HER2驱动胃癌的个性化治疗策略.docx

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1、发表：2021 年 3 23 HHER2驱动胃癌的个性化治疗策略 斯特凡诺Uahetto, 克里斯蒂娜米利来, Ul 西尔维娅乔尔达诺515访问1引用指标详情摘要背景曲妥珠单抗是唯一批准用于”日?2扩增转移性胃癌（GC）患者的靶向疗法。遗憾的是，在临床实践中，只有一小部 分人从基于曲妥珠单抗的前期策略中获得了长期利益。为了推进精准肿瘤学，我们研究了不同HER2靶向策略在 HER2 “超”扩增（28个拷贝）肿瘤中的治疗效果。方法我们通过临时临床前试验的设计，在选定的H日?2超扩增胃患者来源异种移植物（PDX）亚组中，对单克隆抗体、 酪织酸激而抑制剂和抗体-药物偶联物的HER2靶向进行了前瞻性评估

2、。结果尽管HER2扩增水平很高，但曲妥珠单抗仅在8个PDX模型中的2个中引起部分反应。曲妥珠单抗加帕妥珠 单抗或拉帕替尼的双重HER2阻断在8个模型中的5个（62.5%）中产生了完全和持久的反应，其中包括一个 伴随HE/?2突变的肿瘤。在具有KR45扩增的耐药PDX中，新型抗体药物偶联物曲妥珠单抗deruxtecan （但不 是曲妥珠单抗emtansine）克服了 QSS介导的耐药性。我们还确定了一种HGF介导的非细胞自主机制对抗 HER2药物的继发性耐药，对MET共祀向有反应。结论这些临床前随机试验清楚地表明，在HER2驱动的胃肿瘤中，需要加强HER2治疗阻断以获得最佳疗效，从而 在大多数情

3、况下产生完全和持久的反应。我们的结果表明，选定的HER2 “超扩增GC患者亚群可以从这一策略 中受益匪浅。尽管临床试验的结果为阴性，但对于明显对HER2成瘾的癌症患者，应重新考虑双重阻断。简介 曲妥珠单抗是唯一被批准用于转移性胃癌（mGQ患者的靶向治疗，H日?2是一种分子驱动因子，属于受体酪氨酸 激酶（RTK）的表皮生长因子受体（EGFR）家族。HER2通路的组成性激活，通常是由于基因扩增或突变，已在几 种实体瘤中观察到，在这些实体瘤中它驱动肿瘤生长、转移和血管生成IJo HER2在大约IO-15%的GC中 扩增2,3），通常与染色体不稳定性（QN）分子亚型有关，尽管在HER2中发现肿瘤内和病

4、灶间异质性升高 -放大的GC（4,5o ToGA试验的事后分析表明，在化疗中加入单克隆抗体（MoAb）曲妥珠单抗可显着改善局 部晚期或转移性胃癌或胃食管交界处癌患者的总生存期（OS）,但仅在更高水平的HER2表达（IHC 3+或IHC 2 +与基因扩增）。遗憾的是，只有一小部分HM2患者-扩增的mGC明显受益于曲妥珠单抗，令人怀疑该方案 在临床实践中对整体HER2阳性人群的实际成本效益。事实上，基于曲妥珠单抗的治疗长期疗效的限制可能是由 于高比例的原发性和获得性耐药机制涉及QK/K/SS联合扩增、PI3KAkt轴失调、H日?2丢失、包括dl6HER2在 内的HER2蛋白质组的异质性剪接变体和潜

5、在的，非细胞自主机制a7, 8 9】。除了曲妥珠单抗之外，目前还有几种HER2靶向药物被批准用于HER2阳性乳腺癌患者，包括MoAb帕妥珠 单抗联合曲妥珠单抗、小分子EGFR/HER2酪获酸激酶抑制剂拉帕替尼和抗体药物偶联物（ADC）曲妥珠单抗 emtansine （ T-DMl）和曲妥珠单抗derutecam （DS-8201a）然而，在MGC这些试剂进行的第3期试验均为 阴性1Q，11，12）o虽然在乳腺癌和胃癌中，曲妥珠单抗作为单药治疗也有效，但在其他癌症（如结直肠癌 中，只有曲妥珠单抗加其他抗HER2药物（包括帕妥珠单抗或拉帕替尼）的双重HER2阻断显示出显着的活性 13,14,151

