运动神经元存活基因1SMN1检测试剂注册审查指导原则.docx

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1、附件运动神经元存活基因1 ( SMNl )检测试剂注册审查指导原则本指导原则旨在指导注册申请人对脊髓性肌萎缩症相关基 因运动神经元存活基因1 (SMNl)检测试剂注册申报资料的准 备及撰写，同时也为技术审评部门提供参考。本指导原则是对SMNl基因检测试剂的一般要求，申请人 应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用。若不适用，需 具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注 册申报资料的内容进行充实和细化。本指导原则是供注册申请人和技术审评人员使用的指导性 文件，但不包括审评审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强 制执行，应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。如果有 能够满足相关法规要

2、求的其他方法，也可以采用，但是需要提 供详细的研究和验证资料。本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下 制定，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展， 相关内容也将适时进行调整。一、适用范围本指导原则适用于脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy, SMA)致病基因运动神经元存活基因1 (SMND第7或 第7、第8外显子拷贝数变异检测相关试剂的注册。预期用途限 定为用于SMA的辅助诊断(遗传诊断)或携带者检测。本指导 原则是基于qPCR建立，对于其他检测技术(如MLPA.数字PCR,熔解曲线法、测序法及质谱法等），可能部分要求不完全 适用或本指导原则所

3、述技术指标不够全面，申请人可以根据产 品特性对不适用部分补充其他的评价和验证，但需阐述不适用 的理由，并验证替代方法的科学合理性。SMA及相关基因的背景信息请见附件。二、注册审查要点（一）监管信息1 .产品名称及分类编码产品名称应符合体外诊断试剂注册与备案管理办法及 相关法规的要求，如运动神经元存活基因 （SMNl）检测试剂 盒（PCR-荧光探针法）。按照体外诊断试剂分类规则，该 产品按照第三类体外诊断试剂管理，分类编码为6840。2 .申请人还需提交产品列表、关联文件、申报前与监管机 构的联系情况和沟通记录及符合性声明等文件。（二）综述资料综述资料主要包括概述、产品描述、预期用途、申报产品

4、上市历史及其他需说明的内容。其中，需注意以下内容：1 .产品描述中应详述检测原理、引物探针设计及其与检测 位点的对应关系，选择依据以及结果判断等。拷贝数分析建议 包括SMNl基因第7外显子或第7、8外显子，明确区分SMNi 和SMN2的原理。2 .与同类和/或前代产品的比较，应着重从方法学、检验原 理、检测的基因名称、检测靶点、变异类型以及临床意义等方面 详细说明申报产品与目前市场上已获批同类产品之间的主要区 别，并明确申报产品优势与患者受益情况。3 .预期用途需明确适用人群、样本类型、基因名称、检测 位点、变异类型及临床用途。需提交SMA的发病原因、临床症 状、流行病学特征、该疾病相关诊断及

5、有效治疗方法，明确现有 方法临床应用的优缺点。提交SMA基因型分布的背景资料，明 确基因名称、基因组位置、基因转录本号。对于拷贝数变异，需 明确检测靶点、选择依据及行业认可证据，详述变异信息、致病 作用机制、遗传模式、变异后果、变异检出率以及境内外人群数 据等，提交参考的数据库及支持性文献等。申请人需根据产品设 计及临床研究合理声称适用人群及预期用途。综述资料应符合体外诊断试剂注册与备案管理办法和 关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格 式的公告。（三）非临床资料1 .产品技术要求及检验报告1.1 产品技术要求申请人应当在原材料质量和生产工艺稳定的前提下，根据 产品研制、前期评价

6、等结果，依据国家标准、行业标准及有关 文献资料，结合产品特性按照医疗器械产品技术要求编写指 导原则（2022年第8号）的要求编写指导原则。该类产品作 为三类体外诊断试剂，应将主要原材料及生产工艺要求等内容 作为附录附于技术要求正文后。如有适用的国家标准、行业标准，产品技术要求的相关要求 应不低于相应的要求。1.2 产品检验报告根据体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格 式的公告的要求，申请人应当提供三个不同生产批次产品的 检验报告，有适用的国家标准品的，应当使用国家标准品对产 品进行检验。报告形式可为申请人出具的自检报告或委托有资 质的医疗器械检验机构出具的检验报告。申请人开展自检的，

