维生素EVitaminEVE试剂盒说明书.docx

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1、维生素E(VitaminE,VE)试剂盒说明书微量法100T/18S测定意义：维生素E(VitaminE)是一种脂溶性维生素，其水解产物为生育酚，是生物体中最主要的抗氧化剂之一，能阻止不饱和脂肪酸收到过氧化作用的损伤，维持不饱和脂肪酸细胞膜的完整性和正常功能，具有延缓衰老、预防溶血性贫血作用，在医药、化妆品、保健品、食品行业具有较高的应用价值。测定原理：VE还原Fe?+为Fe?+,Fe?+与1,10.菲罗咻产生有色络合物，在53Onm有特征吸收峰。自备实验用品及仪器：天平、研钵、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、漩涡震荡仪。试剂组成和配制：提取液：液体IOOm1X1瓶，

2、49保存。试剂一：液体2m11瓶，4C避光保存。试剂二：液体2m11支，4C保存。试剂三：液体2m11支，4C保存。试剂四：液体6m11瓶，4C保存。样本处理：1.组织：按照质量(g)：提取液体积(m1)为1：510的比例(建议称取约0.1g,加入Im1提取液)加入提取液，匀浆后用提取液定至Im1定至在漩涡混匀仪上震荡5min,于25,500Og离心IOmin,取上层测定。2.细胞：按照细胞数量(IO,个)：提取液体积(m1)为5001000:1的比例(建议500万细胞加入Im1提取液)，冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒，间隔7秒，总时间3min)后在漩涡混匀仪上震荡5min,于25

3、震,500Og离心IOmin,取上层测定。3.血清：取0.1m1,力口0.9m1提取液，漩涡仪混匀上震荡5min,于25,500Og离心Iomin,取上层测定。测定操作：对照管测定管样品(1)100100试剂一(1)2020试剂二(1)20试剂三(1)20充分混匀，252反应5min试剂四(1)6060充分混匀，于微量石英比色皿用6孔板，无水乙醇调零，测定53Onm处吸光值，记为A对照管和A测定管,AA=A测定管-A对照管。计算公式：a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下标准曲线：y=0.22x+0.0065R2=0.99781 .按照蛋白含量计算VE含量(gmgprot)=(A-0.0065

4、)0.22V反总(V样XCPr)=9.09(A-0.0065)Cpr2 .按照样本质量计算VE含量(gg)=(A-0.0065)0.22xV反总(V样xWV样总)=9.09(A-0.0065)W3 .按照细胞数量计算VE含量(g104ce11)=(A-0.0065)0.22V反总(V样X细胞数量V样总)=9.09(A-0.0065)细胞数量4 .按照液体体积计算VE含量(gm1)=(A-0.0065)子0.22XV反总V样x1=90.9(A-0.0065)V反总：反应总体积，0.2m1；V样：加入样本体积，0.1m1；V样总：加入提取液体积，1m1：Cpr：蛋白浓度，mg/m1：W：样本质量，

5、gb.用96孔板测定的计算公式如下标准曲线：y=0.11x+0.0065R2=0.99781 .按照蛋白含量计算VE含量(gmgprot)=(A-0.0065)0.11V反总子(V样XCPr)=18.18(A-0.0065)Cpr2 .按照样本质量计算VE含量(gg)=(A-0.0065)0.11V反总(V样xWV样总)=18.18(A-0.0065)W3 .按照细胞数量计算VE含量(g104ce11)=(A-0.0065)0.11V反总(V样X细胞数量V样总)=18.18(A-0.0065)细胞数量4 .按照液体体积计算VE含量(gm1)=(A-0.0065)0.11xV反总小V样1181.8(A-0.0065)V反总：反应总体积，0.2m1；V样：加入样本体积，0.1m1；V样总：加入提取液体积，1m1；Cpr：蛋白浓度，mg/m1：W：样本质量，g注意事项：若反应体系产生沉淀，需要将样品进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数。