CART细胞非临床概述.docx

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1、申请分类：新药申请（申请事项：临床试验）注册分类：治疗用生物制品I类*CART细胞（规格：）资料项目名称：非临床概述研究机构名称：研究地址：主要研究者姓名：实验者姓名：试验起止日期：原始资料保存地点:联系人姓名：联系电话：联系地址：申请机构名称:目录表索引2图索引22.4.1, 非临床试验策略概述32.4.1.1 非临床研究项目选择的依据32.4.1.1.1 *CAR-T细胞制品的基本信息32.4.1.1.2 *CAR-T细胞的作用机制32.4.1.1.3 *CAR-T细胞的临床拟用适应症32.4.1.1.4 *CAR-T细胞临床拟用适应症的流行病学和目前治疗概述42.4.1.1.5 立题依据

2、42.4.1.1.6 *CAR-T细胞制品的注册分类及非临床研究设计52.4.2, 药理学62.4.2.1 *CAR-T细胞的非临床主要药效学研究62.4.2.1,1体外活性研究61.1.1. 1.2体内抗肿瘤活性研究62.4.3. 药代动力学62.4.4. 毒理学72.4.5. 综合评估和结论92.4.5.1 *CAR-T细胞的有效性92.4.5.1.1 *CAR-T细胞的药效学试验设计和方法评价92.4.5.1.2 *CAR-T细胞药效学研究结果分析和评价92.4.5.2 *CAR-T细胞的安全性102.4.5.2.1 *CAR-T细胞毒理学试验设计和方法评价102.4.5.2.2 *CA

3、R-T细胞毒理学试验结果分析和评价112.4.53*CAR-T细胞的药代动力学122.4.5.3.1*CAR-T细胞药代动力学试验设计和方法评价122.4.53.2*CAR-T细胞药代动力学试验结果分析和评价122.454*CAR-T细胞的非临床药理毒理研究结果对临床研究方案的意义132.4.6.参考文献13表索引表1.*CAR-T细胞的非临床研究项目5图索引图1*CART细胞亚群分析错误!未定义书签。图2.*CART细胞感染效率检测结果6图3.在靶细胞刺激后生*CAR-T细胞的细胞因子释放6图4不同效靶比条件下CART细胞对肿瘤细胞的杀伤效率错误!未定义书签。图5CFSE标记的*木松CART

4、细胞在靶细胞刺激下的增殖能力检测错误!未定义书签。2.4.1, 非临床试验策略概述2.4.1.1 非临床研究项目选择的依据2.4.1.1.1 *CAR-T细胞制品的基本信息根据药品注册管理办法附件3生物制品注册分类及申报资料要求（试行）中治疗用生物制品的注册分类要求，*CAR-T细胞属于1类治疗用生物制品，是利用基因工程方法对患者自体或者供体的T细胞进行体外基因修饰后制备的注射用细胞悬液。*CAR-T细胞具有可以特异性识别CD19抗原阳性肿瘤细胞的嵌合抗原受体（CAR）,能够靶向识别并杀灭患者体内的肿瘤细胞，从而达到治疗肿瘤的目的。CAR重组基因片段是其识别肿瘤细胞表面的特异性抗原CDI9、进

5、而杀伤肿瘤细胞并实现自身扩增的关键序列。*CAR-T细胞制品的基本信息如下：外观：Ph值:成分：性状：规格：临床用药剂型：用法用量：药品包装：药品贮藏：有效期：1.1.2 .1.2*CAR-T细胞的作用机制将CAR基因转到入供试者的T细胞中激活CAR-T的生存、扩增、体内转运及效应细胞功能，发挥特异性杀伤CD19抗原表达阳性细胞作用。1.1.3 *CAR-T细胞的临床拟用适应症资料项目编号：模块24B-A1D和难治或复发的B细胞非霍奇金淋巴瘤（rrB-NHDo2.4.1.1.4 *CAR-T细胞临床拟用适应症的流行病学和目前治疗概述急性淋巴细胞白血病（acute1ymphob1astic1eu

