GB 5009222016 食品安全国家标准 食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定.docx

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1、OB中华人民共和国国家标准GB5009.222016食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定2017-06-23实施2016-12-23发布中华人民共和国国家P生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局X1刖本标准代替GB/T5009.222003食品中黄曲毒毒素B1的测定、GB/T5009.232006食品中黄曲霉毒素B-B八G、Gz的测定、GB5009.242010食品安全国家标准食品中黄曲一毒索MI和B：的测定、GB/T232122008牛奶和奶粉中黄曲霉毒素B1Ji2G,G2,M,、M,的测定液相色谱荧光检测法、GB/T18979-2003食品中黄曲毒毒素的测定免疫亲和层析净化

2、效液相色谱法和荧光光度法、S、03391995出口茶叶中黄曲霉毒素检验方法、SN/T16642005牛奶和奶粉中黄曲霉毒素M1、Bi、B-G-G二含质的测定、SN/T11012002进出11油籽及粮谷中黄曲毒毒案的检验方法、SNO6371997出11油籽、坚果及坚果制品中黄曲揖毒素的检验方法液相色谱法、SwT1736-2006进出口蜂蜜中黄曲霉毒案的检验方法高效液相色谱法、NY/T1286-2007花生黄曲霉毒索B1的泅定高效液相色谱法。本标准与GB/T5009.222003相比,主要变化如下：标准名称修改为“食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定”；根据GB27612011的要求增

3、加了方法的适用范闱；增加了同位素稀释液相色谐中联质谱法为第一法；增加了高效液相色谱柱前衍生法为第二法；增加高效液相色谱柱后衍生法为第一:法；修改酶联免疫法.并将方法名称更改为酶联免疫吸附筛杳法；增加了免疫亲和柱以及酶联免疫试剂盒质量判定要求与方法；修改了测定组分为黄曲霉毒素B族和G族化合物食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素B族和G族的测定1范围本标准规定了食品中黄曲霉毒素B小黄曲毒毒素B八黄曲霉毒素G小黄曲毒毒索G，以下简称AFTB1.AFTB2,AFTG1和AFTGZ）的测定方法。本标准第一法为同位素稀释液相色谱串联质谐法.适用于谷物及其制品、豆类及其制品、坚果及籽类、油脂及其制品、调味品、婴

4、幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品中AFTB1.AFTB2,AFTG1和AFTG2的测定。本标准第二法为高效液相色谱-住前衍生法适用于谷物及丈制品、豆类及其制品、坚果及籽类、油脂及其制品、调味品、婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品中AFTB1,AFTB2,AFTG1和AFTG：的测定。本标准第三法为高效液相色谱柱后衍生法适用于谷物及其制品、豆类及其制品、吃果及籽类、油脂及其制品、调味品、婴幼儿配方食品和婴幼儿轴助食品中AFTB-AFTB-AFTG1和AFT的测定。本标准第四法为酶联免疫吸附筛作法,适用于谷物及其制品、豆类及其制品、坚果及籽类、油脂及其制品、调味品、婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品中AFTB

5、1的测定。本标准第五法为薄层色谱法.适用于谷物及其制品、豆类及其制品、坚果及籽类、油脂及其制品、调味品中AFTB1的测定。第一法同位素稀释液相色谱-串联质谱法2原理试样中的黄曲霉毒素1s、黄曲毒毒素B八黄曲密毒素G小黄曲吞毒素G.用乙揩-水溶液或甲醉-水溶液提取提取液用含1%TriIOnXToO（或吐温-20）的磷酸盐缓冲溶液稀择后（必要:时经黄曲毒毒索固相净化柱初步净化）通过免疫亲和柱净化和富集净化液浓缩、定容和过滤后经液相色谱分离串联质谱检测.同位索内标法定拉。3试剂和材料除非另有说明.本方法所用试剂均为分析纯水为GB/T6682规定的一级水。3.1 试剂3.1.1 乙腑（CHJC、）：色

