病毒学检验重点.docx

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1、病毒的特点是：1、形体微小，能通过细菌滤器，用电子显微镜才能观察到。2、无细胞结构，其主要成分是核酸和蛋白质3、每种病毒只含有一种类型的核酸（RNA或DNA）4、因缺乏完整的酶系统和能源，故只能寄生于活细胞内，依靠宿主细胞的代谢系统合成蛋白质和核酸5、病毒以其基因为模板，在宿主细胞内复制出新的病毒颗粒6、为了在生物界保存其种属，病毒具备从一个宿主转移到另一个宿主的能力，并具有对敏感宿主的侵染性和复制性7、在宿主体外，能以大分子状态存在，并可长期保持其侵染能力8、有些病毒的核酸能整合到宿主细胞的基因组中，并能诱发潜伏感染细胞培养技术：是对由组织分散成的单个细胞或某一型细胞群进行的体外培养方法，即

2、模拟体内的生理环境条件，提供细胞适宜的营养条件和温度，在无菌操作的基础上，使离体组织细胞生长增殖并进行传代的技术二、单层细胞培养：用于培养病毒的细胞有原代细胞、传代细胞（二倍体细胞株和传代细胞系）三、鸡胚的接种途径：1、羊膜腔接种2、绒毛尿囊膜接种3、尿囊腔接种4、卵黄囊接种四、间接计数在病毒检验过程中较为常用，是判定病毒感染性的定量方法，常用的有：空斑形成单位法，50%终点法，血凝试验和干扰测定空斑形成单位（PFUs）试验：是将不同稀释倍数的动物病毒与平铺于平板表面的宿主细胞混合，当病毒颗粒在一大片宿主细胞上引发感染时，会造成细胞被溶解而形成空斑，每个空斑系由一个病毒颗粒所造成，计算空斑数目

3、再乘以稀释倍数，即可得知原来的病毒感染单位的浓度凡事能在细胞培养物中产生CPE的病毒都可用空斑技术来测定其滴度。50%终点法：是将病毒悬浮液经一系列稀释后，接种至动物、鸡胚或培养成单层的细胞，将每个稀释度造成的动物、鸡胚致死量或细胞病变做曲线，找出造成50%动物、鸡胚死亡或病变的终点稀释度。1D50：为造成50%动物或鸡胚死亡的病毒含量ID50：即是指可造成50%动物或鸡胚感染的剂量CCID50：造成50%细胞培养产生病变效应的剂量五、病毒纯化的一般原则：1、释放病毒至细胞外2、去除细胞碎块3、病毒悬液浓缩六、病毒的保存：1、用低温（-6025）、超低温（-70以下）冰箱或液氮罐（-19615

4、0）保存2、冷冻干燥保存七、血清学实验的方法很多，最常用的是中和试验、补体结合试验、红细胞凝集及红细胞凝集抑制试验中和试验：是在体外适当条件下孵育病毒与特异性抗体的混合物，使病毒与抗体相互反应,再将混合物接种到敏感的宿主体内，然后测定残存的病毒感染力的一种方法。中和抗体：凡是能与病毒结合，并使其失去感染力的抗体称为中和抗体中和试验必须在敏感的动物体内（包括鸡胚）和细胞培养中进行中和试验所用的病毒应是具有感染力的病毒。用于中和试验的病毒必须先进行病毒滴度的测定中和试验中，通常以IOOTCID50/单位体积或1001D50/单位体积作为标准的病毒试验浓度八、血凝试验（HA）：有些病毒和病毒表面的血

5、凝素能引起人或某些哺乳动物的红细胞发生凝集,这就是所谓的红细胞凝集现象血凝抑制试验（HAD：血清中血凝素抗体能够与病毒血凝素分子的抗原位点特异性结合，干扰病毒血凝素与红细胞上受体的结合过程，从而抑制红细胞凝集。HA和HA1应用：1、发现和鉴定病毒2、用于临床病原学诊断3、病毒型或亚型鉴定4、免疫机体后抗体效价的测定5、病毒抗原变异分析等九、病毒的分离和鉴定：是指从病人、带菌者、外环境中采集标本经过适当的处理，采用一系列物理化学生物学等手段,将病毒从标本中分离出来,并通过有关特异性方法鉴定属何种病毒,这一类方法称为病毒的分离与鉴定。十、标本的采集：1、从病原体入侵部位取材2、从病原体感染的靶器官

