乙型肝炎病毒核心抗原( ELISA）标准操作程序SOP文件.docx

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1、AB C D医院免疫实验室文件编号：ABCD-SOP-()1-13乙型肝炎病毒核心抗原（ELISA）版序：abed页码：第1页，共2页原理乙型肝炎病毒核心抗原（HBcAg）是乙肝病毒直接复制指标。乙肝病毒颗粒又知名人士 Dans颗粒，经裂解可使HbcAg暴露游离。本试剂盒采用ELISA原理，以两种抗体包被，反应孔内固相裂解Dans颗粒，使HbcAg释放于孔内，加入酶标记抗体，形成双抗体夹心，用于直接检测血清HbcAg。试剂盒组成1、包被板条2、阴性对照血清3、阳性对照血清4、酶标记物溶液5、促进剂试剂的稳定性与贮存6、底物液A7、底物液B8、终止液9、洗涤液（用蒸储水500ml稀释后使用）10

2、、裂解剂试剂自生产日起避光贮存于2-8,有效期内稳定。标本的收集与处理标本为无溶血血清。操作步骤1、加样：设空白对照1孔，加洗涤液100ul,阴、阳性对照各2孔。分别加阴、阳性对照血清100ul和100ul待测样本于相应孔内。37孵育60分钟。2、加促进剂：每孔加50ul （1滴）、微型振荡1分钟,37孵育40分钟。3、洗涤：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置3-4分钟，扣去洗涤液,重复3次后在吸水纸上拍干。4、加裂解液：每孔加100ul （4滴），37孵育40分钟。5、洗涤：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置3-4分钟，扣去洗涤液,重复3次后在吸水纸上拍干。6、加醵：除空白对照孔外，每孔

3、加100ul （2滴）酶标记物，轻轻振荡封板后，置37水浴20分钟。7、洗涤：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置3-4分钟，扣去洗涤液,重复3次后在吸水纸上拍干。8、显色：每孔加底物液A、B各1滴，轻轻振荡封板后，置37水浴10-15分钟。AB C D医院免疫实验室文件编号：ABCD-SOP-01-13乙型肝炎病毒核心抗原（ELISA）版序:abed页码：第2页，共2页结果判定1、目测：在白色背景下观察各孔颜色，无色或兰色明显浅于阴性对照者判为阳性，兰色与阴性对照相近者判为阴性。2、酶标仪检测（选波长450nm）：每孔加终止液1滴后，用空白孔校零，测定各孔OD值。临界值（C.0. ） =2.

4、 1阴性对照平均0D值；样本0D值S/C.0. 21者为阳性。（即S2临界值）样本OD值S/C.Q VI者为阴性。（即SV临界值=注：阴性对照孔0D值小于0. 05时，按0.05计算；大于0.05时，按实际值计算。质量控制每批检测同步进行标准和质控品测定，绘制室内质控图。其它按室内质量控制管理规定进行。参考范围酶联免疫吸附试验（ELISA）：抑制率50%为阴性临床意义:与 HBV-DNA 同 o注意事项1、2、3、4、5、6、不同批号的试剂不可混用。结果判断应在10分钟内完成。试剂盒用前先平衡至室温。含血球的标本易出现假阳性，应避免使用。未用完的板条应及时封存于易封袋中。滴加试剂前，应将滴瓶翻转数次混匀。滴加时瓶身应保持垂直。若浓缩洗涤液出现结晶，可于37放置至溶解。洗涤要充分，各孔均须加满，防止孔口内含有游离醵不能洗净。7、本试剂盒应视为有传染性物质，请按传染病实验室规程操作。