7、应当符合医疗器械注册自检管理规定及相关法规的要求。2 .分析性能研究申请人应根据产品特性提交详细的分析性能评估资料，包 括试验地点、适用仪器、试剂规格、批号、试验方法、试验样本 （需明确类型、来源、数量、处理方法、SMNl与SMV2拷贝数 及其确定方法等）、可接受标准、统计方法、试验数据及结论等， 并需对SMNl和SMN2之间的相互影响进行充分评估。分析性 能评估的试验方法可以参考国内外有关体外诊断产品性能评估 的指导原则。如试剂用于不同适用机型，需要在不同机型上分别进行性 能评估。每项性能评估应尽量采用与适用样本类型一致的临床样本, 并应涵盖正常人、携带者（如适用）及患者的不同样本。2.1

8、样本稳定性样本稳定性一般包括样本各种实际运输及储存（常温、冷藏 和冷冻）条件下的保存期限验证，以确认样本的保存条件及保 存时间。可以在合理的温度范围内，每间隔一定的时间段即对 储存样本进行验证，从而确认不同类型样本的稳定性。可冷冻 保存的样本还应对冻融次数进行合理验证。如核酸提取液可保存，还需对核酸提取液的保存条件和保 存时间进行研究。2.2 适用的样本类型如果试剂适用于多种样本类型，应采用合理方法对每种样 本类型及添加剂（如抗凝剂）进行适用性的研究确认。对于不同 的样本类型应分别提交相应的分析性能评估资料。2.3 核酸提取/纯化性能在进行靶核酸检测前，应有适当的核酸提取/纯化步骤。该 步骤应

9、最大量分离和纯化目的核酸并尽可能去除PCR抑制物。 无论检测试剂是否含有核酸提取/纯化组分，申请人都应对配套 使用的核酸提取/纯化方法的提取效率和提取核酸纯度、浓度、 检测限、精密度等进行充分的验证，并评价该方法能否满足该 类产品的要求。不同样本类型应分别进行核酸提取/纯化性能的 研究验证，并明确提取核酸的质量评价标准。2.4 检测准确性建议采用若干份临床样本验证该类产品的检测准确性，样 本类型与说明书声称的样本类型一致，样本应涵盖所有可检测 的基因拷贝数，建议对低、中、高不同DNA浓度的样本进行研 究。提供所有试验用样本来源、型别及拷贝数确认等试验资料。2.5 精密度SMNl精密度评价应至少

10、包含O拷贝、1拷贝及2拷贝SMNl 基因的不同临床样本，试验操作完全按照说明书执行，包含核 酸提取/纯化等步骤。应对每一反应体系进行精密度评价。精密度评价需满足如下要求：2.5.1 对可能影响检测精密度的主要因素进行验证，除检测 试剂本身外，还包括分析仪器、操作者、地点、时间、检测轮次 和试剂批次等。252设定合理的精密度评价周期，对批内/批间、日内/日间 以及不同操作者之间的精密度进行综合评价。如有条件，申请 人应选择不同的实验室进行重复试验以对室间重复性进行评价。2.5.3 用于精密度评价的临床样本至少设置低浓度和中/高 浓度水平。254精密度指标可设置为CV等（如有），申请人应对精密 度

11、指标评价标准做出合理要求。2.6 检测限SMNl拷贝数检测的检测限包括最高和最低检测限。最低检测限可定义为在满足一定的检测准确性和精密度的 条件下，能够检出目标基因不同拷贝数的最低人基因组DNA浓 度。最低检测限的确立：可采用包含不同SMNJ拷贝数的临床 样本进行研究，对于罕见型别可采用人源性细胞系。对人基因 组DNA样本梯度稀释，对每个浓度水平重复检测35次，可 通过以100%可检出的最低浓度作为估计检测限，然后在此浓度 附近制备若干浓度梯度样本，每个浓度至少重复20次检测，将 具有95%检出率水平浓度作为最低检测限。最低检测限的验证：应对试剂盒涵盖的所有的检测位点进 行检出能力的验证，至少

