谷丙转氨酶GPT活性测定试剂盒说明书.docx

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1、谷丙转氨酶（GPT）活性测定试剂盒说明书微法100管/48样注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定澜定意义：GPT（EC2.6.1.2）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用。此外，哺乳动物肝细胞GPT活性很高，当肝细胞坏死，GPT释放到血液中，血清GPT活性显著增高。因此，GpT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。渊定原理GPT催化丙氨酸和-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸；加入2,4.二硝基苯肿溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的瘦基加成，生成丙酮酸苯腺；苯除在硬性条件下呈红棕色，可以在50

2、5nm读取吸光值并计算酶活力。试验中所需的仪器和用品：可见分光光度计/薛标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸储水。试剂的组成和配制提取液：60m11瓶，4保存。试剂一：液体2.5m1x1瓶，4保存；试剂二：液体2.5m1x1瓶，4保存；试剂三：液体25m1x1瓶，4保存；样品渊定的准备1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（IO4个）：提取液体积（m1）为5001000:1的比例（建议500万细菌或细胞加入Im1提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W,超声3s,间

3、隔10s,重复30次）；8000g4C离心IOmin,取上清，置冰上待测。组织：按照组织质量（g）：提取液体积（m1）为1：570的比例（建议称取约0.1g组织，加入Im1提取液），进行冰浴匀浆。8000g4tC离心IOmin,取上清，置冰上待测。2、血清（浆）样品：直接检测。渊定步骤1、分光光度计或函标仪预热30min以上，调节波长至505nm,蒸储水调零。2、在EP管或在96孔板中加入下列试剂试剂名称（1）测定管对照管待测样本1()煮沸IOmin的待测样本10试剂一25蒸馈水25混匀后，37,C(哺乳动物)或25(其它物种)准确反应20min试剂二2525混匀后，37-C(哺乳动物)或25

4、C(其它物种)准确反应20min试剂三240240混匀，室温(25C)放置IOmin,在505nm波长处测各管吸光度A。AA=A测定管A对照管。每个测定管需设一个对照管。计算H.用微量石英比色皿测定的计算公式如下1、标准条件下测定的回归曲线，y=0.4228x+0.0003(X为标准品浓度，umo1/m1；y为AA)。2、血清(浆)GPT活力的计算单位的定义：每m1血清(浆)每分钟催化产生InmoI丙酮酸定义为一个酶活力单位。GPT(nmo1/min/m1)=(A-0.0003)0.4228T103=118.26(A-0.0003)3、细胞、细菌和组织中GpT活力的计算(1)按样本蛋白浓度计算

5、：单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmo1丙酮酸定义为一个酶活力单位。GPT(nmo1/min/mgproi)=(A-0.0003)0.4228V1(V1Cpr)T1(3=118.26(A-0.0003)Cpr需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。(2)按样本鲜重计算：单位的定义：每g组织每分钟催化产生Inmo1丙酮酸定义为一个酶活力单位。GPT(nmo1/min/g鲜重)=(A-0.0003)0.4228V1(WV1V2)T103=118.26(A-0.0003)W(3)按细菌或细胞密度计算：单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生Inmo1丙酮酸定义为一个酶

6、活力单位。GPT(nmo1min104ce11)=(A-0.0003)0.4228V11(500V1V2)TIO3=O.236(A-0.0003)VI：加入反应体系中样本体积，0.01m1；V2：加入提取液体积，1m1；T：反应时间，20min;Cpr：蛋白质浓度，mg/m1；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；10%UmOIm1=1()3nmo1m10b.使用96孔板满定的计算公式如下：1、标准条件下测定的回归曲线，y=0.2114x+0.0003(X为标准品浓度，umo1/m1；y为AA)。2、血清(浆)GPT活力的计算单位的定义：每m1血清(浆)每分钟催化产生InmOI丙

7、酮酸定义为一个酶活力单位。GPT(nmo1/min/m1)=(A-0.0003)O.2114T1O3=236.5(A-0.0003)3、细胞、细菌和组织中GPT活力的计算(1)按样本蛋白浓度计算：单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmo1丙酮酸定义为一个酶活力单位。GPT(nmo1/min/mgprot)=(A-0.0003)0.2114V1(V1Cpr)T103=236.5(A-0.0003)Cpr需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒。(2)按样本鲜重计算：单位的定义：每g组织每分钟催化产生Inmo1丙酮酸定义为一个酶活力单位。GPT(nmo1/min/g鲜重)=(

8、A-0.0003)0.2114V1(WV1V2)T103=236.5(A-0.0003)W(3)按细菌或细胞密度计算：单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生Inmo1丙酮酸定义为一个酶活力单位。GPT(nmo1min104ce11)=(A-O.OOO3)0.2114V1(5OOV1V2)T103=0.473(A-0.0003)VI：加入反应体系中样本体积，0.01m1：V2：加入提取液体积，1m1；T：反应时间，20min；Cpr：蛋白质浓度，mg/m1：W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万；IO：UmoIm1=10311mo1m1c1、标准曲线线性范围为：0.01UmoIm1-2umo1/m1。2、AA线性范围为：0.01-1。遨优利科(上海)生命科学有限J1