6、.值得注意的是，”日?2扩增水平可能会极大地影响曲妥珠单抗的长期疗效，建议将HM2基因拷贝 数与染色体17若丝粒之比为4.7作为识别具有特殊反应的患者的最佳临界值K。基于上述假设，可以想象， 新型HER2靶向策略或双重抗HER2阻断剂的潜在作用应该在分子筛选的HER2超扩增/HER2成瘾癌症患者 中重新评估。目前，验证目标和确定有效治疗的最佳临床前模型以患者衍生异种移植（PDX）为代表，它结合了临床前评估的 多功能性和基于人群的研究的信息意义（12,ISJo利用专有的、分子注释的GC PDX集落*,我们在选定 的日?2超扩增异种患者亚组中，通过设计旨在改善HER2阳性GC的个性化治疗的临时临床

7、前试验。材料和方法患者肿瘤样本（来自胃和胃食管交界处癌）和匹配的正常样本是从15家意大利医院接受手术的患者中获得的（参见 增刊方法）。所有患者均提供书面知情同意书；收集样本并在所有机构审查委员会的批准下进行研究。该研究是 根据赫尔辛基宣言、国际协调和良好临床实践指南和GDPR （通用数据保护条例）的原则进行的。临床和病理数 据被输入并保存在我们的前瞻性数据库中。所有样本在运送到Candiolo癌症研究所（Candiolo,都灵，意大利） 之前都已匿名。原代细胞培养如（2Q中所述，GC原代细胞源自PDXo体外衍生材料与原始肿瘤的遗传同一性已通过短串联重复分析（CeIl ID. Promega）得

8、到验证。对于细胞活力测定，在指定药物存在的情况下，将细胞一式四份接种在96孔培养板 （3-5 X 10，细胞/孔）中。6 天后，使用 Cell TiterGIo Luminescent Cell Viability Assay （Promega）测量细胞活 力。蛋白质印迹分析用指定的药物处理细胞24小时，在活力测定中以对应于IC50的浓度使用(如图例所示)。使用LaemmIi缓 冲液制备全蛋白提取物，并使用BCA蛋白检测试剂盒(PierCe,Rockford, IL USA)进行定量。EBV评估使用 EBVQ-PCRAIertKIT (ELlTechGroupSpA. Puteaux, Fra

9、nce)进行 EBV DNA 的检测和定量。实时扩增分 析在ABI 7300实时PCR系统仪器(美国应用生物系统公司)上进行。PDX的分类如21中所述：EBV高 (EBV 负荷高， IOoO,等效 EBV 基因组/反应(gEq),EBV 中间(75-100OgEq)或 EBV 低/阴性(2代，直到产生一组小鼠。确定的和随机化的肿瘤(平均体积250 mm O用以下方案(单 一药剂或组合)治疗指定天数：载体(盐水)口服：曲妥珠单抗30 mgkg,每周ip：帕妥珠单抗20mgkg, 每周ip：拉帕替尼100 mgkg,每日一次，口服：TDMl 10 mgkg,每周静脉注射，DS-8201a 10 m

10、gkg,每 周静脉注射：克嗤替尼25 mgkg,每日一次，口服。通过卡尺测量每周评估一次肿瘤大小，并使用公式 43n(D2)(d2)z计算质量的近似体积，其中D是主要肿瘤轴，d是次耍肿瘤轴。对治疔的反应已使用类似RECIST 1.1的标准评估小鼠的反应，即疾病进展(PD)：从基线增加35%；部分缓解(PR)：从基 线降低 50%；疾病稳定(SD)：与基线的中间变化22o使用GraphPAD PRISM软件8.0,使用双向方差分 析和Bonferroni多重比较校正对药理实验进行统计测试。统计显着性：ns =不显着：* P 0.05； *p 0.01： *p 0.001； *p ulno JOEnl Jo UOAe=EZVGTR31G