第30课时 发酵工程公开课.docx

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1、第十单元生物技术与工程第30课时发酵工程学业质量水平：1 .认同果酒、果醋、泡菜等产品的制作离不开微生物的发酵，通过以上事实培养结构与功能观；通过微生物的分离和培养的学习，形成物质与能量观。（生命观念）2 .运用归纳与概括、批判性思维等方法比较果酒、果醋、泡菜的制作原理、方法；运用归纳与概括、批判性思维等方法学习微生物的分离和培养。（科学思维）3 .针对某种发酵工程选取恰当的技术和方法，尝试提出初步的工程学构想，进行简单的设计和制作；分离土壤中分解尿素的细菌，并进行计数。（科学探究）4 .关注食品安全，提高自身保健意识，倡导和践行健康的生活方式。（社会责任）课标要点一微生物的基本培养技术（见学

2、生用书P239）主I干I梳I理1培养基定义人们为满足微生物生长繁殖或积累代谢产物的需求而配制的混合养料成分水、_无机盐、氮源和一碳源.，某些需要一生长因子.（特定的维生素、_氨基酸_、嚓吟和喀咤等有机化合物）理化特性（1）成分上：“细菌喜荤，霉菌一喜素一”（2）pH:细菌通常要求在一中性偏碱.的环境中生长，霉菌要求在一中性偏酸一的环境中生长分类（I）按物理特征分：液体培养基和固体培养基（在液体培养基中添加一定量的凝固剂制成的）（2）按培养基成分分：合成培养基（化学成分完全清楚）和天然培养基（由还不十分清楚或成分不恒定的天然有机物制成）（3）按功能分：Ufi_培养基和鉴别培养基培养基案例细菌培养

3、基：常用蛋白陈和_酵母提取物.等来配制霉菌培养基：一般用可溶性淀粉加无机物配制或用添加_蔗糖一的豆芽汁来配制配制可用于培养酵母菌的马铃薯蔗（1）计算：根据配方计算出配制培养基所需的马铃薯、蔗糖和一琼膈一的用量I（2）配制20%马铃薯浸汁糖培养基I(3)制备_斜面、固体和液体培养基I(4)制作棉塞2.灭菌和无菌操作技术(1)目的：获得.纯祥一的微生物培养物。(2)关键:防止一杂菌.污染。消毒定义:采用_较温和_的物理、化学方法杀死物体表面或内部一部分不需要的微生物原理：加热使蛋白质工紫外线使菌体的蛋白质和变性。列举物理方法：煮沸消毒、.紫外线一照射等。列举化学方法：75%酒精、高镒酸钾、5%次氯

4、酸钠、漂白粉等。(4)灭菌定义：采用强烈的物理、化学方法杀灭物体表面以及内部的一切微生物的方法，包括有些菌产生的结构。高压蒸汽灭菌法、过滤除菌、灼烧灭菌的比较高压蒸汽灭菌设备_高压灭菌锅.灭菌条件121,1kgc)2的压力,1520分钟灭菌对象除了高温下会分解的物质,大部分都适用。灭菌前，各种物品需用牛皮纸或报纸包好，棉塞不能用脱脂棉，原因是脱脂棉易吸水，吸水后易污染_。灭菌后，灭菌物品放入中烘干，除去水分过滤除菌设备常用G6玻璃砂漏斗，其孔径小到一细菌不能通过，若孔径更小可阻止病毒或蛋白质通过除菌对象遇高温会分解的物质或含有酶等物质的溶液。此外，果酒、果醋、果汁生产中有大量的微生物，也可通过

5、此法进行过滤灼烧灭菌设备J酉精灯除菌对象接种环等，接种环的环部、金属丝、金属丝与柄的连接部、连接部的上端在明火上灼烧，使黏附在其表面的微生物在高温中炭化(5)防止杂菌污染的操作。操作在一酒精灯.火焰旁进行。棉塞拔出后不能放在超净台消毒过后的台面上。打开培养In1的皿盖的正确操作是_打开一条缝一.操作中超净台需直打开过滤风(风吹向操作者)接种前后接种环都需要*墟_灭菌。5 .微生物的分离与纯化(1)接种：微生物进入培养基质的过程，包括自然接种和人为接种一(2) 一单菌落一：固体培养基上通过接种、培养获得的由一个细胞分裂形成的、肉眼可见的、有一定形态构造的子细胞集团。(3)平板划线法与稀释涂布平板

6、法的比较不同点方法平板划线法稀释涂布平板法操作工具接种环.涂布器.操作步骤通常用一接种环.蘸取液体培养物或挑取固体表面的微生物后，在固体培养基表面进行连续平行划线、一扇形划线一或其他形式的划线。若划线4次，则接种环需要灼烧二_次，后一次划线，必须从前一次划线的一末端一开始通常需要先将菌液进行一梯度稀释并在培养皿侧面或底面做好标记后，将稀释度不同的菌液各取0m1,加在固体培养基表面，然后用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基平面上进行培养稀释方法不断一灼烧一接种环或连续划线用一无菌水.处理操作难度简单复杂操作效果好更好操作作用最重要：菌种纯化；次要：一筛选微生物_最重要：筛选微生物、计数；次要：菌种纯

7、化相同点都能获得单菌落4 .接种、培养并分离酵母菌(1)目的要求用平板划线法或稀释涂布平板法接种酵母菌。用液体.培养基大量扩增酵母菌。(2)方法步骤制作平板：对两个直径为90mm的培养皿进行.标记,分别向其中倒入未凝固的固体培养基，使培养基铺满培养皿底部，厚度约2mm。接种方法操作提示平板划线法a.在用接种环蘸取菌液进行接种前，应在酒精灯火焰上从接种环的圆环处依次向上一灼烧一灭菌b.为避免灭菌后接种环的高温烫死菌种，应在挑取菌种前一将接种环贴在培养容器内壁上降温C.初次划线时可参照培养皿底部的标记点进行划线，以保证有最好的划线分离效果稀释涂布平板法a用一无菌水对酵母菌菌液进行一定浓度的稀释b.

