碱性磷酸酶AKPALP活性测定试剂盒说明书.docx

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1、碱性磷酸酶（AKPA1P）活性测定试剂盒说明书微量法IoOT/48S注意t正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。测定意义：AKP/A1P是一种含锌的糖蛋臼衡，在碱性环境中可水解各种天然及人工合成的磷脂单酯化合物。AKP/A1P广泛分布于人体各脏器中，以肝脏为主。测定原理：在碱性环境中，AKP/A1P催化磷酸苯二钠生成游离酚；酚与4-氨基安替比林和铁氧化钾反应红色亚醍衍生物，在510nm有特征光吸收；通过测定510nm吸光度增加速率，来计第AKP活性。自备仪器和用品：可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、台式离心机、水浴锅、可调式移液器和蒸谣水。试剂组成和配制：试剂一：液

2、体X1瓶，4C保存。试剂二：液体X1瓶，4C避光保存。试剂三：液体X1瓶，4C避光保存。试剂四：液体X1瓶，4C避光保存，未变成蓝绿色之前均可使用。标准品：液体x1支（EP管中），2mo1m1酚标准液，4*C保存。粗*液提取:加入试剂四1201,混匀后于51Onm测定吸光度，记为A测定管。其中标准管和空R管只需做一管，测定管和对照管每个样均需做。注意：空白管和标准管只需测定一次。AKP/A1P活性计算：1 .血液中AKP/A1P活力计算活性单位定义：37中每亳升血液每分钟催化产生1mo1酚定义为1个酶活单位。AKP/A1P活力（mo1minZm1）=C标准品X（A测定管A对照管）（A标准管A空

3、白管）xV反总V样T=6.8（A测定管A对照管）（A标准管-A空白管）2 .组织、细菌或细胞中AKP/A1P活性计算（1）按照蛋白浓度计算活性单位定义：37C中每亳克蛋白每分钟催化产生1mo1酚定义为1个醉活单位。AKPA1P（mo1minmgprot）=C标准品X（A测定管-A对照管）A标准管-A空白管）xV反总（CprxV样）T=6.8x（A测定管-A对照管）（A标准管-A空白管）Cpr（2）按照样本质量计算活性单位定义：37C中每克组织每分钟傕化产生1mo1酚定义为1个麻活单位。AKPA1P（mo1ming鲜重）=C标准品X（A测定管-A对照管）（A标准管-A空白管）xV反总（WxV样V

4、样总）T=68x（A测定管-A对照管）（A标准管-A空白管）W（3）按照细菌或细胞数量计算活性单位定义：37*C中每IO4个细菌或细胞每分钟催化产生1mo1酚定义为1个酶活单位。AKP/A1P（mo1min104ce11）=C标准品X（A测定管A对照管）（A标准管-A空白管）xV反总（细胞数量XV样V样总）T=6.8（A测定管-A对照管）（A标准管A空白管）细胞数量C标准品：2mo1m1;V反总：反应体系总体积（m1）,2051=0.205m1;Cpr：粗酶液蛋白质浓度（mgm1）,需要另外测定，建议使用本公司生产的BCA蛋H质含量测定试剂盒；W：样品质量；V样：加入反应体系中上清液体积（m1）,0.004m1；V样总：提取液体积，1m1；T：反应时间（min）,15min。注意事项：1试剂二、试剂三和试剂四均需避光保存。3 .试剂四变蓝绿色后不能再使用。4 .加入试剂四后必须立即混匀，否则显色不完全。