期间，血清中出现抗TBc的IgM抗体，并在病毒

2、复制停止后的数周或数月后仍可测到。因此，在急性乙型肝炎和慢性乙型肝炎的发作期，可测到高浓度的抗TIBcIgM抗体。抗TIBcIgM抗体和HBsAg联合测定用于诊断急性乙肝病毒感染。单靠抗TBcIgM一项指标不能鉴别是急性乙肝还是迄今尚未诊断出的慢性乙肝急性发作。因为二者临床表现很相似。随访、影像和肝活检均有助于两者的鉴别诊断。原理：采用四链捕获原理，整个过程18分钟完成。 第1步：10l标本（已经1： 400预稀释）与抗-Fdy试剂作用,封闭特异的IgG。 第2步：加入生物素化的抗人IgM单克隆抗体、钉标记的HBcAg和链霉亲和素包被的微粒。标本中的抗-HBc IgM抗体和钉标记的HBcAg、

3、生物素化的抗人IgM单克隆抗体形成夹心复合物，复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。Elecsys自动将标本产生的光电信号与从抗-HBc IgM定标液得出的Cutoff值相较。试齐小M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6. 5mlo粒子浓度0.72mgl,生物素结合能力：470ng生物素mg粒子。含防腐剂。R1：抗-HBc IgM预处理液（灰盖），1瓶，10ml ：抗人Fdy抗体（羊）,浓度高于0.05mgml,磷酸缓冲液0.1moll,

4、pH7.4,含防腐剂。R2：生物素化的抗人IgM抗体;R体bpy）32+标记的HB的g （黑盖），1瓶，10ml:生物素标记的抗人IgM单克隆抗体，浓度高于600ng/ml； Ru （bpy） 32+标记的HBc g（E. coli,r DNA）浓度高于200ngmL磷酸缓冲液0.lmoll, p7. 4,含防腐剂。Cal 1阴性定标液1 （白盖），2瓶，L0ml瓶人血清基质，含防腐剂Cal 2阳性定标液2 （黑盖）,2瓶，L0ml瓶,抗-HBc IgM,浓度高于100PEI U*d,人血清基质，含防腐剂。（注：* Paul Ehrlich研究所单位）ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-

5、02-20anti-HBc IgM版序：ABCD页码：第2页，共3页存放在2-8度，切莫倒置。未开封，可稳定至标明的保质期。M, RI , R2试剂开封后，2-8度8周；在仪器上，4周。Cal 1, Cal 2开封后，2-8度8周；注意：保证定标液不污染瓶盖。标本采集和准备：血清：按标准常规方法采集。血浆：肝素钠、EDTA-K3或枸椽酸钠抗凝。标本在28度可稳定6天，-20度可稳定3个月。标本可冻融5次。有沉淀的标本使用前需离心。可使用加热灭活的标本。检测步骤：提供的材料：货号：1820567, 100人份的Elecsys抗-HBcIgM试剂盒包含： M链霉亲和素包被的微粒 R1抗-HBc I

6、gM预处理液 R2生物素化的抗人IgM抗体，三联毗咤钉标记的HBcAg Cal 1阴性定标液 Cal 2阳性定标液需要的材料(未提供)： Elecsys 抗一HBc IgM质控品 1 和2 (PreciControl 抗一HBcIgM)货号 1876333 Elecsys通用稀释液货号1732277 Elecsys2010 分析仪 Elecsys 系统缓冲液(ProCe)货号 1662988 Elecsys测量池清洗液(CleanCell)货号 1662970 Elecsys 添加剂液(SysWash)货号 1930346 Elecsys 系统清洗液(SysClean)货号 1298500方法

7、：按仪器操作说明进行操作。检查试剂与消耗品是否充足。使用前需混匀微粒。仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参数，不需手工输入。如果特殊情况下仪器无法阅读条形码，可以手工输入15位数字。Elecsys2010：将冷藏试剂预温到20度后放置于仪器的试剂盘上，避免产生泡沫。系统自动控制试剂温度和开/关试剂瓶盖。将抗-HBc TgM Cal 1和Cal 2放在分析仪的标本测试区。只在标定时打开瓶盖。条形码自动提供定标所需的数据资料。定标完成后,将Cal 1和Cal 2放回28度保存。ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-20anti-HBc IgM版序：ABCD页码：第3页，共3

8、页定标：每批试剂盒必须用新鲜试剂和抗-HBcIgM Cal l,Cal 2定标一次。另外，以下情况需要再次定标：Elecsys2010： 一个月（同一批号试剂） 7天（放置仪器上的同一试剂盒） 根据要求进行标定：如质控结果超出范围时； 根据规定进行多次标定。定标液范围：（电化学发光信号计数）阴性（Cal 1） 600-3500阳性（Cal 2） 24000-150000质控：用Elecsys抗HBc IgM质控品1和2 （PreciControl）。质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，

9、应采取校正措施。计算：仪器会自动根据Cal 1和Cal 2的测定值计算Cut-off值。每一个标本的结果以有反应性或无反应性以及Cutoff指数形式（标本信号/ Cutoff）报告。结果解释：标本的Cutoff指数=1.0判断为抗HBc IgM有反应性，可判定该标本抗HBc IgM阳性。标本的Cutoff指数L0判断为抗-HBc IgM无反应性，可判定该标本抗-HBcIgM阴性。干扰因素：该方法不受黄疸（胆红素25mgdl）、溶血（血红蛋白2gdl）、脂血（脂质1500mgdl）和生物素G00ngml等干扰。接受高剂量生物素（5mg天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（4200Uml） o 22种常用药物经试验对本测定无干扰。接受过小鼠单抗治疗或诊断的病人可能会出现假阳性反应。偶尔会遇到抗链酶亲和素抗体的干扰。Elecsys抗-HBc IgM测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。稀释：用Elecsys通用稀释液预先稀释标本，必要时还可进一步稀释。正常参考值：Cutoff值大约设在100PEIUl0在急性HBV感染者当中，抗HBcIgM水平一般远高于此值；恢复期抗-HBc IgM水平低于此值；慢性肝炎患者抗-HBc IgM水平在此值附近。