8、取0.1m1的稀释菌液加入平板中央C.在使用蘸有酒精的涂布器对平板中的菌液进行涂布时，应先在火焰上使酒精燃烧尽。此时手持涂布器的部位应_i_火焰上的部位，以免酒精沿器具流下，烧伤手指将菌种接种到液体培养基中，在无菌条件下用接种环将菌液接种到液体培养基中，同时以不接种菌液的液体培养基作为对照培养。将所有培养容器置于25C下培养24h。观察培养结果。获得单菌落后,可继续挑取菌落，利用划线法接种至斜面培养基中。5 .统计菌落数目的方法(1)稀释涂布平板法原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。计

9、数要求：在同一稀释度下涂布3个(或3个以上)平板。(2)显微镜直接计数法原理:利用特定血细胞计数板，在显微镜下计算一定体积的样品中微生物的数量。方法：用计数板计数。显微镜下观察a.大方格：9个。长、宽各Immo液体体积=ImmXO.1mm=0.1mm3o计数区正中间的大方格为q1计数区。四角的四个大方格是_01_计数区。b.中方格：红细胞计数区又用双线分成25(或16)个中方格。c.小方格：每个中方格再用单线划分为16(或25)个小方格。计数时的几个注意点滴加菌液要避免菌液滴到盖玻片上并防止产生气泡，以免影响计数结果；对有25个中方格的红细胞计数区可采用“五点取样1对酵母细胞进行计数:在计数每

10、一小方格中的细胞数时，为了避免重复计数压在小方格边缘线上细胞的数目，应“数上不数下”“数左不数右”.：为了保证结果的可信度，消除误差，应对同一红细胞计数区中的细胞数进行3次计数后取平均值，再按比例进行换算。6.能分解尿素的微生物的分离与计数(1)实验原理当培养基中只有尿素作为氮源时，只有能分泌一588_的微生物才能在该培养基中生长。微生物分解尿素产生的氨会使培养基的碱性增强,若在培养基中加入在酸性情况下呈黄色、碱性情况下呈的酚红指示剂，就可根据菌落周围培养基是否出现红色_区域，进一步鉴定尿素分解菌。在相同培养条件下，圆形红色区域愈大，表明这种菌利用尿素的能力(2)实验步骤到佛:（配制）100m

11、1iS住培荆脚100m1D素全体培养基上试管、三角瓶：】21七下灭5min;|：尿素溶液：G6玻璃抄滑斗过汰除菌倒平板W备士赛细IrM液用债子夹取酒精棉，将手及短号工作台*F净,待酒精z_1fc,挥乐再一种V用移液管按煦Iffi度也履序依次取0.1m1康I拜液,并在酒精灯火焰旁分别加入对应标记的培养皿中I涂布：将稀狎液均匀地涂布在培养若表面养：将培养量于37七恒温培养箱中培养24Y8h自我诊断判断正误（正确的打“J”，错误的打“X”）1 .为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落。（）2 .选择培养基可以鉴定某种微生物的种类。（X）3 .对细菌进行计数只能采用稀释涂布平板法，而不能用

12、平板划线法。（）4 .筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中，尿素是唯一的氮源。（）5 .除第一次划线外，每一次划线的起点都是第一次划线的末端。（）6 .倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上。（）新高考新教材浙江选考命题新思考（一）教材新命题点思考1 .无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么作用？还能有效避免操作煮自身.被微生物感.鎏?2 .为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面湿度也比较高，将平板倒置，既可以防止培养基表面的水分过快

13、地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。3 .在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？丕能.。因为空气史的微.生物回:能在皿盖和.皿底之间的培:养基上滋生?.国能会造成污染?.4 .利用稀释涂布平板法纯化分解尿素的细菌时,经培养后发现培养基上出现多种菌落，可能的原因有哪些？出现杂菌污.染的可能原因直工培养基制备过程史被杂菌污染乙.接种过程史无菌操作丕农合要求.；.系列稀释时.，.无菌操作.丕符合要求笠?（二）模型新命题点思考下表是某异养型细菌的培养基配方：KH2PO41.4gNa2HPO421gMgSO47H2O0.2gF

14、eCI30.1gX1g维生素微量(1)从物理性质上看该培养基属于哪种培养基？常用哪种方法对该培养基进行灭菌？固体培养基.施压蒸汽灭菌法?.(2)表中成分X除了为目的菌提供能源外，还能提供什么？碳源和.氮源?.(3)图中纯化该异养细菌所采用的接种方法是什么？为什么一定要在火焰附近进行？小板划线法.火焰附近也在无菌.区域a.命题探究1 命题探究-培养基2 .培养基的配制原则(1)目的要明确：配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。(2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。(3)PH要适宜：细菌为6.57.5,放线菌为7.58.5,真菌为5.06.0,培养不同微生物所需的PH不同。3 .培养基中营养物质的确定方法(1)自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的Co2,氮源可由含氮无机盐提供。(2)异养型微生物所需的营养物质主要是有机物(即碳源)，必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。4 .选择培养基和鉴别培养基的比较种类制备方法原理用途举例选择培养基培养基中加入某些化学物质依据某些微生物对某些物质的特殊