人白细胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA试剂盒操作步骤.docx

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1、间接法（检测未双抗体夹心法（检测未知抗原）一、服务我们可以根据您的应用需要，比如在检测范围、种属以及灵敏度等方面有特殊要求，而量身定制检测试剂盒，有效控制检测试剂成本。并可提供免费代测。二、E1ISA检测概述E1ISA（酶联接免疫吸附反应分析）是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的实验技术。由于抗原、抗体的反应在一种固相载体-聚苯乙烯微量滴定板的孔中进行，每加入一种试剂孵育后，可通过洗涤除去多余的游离反应物，从而保证试验结果的特异性与稳定性。实际应用中，通过不同的设计，具体的方法步骤可有多种。即：用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双

2、抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。目前我们对客户提供比较常用的E1ISA双抗体夹心法及E1ISA间接法服务。三、技术流程1、用缓冲液将抗体稀释至IToUg/m1。在反应孔中加0.1m1,4过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。2、加样：加一定稀释的待检样品0.05InI于上述已包被之反应孔中，置37孵育1小时。然后洗涤（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。3、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）005m1。37孵育0.51小时，洗涤。4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液O.1m1,371030分钟。5、终

3、止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05m16、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、号表示。也可测OD值：在E1ISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则41Onm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至4过夜。次日洗涤3次。2、加样：加一定稀释的待检样品（沫之反应孔中,置37孵育1小时,洗沦孔对照）3、加酶标抗体：于反应孔中，加入胄体）0.05In137孵育30-60分钟，4、加底物液显色：于各反应孔中加,0.1m

4、1,371030分钟。5、终止反应：于各反应孔中加入2M6、结果判定：可于白色背景上，直?颜色越深，阳性程度越强，阴性反应的深浅，以“+”、-”号表示。上，于450nm（若以ABTS显色，则41测各孔OD值，若大于规定的阴性对I四、客户须知1、液体类标本（细胞培养上清、组织匀浆、血清、血浆、尿液、胸水、腹水、脑脊液等）；2、样本保存：请尽早检测，2-8C保存一天；需更长时间须冷冻（-20或-70）保存。如需周期收集样本，请将样本及时分装标号后，置-20或-70保存；3、请提前告诉我们：您样本的种属、样本数量、待测指标及其他特殊要求。五、报告内容及标准1、E1ISA标准曲线;2、详细的实验步骤；3、完整的实验报告（试剂耗材，实验方法，实验结果及结果说明）；4、实验进行阶段，我公司客服人员会及时向您汇报实验进程。