《蜂蜜中花粉相对含量的测定》编制说明.docx

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1、农业行业标准蜂蜜中花粉相对含量的测定（征求意见稿）编制说明中国农业科学院蜜蜂研究所2023年11月蜂蜜中花粉相对含量的测定编制说明一、工作简况（任务来源、制定背景、起草过程等）1 .任务来源2002年，中国农业科学院蜜蜂研究所完成了蜂蜜中花粉含量的测定标准草案和项目建议书等书面材料，向农业部畜牧兽医局提出申报，同年,任务下达，项目计划编号是20024064,项目编号为1XIII51。2 .制定背景我国是蜂蜜生产大国，年产量约40余万吨，出口量居世界首位，国内消费量也逐年增加。但与我国蜂产品行业良好走势不相适应的是，蜂蜜市场存在掺假、价格低的单一植物源蜂蜜或混合蜂蜜冒充价格高的单一植物源蜂蜜等问

2、题。由于蜜蜂采集花蜜过程中会接触蜜源植物的花粉，从而带入到蜂蜜中，因此通过蜂蜜中的花粉形态特征和含量多少可以推断其植物来源。在此基础上，通过计算蜂蜜中特定植物花粉颗粒数占总的颗粒数的百分比，可获得蜂蜜中的特定植物花粉的相对含量，从而判定该蜂蜜来自某单一植物源的纯度。虽然蜂蜜中的花粉相对含量是鉴别蜂蜜植物品种和掺假的手段之一。但鉴别不同蜂蜜植物品种的结果具有一定的不确定性。如洋槐、棉花、橡胶等蜜源植物本身花粉含量少，蜜蜂在采蜜同时也会拜访其它粉源植物，使得这些品种蜂蜜中本种植物源的花粉率低。另外，蜜蜂在采蜜时，蜂农会补充饲喂蜂粮（主要成分是蜂花粉），从而使得蜂蜜中作为蜂粮的花粉含量高，给蜂蜜的品

3、种鉴别带来一定的困难。因此国外对不同单花蜜品种的花粉率要求不同，表1为克罗地亚、希腊、德国、意大利和塞尔维亚等国对不同植物源蜂蜜品种的要求，花粉率低的柑橘蜜为3M20%,刺槐蜜为20%棉花蜜仅为3乐花粉率高的油菜蜜为60%80乐欧洲板栗蜜为85%90虬克罗地亚、希腊和德国对除特殊植物源单花蜜品种以外的一般蜂蜜，要求花粉率达到45机在我国，没有相关标准明确规定各个单花蜜的花粉率，仅GB/T23194-2008给出了一些单花蜜的参考值。表15个欧洲国家对单花蜂蜜中最低花粉百分比要求花粉粒克罗地亚(%)希腊(%)德国(%)意大利(%)塞尔维亚(%)草莓树10/甘蓝型油菜60/80/帚石南20/20欧

4、洲板栗858790/85柑橘10(5*)32010/棉花/3/校树/85/欧石楠/4545/一般单花植物454545/紫苜蓿/30薰衣草10(5*)/蓝翅草60/刺槐20/20迷迭香/20鼠尾草15(10*)/冬香草20/蒲公英/20百里香/18/15/檄树25(10*)2025草木犀/70/向日葵/2050/40*具有特定植物种类蜂蜜的感官特征(气味、味道、色泽)；/表示未作规定。数据来源：Thrasyvou1ou,Aeta1.,2018.蜂蜜的花粉镜检分析方法最早在欧洲从十九世纪末即已经开始研究(Pfister,1895),其后Zander为该方法作了大量的基础工作，1978年国际蜜蜂植物