12、包括含有0、1、2拷贝SMNl基因第 7外显子或第7、第8外显子的临床样本。同时，申请人亦应评价产品可准确检出SMNl不同拷贝数 的人基因组DNA浓度上限，即适当检出率水平下的最高人基因 组DNA浓度，建议采用含有高拷贝SMN2基因的不同SMNl基 因型样本进行最高检测限的建立和确认研究。样本要求同最低 检测限评价要求。应提供所有试验用样本来源、型别、样本浓度及SMNJ及 SMN2拷贝数确定的方法等试验资料。2.7 分析特异性：分析特异性受干扰和交叉反应的影响。申请人应对样本中 常见的干扰物质和可能引起交叉反应的物质进行研究。2.7.1 交叉反应：申请人应针对微生物（如适用）、核酸序列相近或具

13、有同源 性、以及其他易引起交叉反应的变异类型序列进行交叉反应研 究。申请人应说明交叉反应样本的来源、制备方法、基因拷贝数 确认方法，提交详细的验证资料。同时申请人还应验证检测靶 序列范围内常见突变位点的交叉干扰。申请人应对SMN2对SMN/交叉干扰进行研究。应对不同 SMNl： SMN2的拷贝数组合进行充分验证。如含有高拷贝SMN2 （45拷贝）的高浓度样本对SMN/的不同拷贝数产生的交叉 干扰反应（应包括第7外显子或第7、第8外显子）。申请人应提交交叉反应序列的选择依据，说明交叉反应样 本的来源/制备方法、核酸序列确认方法,提交详细的验证资料。272应针对可能的内源和外源性干扰物进行干扰试验

14、研究。 内源干扰物主要涉及血脂、胆红素、血红蛋白和白蛋白，外源干 扰物主要包括适用人群血液样本采集可能用到的抗凝剂、常用 药物及其他可能引入的干扰物质等。针对不同样本类型，建议 分别进行相应的干扰研究。干扰试验可通过在临床样本中人工添加干扰物质的方式， 评价干扰物质对目标序列检测的影响，也可直接采集暴露于干 扰因素后的受试者样本，进行干扰试验评价。建议申请人在每 种干扰物质的潜在最大浓度（“最差条件”）条件下进行评价；如 有干扰，应确定不产生干扰的最高浓度。2.8 对于采用 fa法的试剂，需提交目的基因和内参基因 扩增效率一致性研究资料。3 .稳定性研究资料申报试剂的稳定性主要包括实时稳定性（

15、有效期）、使用稳 定性（如开瓶稳定性、复溶稳定性（如适用）、机载稳定性（如 适用）等）、运输稳定性、冻融次数限制（如适用）研究等。申 请人可根据实际需要选择合理的稳定性研究方案。稳定性研究 资料应包括研究方法的确定依据、具体的实施方案、详细的研 究数据以及结论。实时稳定性研究应采用至少三批样品在实际储存条件下保 存至成品有效期后，选取多个时间点进行产品性能评价，从而 确定产品保存条件和有效期。4 .阳性判断值或参考区间研究资料建议申请人纳入一定数量的临床样本，结合产品特性可采 用受试者工作特征（ROC）曲线或其他合理方法对产品用于结 果判断的标准/临界值进行研究确认。样本应包括来自正常人、 携

16、带者及患者不同拷贝数的各种基因型（如至少应包含0、1、 2拷贝数SMNl基因的样本），申请人应详细阐述所采用方法的 选择依据（如权威文献、行业共识等），并详细阐述计算公式和 各参数代表的意义。应提交详细研究方案，试验数据和统计分析过程。明确所用 样本类型、样本来源、样本量估算的方法、样本例数、临床背景 信息、基因型及拷贝数确认过程及数据等信息。如试剂判读存在灰区，应解释说明灰区范围的确定方法。灰 区的设定应提交理论和实际试验结果的依据，并在说明书【阳 性判断值】和【检验结果的解释】项进行解释说明。5 .其他资料5.7 主要原材料研究资料主要原材料研究资料包括主要反应成分、对照品/质控品及 企业参考品的研究资料。5.7.1 此类产品的主要反应成分一般包括人基