高良姜素对肺癌细胞H1299的抑制作用及机制研究.docx

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1、高良姜素对肺癌细胞H1299的抑制作用及机制研究廖秀珊海南博鳌一龄生命养护中心检验科，海南琼海571400【摘要】目的探讨高良姜素对肺癌细胞H1299的抑制作用及机制研究。方法取对数生长期的H1299细胞铺板于96孔板中，采用不同浓度高良姜素(0、2.5、5、10、20、40、80mo11)处理24h,采用MTT法检测高良姜素对H1299细胞增殖的影响，计算半数抑制浓度(IC50),取0、1/2、1/4、1/8IC50(0、25、12.5、6.25mo11)分为高、中、低剂量高良姜素进行后续实验，采用流式细胞术、免疫印迹法检测H1299细胞的凋亡率和Wnt3a、-catenin.Bax、Bc1

2、-2的蛋白表达。结果与对照组相比，580mo11高良姜素细胞均可显著抑制肺癌细胞H1299细胞增殖，差异具有统计学意义(PBaX和Bc1-2蛋白表达水平分别为(4.23+0.45)%、(1.770.07)(2.510.15)(0.56+0.09)(1.890.12),6.25mo11高良姜素细胞凋亡率、Wnt3a、-catenin.Bax和Bc1-2蛋白表达水平分别为(9.021.01)%、(0.970.11)(0.990.05)(0.890.04)(1.210.09),12.5mo11高良姜素细胞凋亡率、Wnt3a、-cateninBax和Bc1-2蛋白表达水平分别为(18.482.33)%

3、、(0.560.07)s(O.88O.11)s(1.210.1D(0.880.10),25mo11高良姜素细胞凋亡率、Wnt3a、-catenin、Bax和Bc1-2蛋白表达水平分别为(26.441.17)%、(0.310.04)s(0.430.05)(1.790.21)、(0.280.07),与对照组相比，低、中、高剂量组高良姜素可促进细胞凋亡率增加，降低Wnt3a.-catenin和Bc1-2蛋白表达水平，升高Bax蛋白表达水平，差异具有统计学意义(P0.05)结论高良姜素可以抑制肺癌H1299细胞增殖并促进细胞凋亡，其机制可能与促进Bax的蛋白表达和抑制Wnt3a、-catenin和Bc

4、1-2的蛋白表达有关。【关键词】高良姜素；H1299肺癌细胞；细胞凋亡Studyontheinhibitoryeffectofga1anginon1ungcancerce11H1299anditsmechanism.1IAOXiu-Shan.Departmentof1ahoratoiyMedicine,HainanBoaoYi1ing1ifeCareCenter,Qionghai571400,Hainan,China!AbstractObjectiveToexp1oretheinhibitoryeffectofga1anginon1ungcancerce11H1299anditsmechani

5、sm.MethodsTheH1299ce11sinthe1ogarithmicgrowthphasewerep1atedina96-we11p1ate,treatedwithdifferentconcentrationsofga1angin(0,2.5,5,10,20,40,80mo11)for24h,andMTTwasusedtodetectga1anga1ca1cu1atetheha1finhibitoryconcentration(IC50)ofH1299ce11pro1iferation,andtake0,1/2,1/4,1/8IC50(0,25,12.5,6.25mo11)intoh

6、igh,medium,and1owthedoseofga1anginwasusedforfo11ow-upexperiments,andtheapoptosisrateofH1299ce11sandtheproteinexpressionofWnt3a,-catenin,Bax,andBc1-2weredetectedbyf1owcytometryandwesternb1otting.Resu1tsComparedwiththecontro1group,580mo11ga1angince11scansignificant1yinhibitthepro1iferationof1ungcancer

7、ce11H1299ce11s(P0.05);ca1cu1atedbythefittingcurvemethod,ga1angin/Cso=5Omo11.0mo11ga1angince11apoptosisrate,Wnt3a,-catenin,BaxandBc1-2proteinexpression1eve1swere(4.230.45)%,(1.770.07),(2.510.15),(0.560.09),(1.890.12),6.25mo11ga1angince11apoptosisrate,Wnt3a,-catenin,BaxandBc1-2proteinexpression1eve1sw

8、ere(9.021.01)%,(0.970.11),(0.990.05),(0.890.04),(1.210.09),12.5mo11ga1angince11apoptosisrate,Wnt3a,-catenin,BaxandBc1-2proteinexpression1eve1swere(18.482.33)%,(0.560.07),(0.880.11),(1.210.11),(0.880.10),25mo11ga1angince11apoptosisrate,Wnt3a,-catenin,BaxandBc1-2proteinTheexpression1eve1swere(26.441.1

9、7)%,(0.310.04),(0.430.05),(1.790.21),(0.280.07).Comparedwiththecontro1group,the1ow,mediumandhighdosesofA1piniagingerItcanpromotetheincreaseofce11apoptosisrate,reducetheexpression1eve1ofWnt3a,-cateninandBc1-2protein,andincreasetheexpression1eve1ofBaxprotein.Thedifferencewasstatistica11ysignificant(PB

10、aX和Bc1-2蛋白表达水平将细胞均匀铺于6孔板中，待细胞贴壁，观察细胞融合度，当细胞融合度达到8090%时，加入对照组、低剂量、中剂量和高剂量组的高良姜素处理H1299细胞24h后收集细胞总蛋白，采用BCA试剂盒法测定蛋白浓度。取30g蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）,湿转，5%BSA室温封闭1h,加入一抗Wnt3a（1：1000）、-catenin（1：1000）、Bax（1：IooO）和Bc1-2（1：1000）4孵育过夜，TBST洗膜3次，每次10分钟，加入二抗（1：5000）室温孵育2h,TBST洗膜3次，每次15分钟，利用化学发光液显影。采用ImageJ软件进行分析，

11、以目的蛋白/内参蛋白（GAPDH）的灰度值作为蛋白的相对表达量。1.6 统计学方法采用SPSS19.0统计软件分析本研究中数据。符合正态分布的计量资料以平均值土标准差表示，组内比较采用配对r检验，多组间比较采用单因素方差分析并使用1SD-r法进行多重比较，不符合参数检验的数据比较采用秩和检验。P0.05表示差异具有统计学意义。2结果2.1 MTT检测不同浓度高良姜素对H1299细胞的生长抑制作用2.1.1 不同浓度高良姜素对H1299细胞的生长抑制作用不同浓度的高良姜素作用于肺癌H1299细胞24h后，高良姜素均可以抑制H1299细胞增殖（P0.05）,且随着剂量的增加，抑制增殖作用越强；同时，高良姜素对肺癌H1299细胞的半数抑制浓度为50mo110选取0、25、12.5、6.25mo11高良姜素进行后续实验。见表1。表1不同浓度的高良姜素对H1299细胞存活率的影响Concentration(mo11)Surviva1rate(%,xs