4药物免疫原性研究技术指导原则征求意见稿.docx

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1、药物免疫原性研究技术指导原则一、概述本指导原则中，药物的免疫原性是指药物和/或其代谢物诱发对自身或相关蛋白的免疫应答或免疫相关事件的能力。免疫反应的影响广泛,从无临床意义抗药抗体的暂时出现,到严重危及生命。不必要或非预期的免疫反应可能导致中和药物的生物学活性,或与对应的内源性蛋白产生交叉免疫反应，也可能导致过敏反应和细胞因子释放综合征等不良事件的发生，对患者的安全性和药物的有效性均有重要影响。对于大多数药物，不良免疫反应一般由体液免疫机制介导的免疫应答所致，因此抗药抗体一直是定义该类药物免疫原性的主要标准。但近年来随着免疫调节类药物在重大疾病中更加广泛的应用,细胞免疫机制介导的不良免疫反应也应

2、得到重视。药物的免疫原性受到多种因素的影响，患者自身和药物相关因素均可能影响药物的免疫原性。患者和疾病相关因素包括患者的免疫状态和免疫能力、遗传因素、预存抗体、给药途径、剂量和频率等。药物相关因素包括产品来源、结构、聚合物的形成、糖基化/聚乙二醇化、杂质、处方、包装和储存等。建议在药物开发的全生命周期中始终关注免疫原性研究，应基于药物作用机制，产品相关因素，以及拟用适应证等因素预测免疫原性风险，基于免疫原性风险设计相应的研究进行风险识别。在药物的开发中，一方面应尽量选择免疫原性潜在风险较小的候选药物,另一方面应探索如何减少和控制在临床研发中观察到的免疫原性的不良影响。本指导原则适用于蛋白质、多

3、肽及其衍生物，以及含有此类组分的药物，例如偶联药物。二、免疫原性研究内容免疫原性研究主要聚焦在抗药抗体的检测和表征上，应获得抗药抗体的发生率、滴度、存续时间和中和能力数据。有些情况下，需要对抗药抗体进一步进行表征，如同种型和IgG亚型或者与相关内源性蛋白的交叉反应。应始终考察抗药抗体生成与药代/药效动力学、疗效、以及安全性之间的相关性。免疫原性风险识别中，细胞介导的免疫反应也很重要，应在适用的情况下考虑对其进行评估。如果观察到临床相关的免疫反应，应对其潜在机制进行研究，并确定关键的影响因素。这些研究有助于制定和实施控制和缓解策略，包括修改产品处方和筛查高风险患者。大多数情况下治疗性蛋白药物具有

4、种属差异，基于动物免疫原性研究结果预测人体免疫原性具有局限性。但是，在非临床研究中进行免疫原性评价仍然具有一定意义。免疫原性相关的反应可导致非临床研究结果复杂化、并难以解释，因此免疫原性研究始终是治疗性蛋白药物非临床安全性研究证据链的重要组成部分。应考虑将新技术（新兴的生物信息学、体外和体内模型）用于开发过程中。对于细胞因子释放综合征、自身免疫反应等免疫相关不良反应，应在药物的开发早期进行风险评估。除了常规的动物体内毒性试验中进行细胞因子相关检测外，应进行体外细胞因子释放试验（具体试验方法见附录三。当治疗性蛋白药物对应的内源蛋白具有不可替代的生理功能时，应充分评估潜在自身免疫反应介导的安全性风

5、险。通常基于对内源性蛋白生理功能的已有了解，安全性风险是可以预估的，因此不必为了确定这些安全性风险而专门进行动物试验。但是，如果缺乏足够的认知，并且理论上提示存在安全性风险，则应考虑对治疗性蛋白药物（或针对动物的替代分子）进行动物免疫试验，以便于了解不良免疫反应的潜在影响。生物类似药需要进行免疫原性比较试验,生物类似药和参比制剂应采用同样的测定条件和采样计划，需符合现行的所有标准。分析方法最好能同时检测生物类似药和参比制剂的抗药抗体，至少应能检测到针对生物类似药的所有抗药抗体。通常，应对抗药抗体生成和性质（如，交叉反应，靶抗原表位和中和活性）以及抗体滴度进行检测和描述，并应评估和解释对临床有效