6、谐纯。3.1.2 甲醇（CH式）11）：色谱纯。3.1.3 乙酸铉（CHJCOONH,）:色谱纯。3.1.4 氯化钠（NaC1）。3.1.5 磷酸氢二钠（Na二HPO：）。3.1.6 磷酸二氢钾（KF1P（北）。3.1.7 氯化钾（KC1）。3.1.8 盐酸（HC1）。3.1.9 TritonXTOoCMH0（&乩O）.（或吐温-2O.C“H中OQ3.2 试剂配制3.2.1 乙酸镀溶液（5mmo1/1）：称取0.39g乙酸铉,用水溶解后稀释至1000m1.混匀。3.2.2 乙肪水溶液（84+16）：取840m1乙腾加入160m1.水混匀。3.2.3 甲静水溶液（70+30）：取700m1甲静加

7、入300m1水.混匀。3.2.4 乙脐水溶液（50+50）：取50m1乙脐加入50m1水.混匀。3.2.5 乙肪甲醇溶液（50+50）：取50m1乙脑加入50m1甲醇混匀3.2.6 10%盐酸溶液：取1m1盐酸.用纯水稀徉至10m1.混匀。3.2.7 磷酸盐缓冲溶液（以下简称PBS）:称取8.00g氯化钠、1.20g磷酸氢二钠（或2.92g十二水磷酸氢二钠）、0.2OK磷酸二氢钾、0.20g氯化钾用900m1水溶解.用盐酸调节PH至7.40.1.加水稀释至1OOOm1o3.2.8 1TritonX-Io0（或吐温-20）的PBS：取IOm1TriIOnXToO（或吐温20）用PBS稀释至IOO

8、om3.3 标准品3.3.1 AFTB1标准品（C；Hi2（）CAS：1162-65-8）：纯度298%.或经国家认证并授广标准物质证书的标准物质。3.3.2 AFT标准品（C）；Hm（）-CAS：7220-81-7）：纯度）98%或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.3.3 AFTG1标准品（C；I1O；,CAS：U65-39-5）：纯度298%.或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。3.3.4 AFTG,标准品（C；Hh（）；,CAS：724198-7）：纯度98%.或经国家认证并授F标准物质证书的标准物质。3.3.5 同位素内标。G；AFTB】（Ci：HeO6CAS：1574

9、49-45-0）：纯度298%.浓度为0.5gm1o3.3.6 同位素内标NG厂AFTB，C；HMO6，CAS：15747O-98-8）：纯度298%浓度为0.5gm1.3.3.7 同位素内标I素TAFTG1Hd）：,CAS：157444-O79）：纯度）98%.浓度为0.5gm103.3.8 同位素内标”C-AFT62（。7乩1（）7145：157462-497）：纯度298%.浓度为0.5gm1注：标准物质可以使用满足溯源饕求的前M化标准溶液.3.4 标准溶液配制3.4.1 标准储备溶液（10gmD:分别称取AFTBI、AFTB2AFTG和AFTG21mg（精确至0.01mg）.用乙脑溶解

10、并定容至IOOm1此溶液浓度约为IOKgm10溶液转移至试剂根中后.在一20I下避光保存,备用，临用前进行浓度校准（校准方法参见附录）3.4.2 混合标准工作液（IOOng/m1）：准确移取混合标准储备溶液（1.0f1gm1）1OOm1至100m1容属瓶中,乙睛定容。此溶液密封后避光一201下保存.三个月有效。3.4.3 混合同位素内标工作液（IOOng/m1）：准确移取0.5gm1,3C-AFTB1J3C17-AFTB2J3C17-AFTG1和1C厂AFTG洛2.00m1用乙腑定容至10m1。在-20*C下避光保存备用。3.4.4 标然系列JI作溶液：准确移取混合标准工作液（IOOngm1）

