DB6505T 1262023畜间布鲁氏菌病虎红平板凝集检测技术规程.docx

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1、ICS65.020.30CCSB43B6505哈密市地方标准DB6505/T1262023畜间布鲁氏菌病虎红平板凝集检测技术规程Technica1Regu1ationsforDiagnosticCriteriaofRoseBenga1TestforAnima1Bruce11osis2023-12-30实施2023-11-30发布哈密市市场监督管理局发布本文件按照GB/T1.1-2023标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由哈密市动物疫病预防控制中心提出。本文件由哈密市农业农村局归口。本文件起草单位：哈密市动物疫病预防控制中心。本文件主要起草人：张婉琪、张志新、杨

2、帆、张国新、买吾兰孜克牙、杨夷平、陈建豪。本文件实施应用中的疑问，请咨询哈密市动物疫病预防控制中心。对本文件的修改意见建议，请反馈至哈密市动物疫病预防控制中心（哈密市八一路26号）、哈密市市场监督管理局（哈密市前进西路14号）哈密市动物疫病预防控制中心联系电话：0902-2317228,传真：0902-2317228,邮编：839000哈密市市场监督管理局联系电话：0902-2250279,传真：0902-2251069,邮编：839000畜间布鲁氏菌病虎红平板凝集检测技术规程1范围本文件规定了畜间布鲁氏菌病虎红平板凝集检测操作中基本要求、检测器具和试剂准备、样品采集及制备、实验室检验、结果判

3、定、实验室废弃物处理等技术要求。本文件适用于哈密市域内畜间布鲁氏菌病虎红平板凝集检测实验。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T18646动物布鲁氏菌病诊断技术NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范NY/T1948兽医实验室生物安全要求通则SN/T4835实验室生物废弃物管理要求3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。?1布鲁氏菌病bruceIIosis也称布氏杆菌病（以下简称布病）是由布鲁氏菌属细菌引起的人兽共患

4、的常见传染病。我国将其列为二类动物疫病。虎红平板凝集试验RoseBengaITest（RBT）适用于动物布病的初筛诊断实验。根据相应抗原抗体可以在体外发生特异性结合并呈现可见反应,用已知虎红平板凝集抗原检测未知的抗体。4基本要求A1检测人员要求4.1.1 具有较强责任心。4.1.2 掌握布病虎红平板凝集检测基本原理，能够客观分析影响因素。4.1.3 经县级以上兽医实验室培训考核合格。4.1.4 具备熟练的检测技能，可正确使用检测器具。4.2.1实验操作前，人员穿防护服和胶靴或防护靴套，佩戴N95口罩、次性PE手套、乳胶手套、防护帽和护目镜，操作前后做好消毒。4.2.2实验操作过程中检测人员防护

5、按照NY/T1948相关规定执行。A4检测器具4.3.1反应板洁净、无油脂的玻璃板或商品化虎红平板。4.3.2移液器101100U1量程，连续可调。4.3.3移液器吸头应与移液器相配套，使用前应彻底灭菌。A检测试剂4.4.1使用标准的虎红平板凝集抗原，2C8C下避光保存，有效期内使用。4.4.2标准阳性血清,使用时按1:45稀释出现清晰阳性反应，作为虎红平板凝集试验标准阳性对照，反应强度为“+”O4. 4.3标准阴性血清，作为虎红平板凝集试验标准阴性对照，反应强度为“-”。5样品采集及制备1样品采集使用一次性采血器或注射器采取颈静脉血液，每头畜采集3m15m1、编号、登记，具体操作可参照NY/

6、T541执行，冬季采血时防止血液冻结。59样品制备采集后样品室温倾斜放置2h4h,待自然析出血清或低速离心(IOOOg离心IOmin15min)分离血清。采样人员防护、采样动物保定及样品采集具体操作参照NY/T541执行。勺1样品储存5. 3.1按照常规方法采血分离血清，若在3d内检测可在28C条件下储存；若超过3d应将样品于-20条件下储存，同时应避免反复冻融。5. 3.2出现明显溶血、微生物污染或凝血不良的样品则属于不合格样品，不能用于检测。6实验室检验A1检验前准备5.1.1 应在室温(18C25)条件下进行，试验前将试剂、待检样品以及反应板、移液器吸头等用具置于室温下平衡30min60

7、min05.1.2 抗原使用前应充分摇匀。A9检验操作6. 2.1取标准阳性血清、标准阴性血清各25U1,分别与虎红平板凝集抗原反应，4min后阴阳性对照结果成立后，再进行未知样品检测。6.2.2反应板上准确滴加251待检样品，再加入25H1虎红平板凝集抗原，用吸头混匀（不同样品使用单独吸头，切勿混用以免影响结果），4min内判定结果。应符合GB/T18646的规定。6 .2.3每批次实验同时使用标准阴性、标准阳性血清各一份作对照;每次操作血清样品不超过20份，且在4min内判定结果，以免样品干燥影响结果观察。7结果判定7 1结果判定判定标准见表Io表1虎红平板凝集试验结果判定标准序号反应现象

8、强度判定1凝集块呈菌丛状，出现大的凝集片或小的粒状物，凝集物之间液滴完全透明+2液滴有明显的凝集片，凝集物之间液滴几乎完全透明+3液滴周围形成明显卷边，凝集物之间液滴稍清亮+4液滴中央部分可见少量凝集，液滴周围稍有卷边形成，凝集物间液滴呈红色+5无凝集，液滴呈均匀粉红色7.1.1 出现肉眼可见凝集现象者判定为阳性（+）,无凝集现象且反应混合液呈均匀粉红色者判定为阴性（-）O7.1.2 虎红平板凝集试验适用于动物布鲁氏菌病的初筛实验，虎红平板凝集反应阳性可判为布鲁氏菌病疑似阳性病例，应进一步使用GB/T18646规定方法对检测结果进行确认。8实验室废弃物处理采血器、吸头、检测平板等废弃物需经过有效的消毒处理（如高压蒸汽灭菌30min或有效氯溶液浸泡2h-6h）后使用标记有“医疗废物”的专用黄色塑料袋封口存放，交医疗废弃物处理部门处理或焚烧深埋处理，具体按照SWT4835的规定执行。