5、学委员会(ICBB)公布了蜂蜜花粉分析的方法。而我国对蜂蜜花粉分析的研究开展较晚，且大都是在ICBB方法的基础上进行的，2008年我国发布了国家标准蜂蜜中植物花粉的测定方法(GB/T23194-2008),采用乙酸软化蜂蜜中花粉的内含物,再用乙酸酊和硫酸将其分解后，在显微镜下观察花粉形态并计数。由于镜检计数法作为一种经典分析方法具有普遍适用性，而蜂蜜本质是一种甜味物质，其主要成分糖类总量和水分含量相对固定在一定范围内(二者之和占总量90%以上)，国内外蜂蜜的成分差异对分析方法的主体影响不大，本标准参考国内外文献采用离心沉淀蜂蜜中的花粉，甘油明胶包埋技术测定蜂蜜中的花粉相对含量，为蜂蜜的植物源品

6、种鉴别提供技术依据。3.主要起草过程农业行业标准蜂蜜中花粉含量的测定任务下达后，项目承担单位中国农业科学院蜜蜂研究所成立标准编制小组，具体负责项目标准制定工作。1 .1起草阶段(1)成立标准编制小组中国农业科学院成立标准起草小组,涉及农药学、分析化学等专业3名博士、2名硕士和3名学士组成起草小组，承担国内外资料收集、样品收集、测试方法建立、标准文本和编制说明的撰写、征求意见、意见汇总等工作，起草组成员分工明确，团结合作,共同推进标准的制定工作。参与标准制定的主要工作人员有：XXX等。(2)收集资料起草小组查阅国内外相关文献和标准，共收集到2份国际和国内相关标准,分别是GB/T23194-200

7、8蜂蜜中植物花粉的测定方法和德国标准化协会标准DIN10760-2002Determinationofre1ativepo11encontentofhoney0(3)标准方法的确定国内外目前采用的样品处理方法主要有两种：一种是离心沉淀花粉后直接制片法，另外一种是离心沉淀花粉后先用酸好水解，再制片的方法。考虑到后一种方法会破坏细胞壁胶薄的花粉颗粒，对结果评价带来影响，因此采用前一种处理方法。本标准主要内容参考DerOheWeta1(2004)蜂蜜中花粉相对含量分析方法,采用离心沉淀蜂蜜中的花粉，甘油明胶包埋技术测定蜂蜜中的相对花粉含量。(4)标准编制说明和征求意见稿的撰写在上述基础上，确定了试验

8、条件和通过方法验证后，于2023年4月起草小组完成了标准编制说明和征求意见稿的撰写。3 .2定向征求意见阶段2023年4月开始征求意见，起草单位以电子邮件方式，向高校、科研院所、质检机构等广泛征求意见，共发出征求意见稿20份，收到包括13家科研院所,3家高校，2家质检机构和1家企业返还意见19份（见表2）,全部为有意见。2023年5月-10月，标准起草小组对收到的专家意见进行整理，逐条处理,形成征求意见汇总表，共计93条意见，不预采纳17条，部分采纳7条，对不予采纳或部分采纳意见在意见汇总表中予以说明和解释。详见附件蜂蜜中花粉相对含量的测定标准征求意见汇总处理表。编制小组根据专家意见进一步修改

9、和完善了征求意见稿，初步形成标准预审稿。表2反馈意见专家名单序号姓名单位单位性质所属省区1胡福良浙江大学高校浙江省2范春林中国检验检疫科学研究科研院所北京市3李锐浙江省农业科学院科研院所浙江省4刘新迎山东省蜂业良种繁育推广中心科研院所山东省5吴晓波江西农业大学动物科学技术学院高校江西省6夏曦中国农业大学高校北京市7刘洪斌农业农村部畜禽产品质量监督检验测试中心质检机构北京市8刘晓莉江苏省农业科学院科研院所江苏省9卢焕仙云南蚕桑研究所科研院所云南省10李宗进北京精益捷检测有限公司质检机构北京市11赵红霞广东省科学院动物研究所科研院所广东省12单吉浩中国农业科学院农产品加工研究所科研院所北京市13丘

