乳香炮制后挥发性成分的变化及含量测定.docx

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1、乳香炮制后挥发性成分的变化及含量测定汪莹张玉珊孙丽平陈昊媛王庆闫凯莉齐滨刘莉分类号R917文献标志码A文章编号1001-0408 (2022)10-1172-05D0I10. 6039j. issn. 1001-0408.2022.10.04摘要目的分析乳香及其炮制品中挥发性成分的变化，并测定乙酸辛酯等4个成分的含量。方法提取乳香及炒乳香、醋乳香的挥发油，采用气相色谱-质谱(GC-MS)法鉴定其成分,并利用Xcalibur4.0软件及NIST2. 0质谱数据库对相似度280%的成分进行结构鉴定和数据分析，采用峰面积归一化法计算各成分的相对含量；采用GC法同时测定乳香及其炮制品中挥发性成分中柠檬

2、烯、乙酸辛酯、芳樟醇、正辛醇的含量并进行比较。结果从乳香、炒乳香、醋乳香挥发性成分中均鉴定出13个成分，主要为醇类、烯妙类和酯类等，均以乙酸辛酯的相对含量较高，分别为23. 86%,37. 80%,53. 86%J柠檬烯、乙酸辛酯、芳樟醇、正辛醇检测质量浓度的线性范围分别为 0. 00660.0664、0. 1792- 1,7920. 0. 0037-0.0370、0. 0328-0. 3280 (r 均大于 0.9995)；精密度、重复性、稳定性(24h)试验的RSD均小于2%；平均加样回收率分别为 98. 56%. 100. 02%.99. 13%,98. 66%(RSD2. 16,n=6

3、)o乳香中4个成分的平均含量分别为0. 15%、16.27%. 0. 36%.2. 26%,炒乳香中分别为 0. 85%、17.58%、0. 66%, 3. 47%,醋乳香中分别为0.50%. 19.75%. 0. 58%, 3. 34%o与乳香比较，炒乳香和醋乳香挥发性成分中乙酸辛酯、芳樟醇、正辛醇、柠檬烯的平均含量均显著升高(P0. 9995 )respectively；RSDsofprecision,repeatab i1i tyandstabi 1i ty(24h)testswerealllessthan2%；averagerecoverieswere98. 56% ,100. 02%

4、, 99. 13%and98. 66%, respectively (RSD2. 16,n=6 ) . Averagecontentsof4componentsin01ibanumwere0. 15%,16.27%,0.36%and2.26%,whilethoseoffried01ibanumwere0.85%,17.58%,0.66%and3. 47%,respectively；thoseof01ibanumstir-bakedwithvinegarwereO. 50%,19. 75%,0. 58%and3. 34%,respectively. Comparedwithlibanum,ave

5、ragecontentsofoctylacetate , linalool ,-octanolandlimoneneinvolatilecomponentsoffried01ibanumandlibanumstir-bakedwithvinegarwereincreasedsignificantly(P99. 5%)、芳樟醇对照品(批号 DST202218041,纯度298%)均购自成都乐美天医药科技有限公司；9度纯粮米醋(批号20220726)购自佛山市海天调味食品有限公司;无水硫酸钠(批号910824,纯度N99.0%)购自北京化工厂有限责任公司；正己烷、无水乙醇均为色谱纯，水为蒸偏水。6

6、批乳香药材(编号S1S6)于2022年9月购自不同药材公司，经长春中医药大学药学院肖井雷副教授鉴定为橄榄科植物乳香树B. carteriiBirdw,及同属植物B.bhaw-dajianaBirdw.树皮渗出的树脂。6批乳香药材的来源信息见表lo2方法与结果2.1乳香炮制品的制备2. 1.1炒乳香按本课题组前期所得最优炒制工艺制备炒乳香。称取乳香药材适量，于14(TC不断翻炒，翻炒频率为40次/min,炒制3min后，取出，晾凉。2.L 2醋乳香按本课题组前期所得最优醋制工艺制备醋乳香。称取乳香药材适量，于14(C炒制3min后，喷淋米醋(每100g乳香加1mL米醋)，再继续翻炒lmin后取出

7、，晾凉。2. 2挥发油的提取取乳香药材、炒乳香和醋乳香，粉碎，过三号筛，精密称取粉末20g,置于500mL圆底烧瓶中，加水300mU按2022年版中国药典(四部)通则“2204挥发油测定法”项下“甲法”提取挥发油，用适量无水硫酸钠干燥，备用。2. 3GC-MS 分析2. 3. 1色谱条件色谱柱为HP-5MS石英毛细管柱(30m0. 25, 0. 25 um);升温程序为初始温度70,保持5min,以l(Cnin升温至20(C并保持5min；载气为高纯氮气(99.999%),载气流量为1. OmL/min；进样口温度为260；气化室温度为25(TC；分流进样，分流比为50 ： 1;进样量为l.O

8、uL；溶剂延迟时间为3mino2. 3.2质谱条件离子源为电子轰击离子源，离子源温度为23CTC；电子能量为70eV；四极杆温度为15(TC；扫描范围为mz20500o2. 3. 3挥发性成分分析取“2.2”项下挥发油，加正己烷溶解,按“2.3.1” “2.3.2”项下条件进样分析，得到乳香药材、炒乳香、醋乳香挥发性成分的总离子流图(图1)。利用Xcalibur4. 0软件及NIST2. 0质谱数据库对相似度280%的成分进行结构鉴定和数据分析，并与文献9, 11进行比对，利用峰面积归一化法计算各成分的相对含量。结果显示，从乳香药材中共鉴定出13个成分，主要为乙酸辛酯(23. 86%)、乙酸葵