6、取材3、根据病原体的排泄途径取材4、从环境中采集标本时，则应根据目的，参考病原体可能存在的环境，传播途径采集标本十一、病毒的分离方法：细胞培养法、鸡胚接种法、动物接种法十二、病毒的鉴定：初步鉴定：1、根据临床表现、流行病学特征与标本来源2、生物学特性:细胞病变效应、血吸附和血凝作用、干扰现象、理化特性、接种动物的观察最终鉴定：1、血清学与免疫学方法：中和试验、血凝抑制试验、免疫荧光试验、酶免疫学试验2、病毒基因的鉴定：PCR技术，核酸分子杂交技术、核酸序列分析3、电子显微镜技术：超薄切片电子显微镜技术、负染电子显微镜技术、免疫负染电子显微镜技术、免疫超薄切片电子显微镜技术十三、病毒感染的早期诊

7、断技术1、对潜伏期较短的病毒，由于机体未能对感染的病毒产生相应地抗体，因此应选择检测病毒颗粒或病毒抗原及病毒核酸。对于潜伏期10天以上的病毒感染，可检测特异性IgM抗体作为早期感染的指标。2、IgM抗体是原发感染的证据，也是早期感染的证据IgM检测：E1ISA法、免疫荧光法3、病毒特异成分的检测（1）核酸成分的检测：核酸杂交、PCR（2）奸恶感染材料中病毒抗原成分：免疫荧光技术、酶免疫技术、E1ISA、免疫胶体金技术（3）感染细胞中特征性包涵体的检测：核内包涵体、胞浆内包涵体、胞质内和胞核内包涵体4、电镜或免疫电镜技术：负染标本电镜技术、免疫电镜技术十四、痘病毒痘病毒：是病毒界体积最大结构最复

8、杂的DNA病毒1、引起的疾病：天花、猴痘、牛痘、传染性软疣2、天花的传播途径为空气飞沫传播，也可通过人-人接触或传播媒介进行传播3、猴痘的主要传播途径是感染的动物咬伤人类或人类接触了感染动物的体液、分泌物和血液而感染、人与人之间密切接触或吸入含病毒的飞沫和接触污染物业能干热该病4、病毒的分离培养：鸡胚绒毛尿囊膜法、细胞培养法、实验动物法十五、1、疱疹病毒是一类中等大小、结构相似、有包膜的DNA病毒。2、引起人类感染的疱疹病毒现有8个成员：HSV1HSV2VZV、HCMV、HHV6HHV-7、EBV、HHV-83、疱疹病毒感染特点可表现为：（1）显性感染，病毒增殖并破坏细胞，临床表现为急性感染或

9、隐性感染；（2）病毒经原发感染后长期潜伏于体内，当机体抵抗力下降时常引起复发感染；（3）病毒基因常与细胞基因组整合，导致细胞转化，甚至癌变；（4）可发生宫内感染导致胎儿畸形。4、致病：HSV：疱疹性角膜炎、结膜炎、疱疹性脑炎（HSV-1）、生殖性疱疹（HSV-2）途径：密切接触、空气飞沫、性交、接吻VZV：原发感染形式是水痘、复发感染时带状疱疹途径：直接接触、空气中飞沫气溶胶HCMV：巨细胞包涵体病、先天性畸形、先天性感染途径：垂直传播、水平传播、医源性感染EBV：传染性单核细胞增多症、儿童淋巴瘤、鼻咽癌途径：主要经唾液（如接吻）传播、偶尔也经过输血传播、飞沫不是主要途径5、哪些疱疹病毒有潜在

10、致癌作用？对人或动物有较强的致癌作用的疱疹病毒有：HSV-2,与宫颈癌发生有关；CMV可能与宫颈癌、前列腺癌、结肠癌和KaPOSi肉瘤等发生有关。EBV与鼻咽癌、BUrkitt淋巴瘤的发生有密切关系。2、HSV有两种血清型，分别是HSV-I、和HSV-2；前者常引起唇疱疹，后者常引起生殖器疱疹。3 .HSV-1发生的原发感染主要引起龈口炎，HSV-2发生的原发感染主要引起生殖器疱疹。4 .CMV可通过输血感染，发生输血后单核细胞增多症和肝炎等病症05 .EBV主要侵犯B细胞,也可感染上皮细胞。6 .VZV在儿童初次感染时引起水痘，在成年人常引起一带状疱疹07 .与EBV感染有关的疾病主要有三种

11、，分别是传染性单核细胞增多症、非洲儿童恶性淋巴瘤和鼻咽癌。8疱疹病毒感染宿主细胞可表现为增殖性感染和潜伏性感染。十六、乳头瘤病毒及检验1、DNA病毒、无包膜2、人乳头瘤病毒（HPV）只能感染人的皮肤和黏膜上皮细胞，引起皮肤黏膜异常增生，使宿主组织发生疣状或乳头状瘤病变。通过性接触可导致生殖器肛门部位的感染，是尖锐湿疣或肛门生殖器疣的病原体。3、HPV有严格的宿主和组织特异性、不产生病毒血症、不能再体外细胞中培养4、传播途径：主要通过性交感染，少数可经病人污染的内裤、浴盆、浴巾和便盆而间接传播，新生儿可经受染产道感染。HPV通过表皮的微笑损伤进入组织，感染皮肤、粘膜的基底层细胞5、尖锐湿疣与阴茎