6、kemia,A11）是最常见的儿童和成人急性白血病之一，是一种生物学特征和临床异质性很大的恶性血液肿瘤。目前A11的治疗方法包括化疗、放疗、异基因造血干细胞移植等。但由于淋巴细胞白血病易广泛浸润及复发，预后均不理想。对于r/rB-A11可以使用挽救化疗、再次异基因造血干细胞移植或支持治疗，但是疗效均不理想，5年总生存率约为7%。恶性淋巴瘤（也称为淋巴瘤）是起源于淋巴造血系统的恶性肿瘤，可分为非霍奇金淋巴瘤（NH1）和霍奇金淋巴瘤（H1）两类。非霍奇金淋巴瘤是一种异质性较大的疾病，在我国淋巴瘤患者中的占比达87.69%。目前淋巴瘤的治疗方法主要有化疗、放疗、手术和骨髓移植。但由于高度异质性，淋巴

7、瘤的治疗效果与预后并不理想，r/rB-NH1患者往往预后不良。2.4.1.1.5 立题依据CAR-T（Chimerican1igenreceptorT,嵌合抗原受体T）细胞治疗是利用基因工程方法，对患者自体或者供体的T细胞进行体外基因修饰，使其表达出可特异性识别肿瘤细胞的嵌合抗原受体（CAR）,从而能够靶向识别患者体内的肿瘤细胞并进行攻击，达到治疗肿瘤的目的。CD19分子是特异性表达于不同分化阶段的B淋巴细胞表面的抗原，将可识别CD19的单链抗体可变区基因序列与淋巴细胞免疫受体的胞内区序列拼接后，转染至T细胞中，即可制备出特异性攻击CD19阳性的B细胞恶性肿瘤的CD19CAR-T细胞。美国FD

8、A已于2017年8月10日和2017年10月18日批准上市了两款CD19CAR-T细胞药物，即诺华公司的Kymriah和凯特公司的YeSCarta,分别用于治疗r/rB-A11（难治或复发的B细胞急性淋巴细胞白血病）和r/rB-NH1（难治或复发的B细胞非霍奇金淋巴瘤）。目前，国内尚无可以特异性攻击CD19阳性的B细胞恶性肿瘤的药物上市。为了给国内的CD19阳性的B细胞恶性肿瘤患者提供具有更佳的治疗效果和可接受的安全性以及更高的可及性的治疗选择，XXX自主开发了针对CD19靶点的第二代CAR-T细胞制品一一*CAR-T细胞。药学研究证实，*CAR-T细胞的生产工艺稳定、可靠，制剂合理，质量可控

9、，符合开展临床试验的研究药物质量要求。2.4.1.1.6 *CAR-T细胞制品的注册分类及非临床研究设计根据药品注册管理办法附件3生物制品注册分类及申报资料要求（试行）中治疗用生物制品的注册分类要求，开发的*CAR-T细胞为全新的细胞治疗类生物制品，符合治疗用生物制品第1类（新型生物制品）的分类要求，应当按照注册分类1类申报。因此，我们依据生物制品第1类（新型生物制品）的注册要求，参考当前对CAR-T类产品非临床研究与评价的一些考虑（CFDA药品审评中心电子刊物20180315）、细胞治疗产品研究与评价技术指导原则（试行）（2017年第216号）、人体细胞治疗研究和制剂质量控制技术指导原则、人

10、用药品注册技术要求国际协调会（ICH）颁布的生物技术药品的非临床安全性评价指南（S6）和Onc1inica1eva1uationforANTICANCERPHARMACEUTICA1S（CurrentStep4versiondated29October2009）等相关技术指导文件的要求，设计并开展了*CAR-T细胞的药理毒理研究，对其非临床药效学、药代动力学和毒理学进行了全面的评估研究。设计和开展的*CAR-T细胞非临床研究项目见表1表1.*CAR-T细胞的非临床研究项目研究项目研究机构体系认证试验名称药效学研究药代动力学研究急性毒性试验溶血性试验局部刺激性试验成瘤性试验2.4.2. 药理学2