11、101.50V1jOo1,2001.5001,8001JOOov1至10m1容量瓶中加入200P11IOOng/m1的同位素内标工作液用初始流动相定容至刻度配制浓度点为0.1ngm10.5ngm1J.0ng/m12.0ngm15.0ng/m1八8.0ng/m1、10.0ng/m1的系列标准溶液.4仪器和设备4.1 匀浆机。4.2 高速粉碎机。4.3 组织捣碎机,4.4 超声波/涡旋振荡器或摇床。4.5 天平：感成0.01g和0.00001g4.6 涡旋混合器。4.7 高速均质器：转速6500rmin24000rmin4.8 离心机:转速26000rmino4.9 玻璃纤维滤纸：快速、高载试、液

12、体中颗粒保留16mo4.10 固相萃取装置（带真空泵兀4.11 氮吹仪。4.12 液相色谱串联质谱仪：带电喷雾离子源。4.13 液相色谱柱。4.14 免疫亲和柱：AFTB1柱容tft2200ng.AFTR柱【可收率280%.AFTGM交叉反应率280%（验证方法参见附录B）。注：咐于不同批次的亲和柱在使用前需进行质员脸证.4.15 黄曲霉毒素专用型固相萃取净化柱或功能相当的固相萃取柱（以下简称净化柱）：对复杂基质样乱测定时使用。4.16 微孔滤头：带0.22微孔流膜（所选用滤膜应采用标准溶液检验确认无吸附现象方可使用）。4.17 筛网：Imm2mm试验筛孔径。4.18 PH计。4.19 骤使用

13、不同厂商的免疫亲和柱.在样品上样、淋洗和洗脱的操作方而可能会略有不同,应该按照供应商所提供的操作说明书要求进行操作。警示：整个分析操作过程应在指定区域内进行该区域应避光（直射阳光）、具备相对独立的操作台和废弃物存放装置，在整个实验过程中,操作者应按照接触剧毒物的要求采取相应的保护措施5.1 样品制备5.1.1 液体样品（植物油、酱油、醋等）采样址需大于I1.对于袋装、瓶装等包装样品需至少采集3个包装（同一批次或号）格所有液体样品在一个容器中用匀浆机混匀后中任意的100g（m1）样品进行检测。5.1.2 固体样品（谷物及其制品、坚果及籽类、婴幼儿谷类辅助食品等）采样最需大于1kg用高速粉碎机将其

14、粉碎过筛使其粒径小于2mm孔径试验筛混合均匀后缩分至100g.储存于样品瓶中密封保存.供检测用。5.1.3 半流体（腐乳、豆豉等）采样生需大于1kg（1）.对于袋装、瓶装等包装样品需至少采集3个包装（同一批次或号）.用组织捣碎机捣碎混匀后,储存于样品瓶中.密封保存.供检测用,，5.2 样品提取5.2.1 液体样品5.2.1.1 植物油脂称取5g试样（精确至0.01g）于50m1离心管中加入1001同位素内标T.作液（3.4.3）振荡混合后静龙30min。加入20m1乙靖-水溶液（84+16）或甲醉-水溶液（70+30）.涡旋混匀置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡20min（或用均质器均质3mi

15、n）.在6000r/min下离心10min取I：清液备用。5.2.1.2 酱油、赭称取5g试样（精确至0.01G于50m1离心管中加入1251同位素内标工作液振荡混合后静置30min0用乙肝或中醇定容至25m1（精确至0.1m1）涡旋混匀,置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡20min（或用均质器均质3min）在6000r/min下离心10min（或均质后玻璃纤维滤纸过滤）.取上清液备用。5.2.2 固体样品5.2.2.1 一般固体样品称取5g试样（精确至0.01g）于50m1离心管中加入IOOr1同位素内标工作液振荡混合后的置30min0加入20.0m1乙膈-水溶液（84+16）或甲醇-水溶液（70+30）.涡旋混匀.置于超声波/涡旋振荡器或摇床中振荡20min（或用均质器均质3min）,在6000r/min下离心10min（或均质后玻璃纤维滤纸过滤）取卜.清液备用。5.2.2.2 婴幼儿配方食品和婴幼儿辅助食品称取5g试样（精确至0.01g）于50m1离心管中.加入1001同位素内标工作液