北中大中药药剂学实验指导21丹皮酚兔体内血药浓度测试.docx

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1、实验二丹皮酚兔体内血药浓度测试一、实验目的1 .学习家兔耳静脉取血的实验方法。2 .掌握血药浓度法求测体内药动学参数的方法。二、实验原理丹皮酚(PaeOn01,C9HioO3)为毛葭科芍药属牡丹、萝孽科牛皮消属徐长卿等植物的主要有效成分，已有人工合成品。临床用其针剂每次50-IOOmgo肌注或穴位注射治疗风湿痛、胃痛及各种疼痛、湿疹、过敏性皮炎等，效果良好。临床药理方面。曾有人用NC标记丹皮酚给大鼠灌胃实验表明，20分钟血浓达最高峰，并迅速代谢、排泄；亦有人用家兔尿药浓度的测试，观察该原形药及其代谢物的体内消除情况。本实验用家兔血清中药物浓度测试的方法，进一步观察该药的体内过程，并求算兔体内的

2、消除半衰期1/2、药一时曲线下面积AUC等药物动力学参数。丹皮酚结构式为：于波长274nm处，浓度在1010-5gm1范围服从比耳定律,故血样经分离后可用紫外分光光度法进行测定。经预测其平均回收率为90.22%。三、实验用仪器和试剂（-）仪器75IG可见一紫外分光光度计刻度离心管IOm110支具塞刻度试管IOm110支具塞试管20m12支试管5（或10）m110支滴管20支刻度吸管Im112支0.5m11支液管架1个试管架1个容量瓶IOm116个针管IOm12个针头8cc特大号各2个脸盆2个刀片1把广口瓶（棉球）1个镶子1个擦镜纸适量滤纸适量定时钟1个落地灯1个（-）试剂丹皮酚（Iomg/m1

3、）溶液配剂：丹皮酚1OOOmg吐温-80无水乙醇蒸储水5g(0.5g16滴)30g(36m1)加至IOOm1无水乙醇(AR)乙醛(AR)HAC-NaAC(pH4.5)缓冲溶液(配制方法按中国药典二部附录)四、实验方法(-)兔血清中丹皮酚回收率实验1 .空白血样的收集：取健康家免一只(禁食一天，喝水)。于颈动脉处剥离皮毛，扎结颈动脉,插管。取动脉血约5060m1。离心(2500rmin,15分钟)，得上清液，即空白血清。置冰箱保存。备用(每组集全血约30m1,得血清约IOm1)2 .丹皮酚标准溶液的配制：精密称取10.55mg(10mg)丹皮酚，加无水乙醇定容于IOm1容量瓶中，备用。3 .回收

4、率实验：精密吸取血清1OmI6份，于IOm1具塞刻度离心管中，各加入蒸储水1Om1,醋酸一醋酸钠缓冲液0.4m1(pH4-5),分别在管中加入上述丹皮酚标准溶液(1mgm1)5、15、25、35、451,混匀，并加入乙酸Iom1(分三次)萃取，萃取液分别置于Iom1容量瓶。用乙醛定容。然后于274nm处测E值，其中1份为空白。并以E代入E=0.00147+0.1023C回归方程，得C,求算回收率，依法做三份。(-)兔血清中丹皮酚标准曲线制作按回收率实验，自“精密吸取血清1OmI6份，其中1份为空白”，以吸收值E对药物量C(g),绘制标准曲线，求算回归方程。（）兔体内血药浓度测试1血样收集：取健

5、康家兔，称重，于耳缘静脉取空白血3m1置冰箱保存。然后肌肉注射70mgkg（即，按家兔体重Ikg给药70mg）丹皮酚，于给药后5、10、15、20、30、45、60、90分钟取免耳静脉血样3m1,置冰箱冷藏保存。2.样品血浓测定及结果：取各份血样与空白血样。于离心机中以2500rmin离心15分钟，取上层血清1.0m1。分别照兔血清中丹皮酚回收率实验项下的方法，自“各加入蒸镭水1Om1”起,依法测定吸收度。将测得的吸收度代入回归方程。求出丹皮酚浓度及药物动力学参数值。五、测定记录及数据处理（一）测定记录（二）数据处理1 .血清中丹皮酚标准曲线回归方程的求算。2 .所测吸收度E代入上述回归方程求血药浓度C、IgC填入上表。3 .绘制血药浓度一时间曲线（二项指数曲线）。4 .从二项指数后段直线部分计算斜率，从而计算得消除速度常数K、生物半衰期Ua吸收速度常数K、药-时曲线下面积AUC表观分布容积V,清除率C1、以及Ki。、K2K21等药物动力学参数。