大鼠抗精子抗体elisa试剂盒技术参数.docx

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1、大鼠抗精子抗体e1isa试剂盒技术参数使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中抗精子抗体（ASA力含量。实验原理本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中大鼠抗精子抗体（AsAb）水平。用纯化的大鼠抗精子抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入抗精子抗体，再与HRP标记的抗精子抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗精子抗体（ASAm呈正相关。用酶标仪在45。八侬波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠抗精子抗体（AAb）浓度。标本要

2、求1 .标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-2。C保存，但应避免反复冻融2 .不能检测含NaN3的样品，因NN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。操作步骤工标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。:1ooPgm（S号标准品15*1的原倍标准品加入15,O标准品稀群液5Opgm14号标准品工5。山的S号标准品加入15。川标准品稀释液25pgMrSO,1的4号标准品加入1561标准品稀释液12.5pgkv2号标准品ISoH的3号标准品加入SOp.I标准品稀释液6.25pgFv1号标准品工5。川

3、的2号标准品加入15。川标准品稀释液2 .加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在醉标包被板上标准品准确加样5。川，待测样品孔中先加样品稀释液4。山，然后再加待测样品IaJ（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3 .温育：用封板膜封板后置37C温育30分钟。4 .配液：将-50倍浓缩洗涤液用蒸饱水-50倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置3。秒后弃去，如此重复5次，拍干。6 .加酶：每孔加入酶标试剂SOpJ,空白孔除外。7 .温育：操作同8 .洗涤：操作同5。

4、名显色:每孔先加入显色剂A5O丛/,再加入显色剂B5OJ,轻轻震荡混匀，37C避光显色15分钟.1。终止：每孔加终止液夕终止反应（此时蓝色立转黄色）。I1.测定：以空白空调零，450八小波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后25分钟以内进行。操作程序总结：2.加入准备好的样品和标准品，37反应30分钟3洗板5次，加入酶标试剂，37C反应30分钟4 .洗板5次，加入显色液A、B，37C反应3分钟5 .加入终止液6 .1S分钟之内度OD值7.计算计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的。D值由标准曲线查出相应的浓度：再乘以稀释倍数；或用标准物的

5、浓度与。D值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-3O分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2 .浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3 .各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4 .请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的。D值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（八倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（5）05 .封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6 .底物请避光保存。7 .严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8 .所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。q本试剂不同批号组分不得混用。1O.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1 .试剂盒保存：2 .有效期：6个月