血清乙型肝炎病毒e抗体检测ELISA作业指导书.docx

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1、血清乙型肝炎病毒e抗体检测（E11SA）作业指导书1 .原理在微孔条上预包被被纯化乙肝e抗体（HBeAb）,配以酶标记抗原（HBeAb-HRP）、中和抗原（HBeAg）及TMB等其它试剂，采用竞争法原理检测人血清（或血浆）中乙肝。抗体（HBeAb）o2 .标本采集2. 1采集前病人准备：受检者应空腹。3. 2标本种类：血清或血浆。2.3标本要求：采集病人静脉血3m1（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。4. 标本储存：2-8C保存不应超过24小时，-20C不应超过3个月，-70长期保存，应避免反复冻融。4 .标本运输：密封，室温运输。5 .标本拒收标准：污染、标本量不足、严

2、重溶血或脂血标本不宜作此项检测。6 .试剂6. 1试剂名称：乙型肝炎病毒e抗体诊断试剂盒6.2试剂生产厂家：英科新创（厦门）科技有限公司。6. 3包装规格：96TestKit6.4 试剂盒组成：HBeAb微孔板，HBeAb酶标记抗原，中和抗原，HBeAb阳性对照血清，HBeAb阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A,底物B,终止液，封口膜，自封袋。6.5 试剂储存条件及有效期：2-8C避光保存，有效期9个月。7.仪器设备7.1仪器名称：自动酶标仪7. 2仪器厂家：Rayto7. 3仪器型号：RT-2100C8. 操作步骤8.1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25oC）,微孔板开封后，余者

3、及时以自封袋封存。8.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸储水或去离子水按1：19稀释后使用。8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。8.4 加样：分别用加样器在对照孔中加入阴、阳性对照血清各501于相应孔中。8.5 加醉：分别在每孔中加入酶标记抗体501,轻拍混匀。8. 6中和：分别在每孔中加入中和抗原（HBeAg）501,轻拍混匀。8.7 温育：置37C温育60分钟，室温平衡5分钟。8.8 洗涤：用洗涤液充分洗涤5次，洗涤完扣干（每次应保持30-60秒的浸泡时间）。8.9 显色:每孔加入底物A、B各501,轻拍混匀，置37暗处15分钟。8.10终止：

4、每孔加终止液501,混匀。8 .11测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450630nm测定各孔OD值（用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。9.结果判断与分析9. 1临界值（C.O.）的计算：待测样品为原倍血清时，临界值=阴性对照孔OD值NXO.2,待测样品为非原倍血清时，临界值=阴性对照孔OD值NXO.5,（非原倍血清是指稀释血清、质控血清等）。9 .2结果判定：样品OD值SC.（K=I者为HBeAb阳性样品OD值S/C.01者为HBeAb阴性10 .质量控制：每次试验用含量为2NCUm1的HBeAb质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查

5、试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。11 .参考范围：阴性12 .临床意义：HBeAb阳性可作为体内HBV处在复制状态及血清具有传染性的一个标志。阳性表示机体已产生免疫力，病毒活力降低，传染性减弱，预后好。13 .操作性能：灵敏度高，特异性好。14 .方法局限性：样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定相关。15 .注意事项15. 1每板建议设阴阳性对照血清各两孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。15.2洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。15. 3加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1-2滴。滴加

6、时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。15.4所有样品都应按传染源处理。15. 5封口膜使用说明15.5 .1微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封口膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。15.6 .2微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。15.6不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。16 .当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。17 .参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）412-413页。18 .其它，必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。