6、性和安全性指标的潜在影响。当生产工艺变更需要临床试验支持时，免疫原性的研究应与药代动力学，安全性和有效性试验相结合，应优先选择变更前后药品的头对头试验。免疫原性研究涉及多学科，免疫原性相关数据分散在上市申请的多个部分。建议提交免疫原性综合概述,可将其放于CTD2.7.2.4的特殊研究中，总结应简明扼要，并包含详细研究报告的链接。三、抗药抗体检测制定与预期治疗计划相关的综合分析策略对于阐明免疫原性数据的临床相关性至关重要。应在临床试验开展之前选择和/或开发用于评估免疫原性检测方法和检测策略。考虑到与临床安全性和疗效的相关性，对免疫原性的检测通常集中在对抗药抗体的检测和表征研究上。抗药抗体检测需要

7、进行谨慎、且前睇性地设计和计划，以保证临床评价开始之前所有关键程序都准确到位。这包括分析方法的选择、评价、特征分析、合适的采样点（包含能够确定预存抗体的基线样品）、充足的采样体积、样品采集的流程及储存方法、以及分析数据选用的统计学方法。（一）试验设计考虑1 .检测策略抗药抗体的检测通常应采用一种多层级分析方法，首先对所有样品进行筛选试验，其次对疑似抗体阳性样品的特异性进行确证试验，对已确定抗体阳性的样品进行滴度试验，以及通过功能性试验对抗体中和活性进行检测。其中在已确定抗体阳性的样品中，有时还应考虑确定抗体同种型、亚型和结合表位的检测。免疫原性多层级检测决策树参见附录一。在多层级的分析方法中，

8、筛选试验又称结合抗体试验，用于检测所有与药物结合的抗体。确证试验用于确定药物结合抗体的特异性。滴度和中和抗体试验用于进一步分析抗药抗体。滴度试验用于检测抗药抗体产生的强度。中和抗体是指能够干扰药物与其靶点相互作用的抗药抗体。中和活性试验评估抗药抗体对药物的中和程度。抗药抗体滴度、持续周期、以及中和活性检测信息对于判断抗药抗体对药代动力学、药效动力学、安全性和有效性的影响非常重要，这些信息比抗药抗体阳性率信息更为重要。在非临床免疫原性研究中，通常根据非临床药效动力学、药代动力学和安全性的表现决定是否需要进行除抗药抗体阳性率以外的研究确证。其他分析试验，如抗体同种型、亚型、抗原表位鉴定以及与内源性

9、靶点或其他产品的交叉反应性评价也具有重要的作用。初步的筛选试验应尽可能检测到所有相关的免疫球蛋白（Ig）同型抗体，但筛选试验无需进行同型抗体的进一步确定。在某些情况下，应该建立可区分同型抗体的分析方法。例如，对于过敏性反应风险较高或观察到过敏性反应的药物，则需要进行抗原特异性的IgE检测。因此，根据临床需要，可能需要评估特定的同型或亚型。在有些情况下，可能需要进行与其他蛋白交叉反应的试验，如检测抗药抗体与相应的内源性蛋白质的交叉反应性。例如，当治疗性蛋白药物在体内具有一个高同源性的蛋白家族,那么为了了解抗药抗体是否影响蛋白家族中其它蛋白时，往往需要评估抗药抗体的交叉反应性。对于多结构域治疗性蛋

10、白药物，如聚乙二醇化蛋白、抗体偶联药物和双特异性抗体，建议针对整个治疗性蛋白药物进行初步筛选试验和确证试验,对确证为阳性的样本进一步进行域特异性评价。2 .分析方法的选择对于抗药抗体检测可以采用不同的方法和仪器，包含但不局限于以下这些：直接法，桥联法和均相结合法。每种分析方法均有其优点和不足，包括检测速度、灵敏度、选择性、方法的响应范围、检测不同免疫球蛋白的能力、检测快速游离出的抗体的能力（如IgM,在免疫反应的早期出现），以及试剂的可获得性。所有的分析方法都应该考虑其检测快速游离出的抗体的能力。如果无法检测到此类免疫反应早期出现的抗体，易造成真正阳性的抗体样品未被检出的情况。在分析中也要重点

11、考虑表位的暴露情况，如果表位与固相载体或者其他报告试剂（如荧光染料、酶或生物素）结合，将导致抗原的构象变化，这将掩盖、暴露、改变或破坏与治疗性蛋白药物相关的抗体的结合位点，从而影响最后的检测结果。3 .试剂的选择用于抗药抗体检测的许多试剂可以是标准化的或从商业来源获得，例如，市售试剂。然而，特定方法可能需要其他特定试剂，包括阳性对照抗体、阴性对照和系统适用性对照。在方法设计中需要对所用到的试剂进行合适的选择。根据所选择的检测方法选择合适的检测试剂。通过试剂的选择来最小化非特异性信号并维持足够的灵敏度。阳性对照和阴性对照的选择见附录二。（二）方法学开发与验证方法学验证的程度主要取决于药物的开发阶

