20菌种管理制度.docx

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1、有限公司菌种管理规定XY1-Z1-20编制受控状态受控审核版本/状态A/0批准生效日期2023年02月28日序号修改内容修改人批准人修订口期1 .目的：规范检定用菌的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保检验结果的准确可靠。2 .范围：本制度适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使用及销毁等。3 .术语3.1 标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。3.2 工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工

2、作使用的菌种。3.3 菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第O代。4 .职责：质量部经理负责菌种的申购、接收、保存和分发，检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。5 .内容5.1 菌种的接收与保管5.1.1 从菌种保藏中心购买的原始菌种（玻璃菌种管装），为冻干粉剂（第GO代）05.1.2 实验室购到菌种后，应做好接收记录，登记相关的信息，如：名称、数量和接收日期等。5.1.3 按照产品说明保存菌种，并加锁保存，双人管理。5. 2标准菌种的复苏5.1.1 开启菌种前，用75谿酉精棉消毒西林瓶表面。在无菌条件下，按铝盖上的箭头方向

3、打开塑盖，撕开铝盖，打开西林瓶胶塞，加入03m1左右的复苏液，用无菌滴管反复吹吸，将冻干菌种溶解成为悬液，然后将菌种管内的菌液接种至相应的流体培养基（细菌用硫乙醇酸盐流体培养基;真菌沙氏葡萄糖液体培养基）试管中，依据菌种类型将其培养于适宜的培养条件（细菌培养温度3035、2d;真菌培养温度2328、3d）下,仔细观察流体培养基是否浑浊,浑浊说明菌种复活生长；若不浑浊,可适当延长培养时间，培养后的菌种为G1代。5.1.2 若延长培养时间流体培养基仍不显浑浊，在将其作为无活菌生长的培养物丢弃之前,细菌应至少培养一周以上，真菌至少应培养两周以上，并在丢弃前应做高温灭活处理。5.3标准菌种的确认5 .

4、3.1无菌环境下，用接种环取上述培养物接种于营养琼脂培养基(细菌)或玫瑰红钠培养基(真菌)平板上，然后在3035C条件下培养3天(细菌)，2328C培养条件下5天(真菌)。6 .3.2培养后，首先观察其是否具有典型的菌落形态，然后挑取生长旺盛的单一的纯菌落,划线于平皿培养基，收集较多的生长旺盛的典型单菌落。5.4菌种保存与传代5.4.1：菌种保存5.4.1.1甘油一生理盐水保存液：取甘油(分析纯)8份加入生理盐水2份，充分混合后，经121、20min灭菌后备用。按5份培养液加入2份甘油一生理盐水保存液的比例，在纯化后的菌种培养液中加入已灭菌的甘油一生理盐水保存液，平行制作两份分别作为菌种保存液

5、G2和菌种工作液W3,并分装于灭菌的微量离心管或细胞冻存管，放置冰箱冷冻室保存，保存效期为5年。该方法主要适用于需氧细菌和酵母菌的保藏(如大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌)。5.4.1.2液体石蜡：将菌种穿刺接种于半固体高层培养基中，在适宜条件下培养结束后，在层流台下用无菌吸管吸取无菌液体石蜡至培养好的菌种管内，并使石蜡高出菌种表面约Icm使菌体与空气隔绝，并将试管直立，置于-20C冷冻冰箱中保存。此法主要适用于霉菌、厌氧菌、放线菌、芽抱杆菌的保存(如枯草芽抱杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌等)。5.4.13菌种穿刺接种于半固体高层培养基中，在适宜条件下培养结束后，置于冰箱保存28,具体

6、保存时间看菌种使用说明。5.4.2标准菌种传代5.4.2.1将标准冻干菌种复苏后，转种于适宜的增菌培养基内，称第1代(G1),复壮后转接至平板上，并在适当温度下培养适当时间，分离单个纯种菌落，此为第2代(G2)O5.4.2.2菌种确认后，挑取平板上纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管，作为保存菌种(G2),也称传代用菌种，同时挑取纯菌落转接斜面菌种数支，作为工作用菌种，此为第3代(W3)O5.4.2.3将第2代(G2)菌种管冷冻保存，将工作用菌(W3)于适当温度下培养适当时间后用于日常检验。5.4.2.4取一支冷冻保存的第2代(G2)菌种转种于平板和斜面培养基上，平板上的菌种制成冷冻保存管第3

7、代(G3)；斜面培养基的菌种经适当温度下培养适当时间后用作工作用菌种，此仍为第3代（W3）O5.4.2.5将第3代菌种（G3）冷冻或低温保存，将生长、转种后的第2代（G2）菌种经高温灭活处理后丢弃。5.4.2.6按上述规程操作，直至G1转为Ws为止，需重新开启新的冷冻干燥菌种，重复上述规程操作，保存和使用菌种。5.4.2.7当工作用菌种代数小于5时，在规定保存期限内，可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种。5.4.3工作用菌种的传代5.4.3.1当工作用菌种代数小于5时,可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种。a,取在冰箱28C保存的工作用菌种用普通琼脂斜面传代，并将新传代的培养物

8、替代原有的菌种，作为工作用菌种。b.也可取用5.4.1保存的菌种，进行复苏，直接作为工作用菌种。5.4.3.2细菌每1个月传代一次；酵母菌每2个月传代一次；霉菌及芽胞每3个月传代一次。当超过5代，须用传代用菌种传代。5.4.4工作用菌种（废弃）的销毁5.4.4.1下列情况的菌种或培养物或被污染的器具等,必须采用121C,45分钟灭活处理：a.新一代菌种制备成功后的上一代菌种；b.使用完后的菌种和带有标准菌种的器具和培养物；C.超过有效期的菌种；d.凡被污染，可疑变异等情况菌种；e.其他应废弃的菌种。5.4.4.2凡是需要销毁的菌种由相关人员提出申请，经批准后进行销毁处理，并填写废弃菌种销毁处理

9、记录O5 .5菌种编号5.1.1 编号方法：采用字母加数字表示为“英文缩写字母一代次一传代日期一顺序号”，其中：a.菌种的英文缩写字母：大肠埃希菌（E.c）、金黄色葡萄球菌（S.a）、枯草芽抱杆菌（B.s）、白色念珠菌（Ca）、黑曲霉菌（A.n）、乙型副伤寒沙门菌（S.p）b.代数用一位带有下标数字的字母表示：传代用菌种用G表示；工作用菌种用W表示；如G3表示传代用菌种第3代；H1表示工作用菌种第3代。C.传代日期用6位数字表示：年份取最后两位数，月、日分别用两位数。5.1.2 示例：2012年1月12日传代第三代的大肠埃希菌作为传代用菌种的编号为:E.c-G3-120112o6 .相关文件无7 .相关记录菌液制备使用记录检定菌定期检查记录检定菌管理记录