9、酯(15. 74%)和B-榄香烯(3.88%)等；从炒乳香中共鉴定出13个化学成分，主要为乙酸辛酯(37.80%)、乙酸葵酯(25.31%)和西柏烯(7.39%)等；从醋乳香中共鉴定出13个化学成分，主要为乙酸辛酯(53. 86%),乙酸葵酯(19. 17%)和西柏烯(8. 86%)o结果见表2。2. 4含量测定2. 4. 1色谱条件色谱柱为PEG-20M毛细管柱(30m0. 32,1. 0 iim)；检测器为氢火焰离子检测器，检测器温度为22(rc；载气为高纯氮气(99.999%),载气流量为L OmL/min；升温程序为初始温度8(C,保持2min,以l(Cnin升温至20(C并保持15m

10、in；进样口温度为20(TC；分流进样，分流比为10 ： 1;进样量为1.0Lo2.4.2混合对照品溶液的制备分别精密称取柠檬烯、乙酸辛酯、芳棒醇、正辛醇对照品适量，加无水乙醇定容至10mL,摇匀，制成柠檬烯、乙酸辛酯、芳棒醇、正辛醇质量浓度分别为 0.0664、1.7920、0.0370、0. 3280mgmL 的混合对照品溶液。2. 4.3供试品溶液和空白对照溶液的制备取“2.2”项下挥发油20mg,加无水乙醇定容至5mL,摇匀，经0.45 m微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。以无水乙醇作为空白对照溶液。2. 4.4系统适用性试验取“2.42”项下混合对照品溶液、“2.4.3”项下供试品溶液和

11、空白对照溶液各适量，按“2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，详见图2。由图2可知，各色谱峰的分离度良好，空白对照溶液对测定无干扰。2. 4.5线性关系考察精密量取“2.42”项下混合对照品溶液0.5、1.0. 2.0. 2.5、5mL,分别置于5mL量瓶中,加无水乙醇定容，摇匀，按“241”项下色谱条件进样测定,记录峰面积。以各待测成分质量浓度()为横坐标、峰面积(y)为纵坐标进行线性回归，结果见表3。2. 4.6精密度试验精密吸取“242”项下混合对照品溶液5mL,加无水乙醇定容至10mL,摇匀，按项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果显示，柠檬烯、乙酸辛酯、芳樟醇、正辛醇

12、峰面积的RSD分别为O 37%.0. 21%、0. 19%. 0. 48% (n=6),表明仪器精密度良好。2. 4.7稳定性试验取“2.4.3”项下供试品溶液(编号S3),分别于室温下放置0、2、4、8、12、24h时按“2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果显示，柠檬烯、乙酸辛酯、芳樟醇、正辛醇峰面积的RSD分别为0. 15%,0. 36%.0. 16%. 0. 29% (n=6),表明供试品溶液于室温下放置24h内稳定性良好。2.4.8重复性试验精密称取乳香挥发油(编号S3)适量，共6份，按“2.4.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.4.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积

13、并按外标法计算样品含量。结果显示，柠檬烯、乙酸辛酯、芳樟醇、正辛醇含量的RSD 分别为 0.20%、0. 39%. 0. 42%. 0. 17% (n=6),表明方法重复性良好。2.4. 9加样回收率试验精密称取已知含量的乳香挥发油(编号S3),每份约10mg,共6份，分别加入与已知量相等的混合对照品溶液(按“2.4.2”项下方法制备柠檬烯等4个成分质量浓度分别为 0.0254、2.8857、0.0325、0. 0436mgmL的混合对照品溶液)，按“2.4.3”项下方法制备供试品溶液,再按“2. 4.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表4。2.4.10样品含量测定分

14、别取乳香、炒乳香、醋乳香挥发油,按“2.4.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.4.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积并按外标法计算样品含量,每样品测定6次。利用GraphpadPrism9. 0软件进行t检验，检验水准=0. 05o结果显示，乳香及其炮制品中均以乙酸辛酯的含量最高，柠檬烯的含量相对较低。t检验结果显示，与乳香比较，炒乳香和醋乳香中乙酸辛酯、芳樟醇、正辛醇、柠檬烯的平均含量均显著升高（P醋乳香乳香，乙酸辛酯的平均含量由高到低依次为醋乳香炒乳香乳香，表明乳香炮制前后化学成分含量发生了改变。结果见表5。3讨论本研究采用GC-MS法从乳香及炒乳香、醋乳香挥发性成分中均鉴定出13个

15、成分，主要为醇类、烯泾和酯类等成分,均以乙酸辛酯的相对含量较高，分别为23. 86%. 37.80%和53. 86%,该结果与相关研究结果基本一致10。乳香经炒制后,其Y-菇品烯、柠檬烯、正辛醇、芳樟醇、a-祐品醇、乙酸辛酯、乙酸葵酯、B-榄香烯和西柏烯的相对含量均有所增加，罗勒烯、乙酸橙花酯和癸醇的相对含量则有所减少，视黄醛相对含量的变化不明显；乳香经醋制后，其丫-带品烯、柠檬烯、正辛醇、芳樟醇、a-祐品醇、乙酸辛酯、乙酸葵酯、榄香烯和西柏烯的相对含量均有所增加,B-罗勒烯、一癸醇和视黄醛的相对含量则有所减少，乙酸橙花酯相对含量的变化不明显。这表明乳香炮制后所得挥发性成分相似，但相对含量存在差异，其原因可能与成分挥发性、炮制温度、辅料等因素使挥发油中某些成分发生了转化有关，但具体的转化机制还需进一步探讨。根据GC-MS分析结果及查阅文献12-15后，最终选择柠檬烯、芳樟醇、正辛醇、乙酸辛酯作为定量