12、段以及潜在的免疫原性风险。对于大多数治疗性蛋白产品，在药品开发的早期阶段（如非临床、临床I期和I1期），主要涉及临界值、灵敏度，选择性和精密度，而弱化稳健性、重复性和稳定性。对于高风险产品，可能需要在临床研究之前就进行全面验证。对于关键性临床试验以及上市后研究,抗药抗体检测方法需进行全面的方法学验证。药物开发全生命周期中，有可能会根据研究需要进行检测方法参数的调整，在此情况下，应合理追加相关的补充验证内容；对于生物类似药，免疫原性是可比性研究的一部分，需要增加额外的验证内容。此外，对于某些技术平台，需增加对其他参数的验证，如采用表面等离子共振平台时，需验证表面再生稳定性、芯片基线标准、标记试剂

13、的效能及稳定性等。具体的验证方法参见附录O）试验内容1 .筛选试验筛选试验是抗药抗体检测的第一步。所采用的检测方法应该具有较高灵敏度，能够同时检测出样本中各种类型的低亲和力和高亲和力的抗药抗体。该方法应具有一定的假阳性率（通常为5%）,以增大真实阳性样本的检出率；但不期望出现假阴性。方法建立时应尽可能地选择与待测样本相同或相近的自然样本群。所选择的方法应根据需求进行优化。样本（通常是血清或血浆）中含有可能影响检测的成分，可导致假阳性或假阴性结果的产生和/或对抗体含量的错误评估。例如补体成分或补体受体、甘露糖结合蛋白、FC受体、可溶性的靶分子及类风湿因子。应采用经证实合理的方法以减少基质效应的潜

14、在影响。此外，待测样本中的残留药物可能与抗药抗体结合，从而使检测到的抗体数量降低。这种干扰分析带来的影响取决于分析模式和抗体的特性。可通过多种经验证的方法规避或解决，如酸解离、通过固相吸附除去过量的药物、延长孵育时间和/或使用允许充分稀释样本的方法。在某些情况下，可通过调整给药间隔和抗体采样时间来降低残留药物的干扰。但该方法必须不能显著地影响抗体的检测或患者的治疗。在任何情况下，应证明分析方法的药物耐受水平超过待测样本中药物的浓度（一般为药物的谷浓度）。2 .确证试验确证试验是为了排除筛选试验中的假阳性样本。筛选试验中检测为阳性的样本，需进一步进行确证试验以证明抗药抗体的特异性。确证试验应与筛

15、选试验具有可比的灵敏度，但需要注意的是，两个试验的假阳性率不同，且确证试验有更高的特异性，并至少具有与筛选试验相当的选择性以识别假阳性样本。通常情况下，确证试验会选择与筛选试验相同的方法与平台，采用结合竞争抑制法进行检测，即在样本中加入过量的药物分子，随后同时检测加入药物分子和未加入药物分子样本的信号值，若样本中含有抗药抗体，游离的药物分子将竞争结合抗药抗体，从而造成检出的信号值下降。也可采用与筛选试验不同的方法与平台进行确证试验，这种情况下，两种方法的灵敏度都需要用质量单位确定，并使用系统适用性对照，确保方法的灵敏度。若选择竞争性抑制方法，则建议使用抗体阴性、未给予治疗性蛋白的受试者的样本，

16、加入抑制剂（通常是治疗性蛋白）后，所产生的信号的数据来确定临界值。在这种情况下，用于测定临界值的治疗性蛋白的竞争浓度应与将用于样本检测的浓度一致。这种方法可能不适用于在未给药受试者中存在预存抗体的情况。在这种情况下,建议从临界值的评估中找出疑似阳性结果并予以剔除。在特殊情况下，当没有本底水平的阴性对照样本时，应采用滴度的改变或正交方法对筛选试验中呈阳性的样本进行确认。对于确证为阳性的样本，在某些情况下，需要对其特异性进行检测，以区分抗体的结合是针对药物相关成分还是工艺相关成分（如宿主细胞蛋白）O在这种情况下，应开发并验证针对样本中杂质诱导产生抗体的检测方法。3 .滴度试验滴度定义为样品检测值高于临界值时的最大稀释倍数。滴度检测常与筛选试验使用相同的平台。一般采用连续稀释方法或通过量效曲线的线性部分外推来确定滴度。通常情况下，沿用筛选临界值作为滴度临界值。但当存在预存抗药抗体时，则应根据给药后滴度的提升判断经治疗后抗药抗体的升高。可使用给药后