RTCA技术与乳酸脱氢酶释放法对比.docx

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1、RTCA技术与乳酸脱氢酶释放法对比RTCA技术简介，原理：实时无标记动态细胞分析技术（RTCA,Rea1TimeCeIhJIarAnaIySiS）是通过特殊工艺，将微电子细胞传感器芯片整合到细胞检测板的底部，用以构建实时、动态、定量跟踪细胞形态和增殖分化等改变的细胞阻抗检测传感系统。当贴壁生长在微电极表面的细胞引起贴壁电极界面阻抗的改变时，这种改变与细胞的实时功能状态改变呈相关性，通过实时动态的电极阻抗检测可以获得细胞生理功能相关的生物信息，包括细胞生长、伸展、形态变化、死亡和贴壁等。RTCA技术检测抗体依赖细胞介导的细胞杀伤作用（ADCC）实验步骤：1向E-P1ate检测板中加入培养基并测定

2、背景阻抗值。2、收集对数期的靶细胞并计数，调整细胞悬液浓度，向E-PIate检测板中加入一定体积的细胞，室温超净台内放置30min3、将加入细胞的E-PIate检测板放入检测台上（检测台预先放入培养箱中），进行实时动态的细胞增殖检测。4、过夜检测后，向各培养孔中加入NK细胞及配制好的梯度抗体并继续进行检测，即可获得实时的细胞效应曲线。应用RTCA技术对抗体依赖细胞介导的细胞杀伤（ADCe）作用检测示意图:加入肥细胞加入效应细胞杀伤杷细胞特点：1、实验操作简单，步骤少，人为误差小。2、采用无标记方法，对细胞无损伤，细胞在最接近生理状态下进行检测，结果准确度高。3、实验结果客观，重复性好。4、完整

3、细胞效应图谱，提供大量、重要的动态反应信息。5、实验数据的自动获取。6、可实现时间量效检测。典型的利用RTCA技术获得的抗体依赖细胞介导的细胞杀伤（ADCC）实验检测结果:0.30XPU二不。PZ-POEJeNWSB8DU145OnMConDU145*NKDU145NK0.1ug/m1ABDU145*NK*078gfm1ABDU145*NK+6.25ug/m1ABDU145*NK*25m1ABDU14S*NK*100giAB0.011.022.033.044.055.066.077.088.0Time(inhour)实时动态检测IGF-IR抗体介导卜NK-92细胞对DU-145细胞的杀伤作用(

4、ADCC)-(JPaZ=BEONNK92:A54916:18:14:12:11:10.5:10.25:1MediaOn1y实时监测不同效靶比NK-92细胞对A549细胞的细胞毒性作用乳酸脱氢酶释放法简介：原理：乳酸脱氧酶（1DH）存在于细胞内，正常情况下，不能透过细胞膜。当细胞受到损伤时，1DH可从细胞内释放至培养液中。释放出来的1DH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中,使氧化型辅酶I（NAD+）变成还原型辅酶（NADH）,后者再通过递氢体-吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）还原碘硝基氯化氮噗蓝（INT）或硝基氯化四氮嚏蓝（NBT）形成有色的甲基化合物，在57Onm波长处有一个吸收峰，利用读取的光吸收值，可

5、测得杀伤细胞毒活性。乳酸脱氢酶释放法基本实验步骤：1、收集对数生长期的靶细胞并计数，按一定浓度接种到细胞培养板中。细胞于培养箱中培养。2、收集效应细胞并计数，根据实验设计，按照一定的效靶比加入效应细胞并于培养箱中培养2小时。3、2小时后，100OrPm离心5分钟,取IOOU1上清液移入新孔内,37孵育10分钟。4、每孔加入IOOU11DH底物，室温避光15分钟。5、加入Imo1/1柠檬酸，30u1孔。6、醉标仪测定OD570nm的吸光度值。乳酸脱氢酶释放法实验结果：RTCA技术与乳酸脱氢酶释放法优势对比RTCA技术乳酸脱氨酸释放法标记物无，对细胞无伤害有，对细胞有伤害实验数据连续的实时动态曲线终点检测（单点数据）实验步骤简单繁琐实验重复性高低实验数据获取自动手动细胞活性信息粘附、活力、形态活力时间量效检测一次，同时获取多次实验数据准确性高低实验耗时短长检测过程培养箱内进行（正常生长环境）培养箱外（非细胞生长环境）实验结果实例