12、癌、肛门癌、女性外阴癌及子宫颈癌有密切关系十七、嗜肝DNA病毒及其检验1、嗜肝DNA病毒科分为正嗜肝DNA病毒属和禽嗜肝病毒属2、乙肝患者血清中可见到的HBV的三种不同形态的颗粒：大球形颗粒、小球形颗粒、管型颗粒大秋形颗粒：存在于HBV感染者血液中的结构完整、有感染性的HBV颗粒，直径42nm。由Dane首先发现，故又称Dane颗粒。小球形颗粒：是HBV感染肝细胞后复制时产生的过剩病毒外衣壳装配而成，大量存在于血液循环中，直径为22nm。有抗原性、无感染性，是由多余的HBSAg聚集而成。传播途径：1、血液及血制品2、母婴传播3、密切接触（性接触和日常生活接触）3、实验室诊断方法HBV感染主要依

13、据HBV生物学标志物做出判断，主要包括两个方面：病毒的抗原抗体及病毒的核酸_4、检测HBV的血清学标志物主要有：HBsAg抗-HBs、HBCAg、抗-HBC1gM、抗-HBC1gG、HBeAg、及抗-HBe各项意义：HBSAg阳性：a、乙型肝炎的潜伏期、急性期b、慢性乙型肝炎c、无症状HBV携带者d、无症状HBsAg携带者e、与HBV感染有关的肝硬化和原发性肝细胞癌等抗-HBS阳性：1、乙型肝炎恢复期2、隐性感染的健康人3、注射乙肝疫苗或乙肝高效价免疫碱蛋白（HBIG）后，产生的主动或被动免疫HBCAg意义：HBCAg的检出是HBV感染的标志抗-HBC阳性：乙肝恢复期，慢性感染和既往感染HBe

14、Ag阳性：1、急性乙肝辅助诊断2、体内HBV复制，传染性强的标志3、是判断预后的指标4、虽然一些HBV感染者HBeAg阳性，但病情反复迁延，预后不良抗-HBe一般存在于无症状HBV携带者及活动期慢性肝炎患者中HBeAg、抗-HBe均阴性：可见于1、病毒已清除，但无抗-HBe应答2、病毒复制一时减少，HBeAg消失后可重现3、HBV前C变异不能合成HBeAg十八、逆转录病毒1、是RNA病毒的一个大科2、逆转录病毒分为三个亚科：RNA致瘤病毒亚科、慢病毒亚科、泡沫病毒亚科3、H1V-I,HIV-2属于慢性病毒亚科，是引起A1DS的病原体4、H1V感染CD4+T淋巴细胞，引起细胞病变，随后细胞死亡5

15、、AIDS的传染源主要是AIDS患者和HIV病毒携带者。HIV的传播途径主要有：性接触传播血液和血制品途径传播垂直传播6、诊断H1V感染的实验室方法：检测抗体：用E11SA、IFA或RIA检测患者体内的H1V抗体以初筛；对初筛阳性者需作WB法（免疫印迹法）以确证。检测病毒及其组分：病毒分离鉴定。E11SA法检测病毒抗原p24；还可以用RT-PCR等方法检测HIV的RNA07、临床晚期：1、严重的细胞免疫缺陷2、发生各种致死性机会感染3、发生各种恶性肿瘤免疫标志：HIV抗原或抗体病毒标志：分离H1V的基因相关标志：CD4T细胞8、抗体确证阳性：CD4200u1,CD4CD819、治疗原则：抗感染、抗肿瘤、杀灭或抑制H1V病毒，增强机体免疫力功能十九：呼肠弧病毒：轮状病毒(HRV),RNA病毒1、轮状病毒是引起婴幼儿急性腹泻的重要病原体，粪口途径传播2、轮状病毒表面有3种抗原：组抗原、中和抗原、凝素抗原轮状病毒与肠道病毒的区别：分类：轮状病毒属呼肠病毒科，肠道病毒属小RNA病毒科；核酸：轮状病毒为双链RNA,分节段，无感染性；肠道病毒为单正链RNA,轮状病毒有双层衣壳；肠道病毒为单层衣壳；致病性：轮状病毒A组主要引起婴幼儿腹泻，B组引起成人腹泻；肠道病毒通过病毒血症侵犯多种器官组织，引起多种临床