11、.4.2.1 *CAR-T细胞的非临床主要药效学研究非临床主要药效学开展了*CAR-T细胞的体外活性以及体内抗肿瘤活性研究。2.4.2.1.1 体外活性研究*CAR-T细胞体外研究评价了细胞的亚群、感染效率，以及抗原依赖性的细胞增殖、细胞因子分泌和靶细胞杀伤。结果显示,*CAR-T细胞中CD3+细胞比例超过98%,且含有一定比例的CD4+、CD8+细胞，中央型记忆T细胞、效应T细胞、效应型记忆T细胞；CAR+T细胞比例超过70%,而且能够被CD19抗原特异性激活，表现为促进了细胞扩增、增加了I1-2、TNF（X和IFN等细胞因子的释放以及增强了对CD19抗原阳性细胞的体外杀伤作用。1、*CAR

12、-T细胞亚群分析（略）2、*CAR“细胞感染效率检测（略）3、细胞因子释放（略）4、*CAR-T细胞体外杀伤试验（略）5、*CAR-T细胞抗原刺激增殖试验：（略）2.4.2.1.2 体内抗肿瘤活性研究（略）2.4.2.2 一般药理学（略）2.4.3. 药代动力学非临床药代动力学研究开展了*CAR-T细胞的组织分布及其存续和消亡特性研究。2.4.3.1 伴随*CAR-T细胞单次给药毒性试验开展的组织分布试验（略）243.2伴随NCG小鼠静脉注射给予*CAR-T细胞药效学伴随毒理学研窕开展的组织分布试验（略）243.2药代动力学研究结论（略）2.4.4. 毒理学2.4.4.1 一般药理学研究（略）

13、2.4.4.2 单次给药急毒试验为了评价*CAR-T细胞单次静脉输注可能产生的急性毒性反应，为临床研究的设计与注册申报提供动物试验资料，我们设计并开展了*CAR-T细胞单次给药毒性试验和NCG小鼠静脉注射给予*CAR-T细胞药效学伴随毒理学研究。1、*CAR-T细胞单次给药毒性试验（略）2、NCG小鼠静脉注射给予*CAR-T细胞药效学伴随毒理学研究（略）2.4.4.3 特殊安全性试验1、溶血性试验为了考察*CAR-T能否引起新西兰兔红细胞发生溶血或凝聚以及为临床研究提供动物试验资料，委托昭衍（苏州）新药研究中心有限公司开展了*CAR-T体外溶血性试验。该试验的开展严格遵从药物非临床试验质量管理

14、规范（G1P）,所以可以保证试验结果的可靠性、完整性。（略）2、家兔血管刺激性试验为了评价*CAR对静脉输注局部组织是否产生刺激性以及为临床研究提供动物试验资料，委托昭衍（苏州）新药研窕中心有限公司开展了*CAR-T输注给予家兔的血管刺激性试验。该试验的开展严格遵从药物非临床试验质量管理规范（G1P）,所以可以保证试验结果的可靠性、完整性。（略）2.4.4.4 其他试验1、*CAR体外成瘤性试验（略）2、*CART体内成瘤性试验（略）3、慢病毒自我复制能力检测为了评价*CART细胞基因改造后的慢病毒自我复制能力，我们伴随*CAR-T细胞单次给药毒性试验开展了小鼠血液样品中的慢病毒自我复制能力检测。检测结果显示，小鼠血液样品对PCR没有抑制作用，表明*CAR-T细胞不具有慢病毒自我复制能力。2.4.4.5 毒理学研究结论*CAR-T细胞非临床毒理学研究发现：（1）急性毒性试验结果显示，未见*CAR-T细胞单次静脉输注对NCG小鼠产生明显毒性反应，也未对心血管系统、呼吸系统以及中枢神经系统等重要脏器系统产生明显的功能性影响和器质性改变，但不同剂量的*CAR-T细胞对小鼠的部分血液学级血液生化指标都可能产生毒性影响