大肠菌群检验原始记录平板计数法2016版5样.docx

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1、大肠菌群检验原始记录（平板计数法）检验单位检验员检验日期至环境条件温度,相对湿度%检验依据GB4789.3-2016食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数第二法样品名称产品批号仪器设备及耗材：电子天平、洁净工作台、电热恒温培养箱、立式压力蒸汽灭菌器、水浴锅、PH计、移液器培养基及试剂：结晶紫中性红胆盐琼脂培养基（VRBA）：m1配制日期：煌绿乳糖胆盐肉汤（BG1B）：m1配制日期：无菌生理盐水：m1配制日期：实验过程：1 .样品处理和稀释：1 .1如需要，使用Imo1/1氢氧化钠或ImOI/1盐酸将样品调整PH在6.57.5之间。2 .2制备样品稀释液根据样品状态，无菌操作，称取/无菌吸

2、取25g（m1）样品，加入到225m1无菌生理盐水中充分混匀，制成1:10样品匀液。用Im1无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液Im1,沿管壁缓慢注于盛有9m1稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），在振荡器上振荡混匀，制成1：IoO的样品匀液。按上面步骤操作，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次Im1无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min.2 .接种VRBA选择适宜的23个连续稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），吸取Im1于无菌平皿内，每个稀释度接种两个平皿。同时分别吸取1m1生理盐水加入两个无菌平皿内作为空白对照。及

3、时将1520m1融化并恒温至46的VRBA倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀，待琼脂凝固后，再加34m1VRBA覆盖平板表层。同时再以只加VRBA的平皿，作为VRBA的空白对照。将平板翻转，培养。3 .培养将以上VRBA平板倒置于36.01C,培养18h24h（/时/_/时）并分别计数可疑和典型菌落。4 .平板菌落数选择选取菌落数在15150CFU之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环。5 .证实试验（接种BG1B）从VRBA平板上挑取10个不同类型的典型和可疑菌落，少于10个菌落的挑取全部典型和可疑菌落，分别移种于BG1B肉汤管内，

4、36C1C培养24h48h,（/时/_/时）观察产气情况。凡BG1B肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。6 .结果与报告6.1 每g（m1）样品中大肠菌群数：证实为大肠菌群阳性的试管接种总管数X平板菌落数X稀释倍数按“四舍五入”原则修约，保留2位有效数字，无菌落生长以VI乘以最低稀释倍数报告。6.2 称重取样以CFU/g为单位报告,体积取样以CFU/m1为单位报告。样品1稀释度第一稀释度第二稀释度第三稀释度结果CFUm1CFUgVRBA疑似大肠菌群菌落数接种BG1B管数BG1B阳性管数样品2稀释度第一稀释度第二稀释度第三稀释度结果CFUm1CFgVRBA疑似大肠菌群菌落数接种BG1B管数BG1B阳性管数样品3稀释度第一稀释度第二稀释度第三稀释度结果CFm1CFUgVRBA疑似大肠菌群菌落数接种BG1B管数BG1B阳性管数样品4稀释度第一稀释度第二稀释度第三稀释度结果CFm1CFUgVRBA疑似大肠菌群菌落数接种BG1B管数BG1B阳性管数样品5稀释度第一稀释度第二稀释度第三稀释度结果CFUm1CFUgVRBA疑似大肠菌群菌落数接种BG1B管数BG1B阳性管数糊也VRBA空白（仅VRBA）生理盐水+VRBABG1B空白（仅BG1B）报告人报告日期复核人复核日期