10、静中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所科研院所北京市14谭丽蕊中国蜂产品协会企业北京市15张红城中国农业科学院蜜蜂研究所科研院所北京市16贾光群秦皇岛海关技术中心科研院所河北省17韩平北京农业质量标准与检测技术研究中心科研院所北京市18陈朗农业农村部农药检定所科研院所北京市19普旭力厦门海关技术中心科研院所厦门市3.3预审阶段2023年05月06日，项目主持单位中国农业科学院蜜蜂研究所邀请贾光群、常碧影、李俊玲、罗丽萍、樊霞、玄红专、陈辉等7位专家，对标准进行了认真审查，并予以通过预审，并建议将题目修改为蜂蜜中花粉相对含量的测定，预审会议审查意见汇总处理表见附件2。2023年05月202

11、3年06月，根据标准预审会专家提出的意见或建议，完善和补充了标准，形成标准公开征求意见稿，提交全国畜牧业标准化技术委员会秘书处。二、标准编制原则、主要内容及其确定依据1 .标准编制原则该标准的编制注重通用性、适用性、可操作性和经济性，所选用的化学试剂和仪器设备简单、容易获得、价格低廉，实验人员在一般的实验室即可操作。该标准积极参考国际和国外先进标准，有利于促进我国标准与国际接轨，促进对外经济技术合作和对外贸易发展。本标准的制定过程中严格遵守国家有关方针、政策、法规和规章，严格执行强制性国家标准和行业标准。力求做到：技术内容的叙述正确无误；文字表达准确、简明、易懂；标准的构成严谨合理；内容编排、

12、层次划分等符合逻辑与规定。2 .主要内容及其确定依据2.1 定义的确定花粉相对含量的定义特定品种花粉粒数占总花粉粒数的百分比。来自DIN10760-2002Determinationofre1ativepo11encontentofhoneyo2.2 样品制备方法的确定在提取蜂蜜中的花粉之前，为确保样品的均一性，需要对样品进行制备混匀。因为蜂蜜的状态分为结晶和未结晶，参考GB/T23194-2008蜂蜜中植物花粉的测定方法对样品进行制备，未结晶的蜂蜜试样直接搅拌均有，结晶的蜂蜜试样用不超过60水浴中融化，搅拌均匀。对于巢蜜，则参考GB/T33045-2016巢蜜的方法，用刀割去蜜脾蜡盖，通过挤

13、压的方式使巢蜜中的蜂蜜和蜂蜡分离，用不锈钢筛过滤除去杂质，搅拌均匀。2.3离心速率的选择由于不同离心速率和离心时间对蜂蜜中花粉的提取效果可能会有影响，因此以油菜蜜样品为研究对象，称取10g（精确至0.1g）蜂蜜试样于离心管中，加入20In1水，重复提取2次（DerOheWeta1,2004）,比较2700r/min下离心5min和10min的效果，结果发现离心时间10min比5min更能使花粉沉淀附着在管壁上，而不容易随水流出。确定离心时间后，比较2700r/min、3000r/min和3400r/min不同水平的离心速率对蜂蜜中花粉粒数的影响，离心后，分别用Im1蒸储水定容，各吸取0.2m1

14、样液到载玻片上，使其液滴面积大小一致，其余制片操作步骤与标准中规定的相同，在每个玻片靠近中间位置连续观察10个视野花粉粒总数，结果（表3）表明2700r/min转速的离心效果与3000r/min和3400r/min相比，10个视野中花粉粒总数差异显著，而3000r/min和3400r/min相比，差异不显著。因此，从蜂蜜中提取花粉的离心速率选择3000go表3不同离心速率对结果的影响5=3）离心速率/g花粉粒数/10个视野平均花粉粒总数平均花粉粒数SD2700124361120+3.2a11911830001474311447.6b135149340013945615214.1b167150注：p0.052.4花粉颗粒浸润用试剂的选择国外方法大多采用甘油明胶作为浸润花粉颗粒的试剂，另外也有用廿油浸润花粉颗粒，在此将两种试剂进行比较，测定油菜蜂蜜中的花粉相对含量，平均值分别为803.1%和824.5%,差异不显著。但廿油明胶优点是固定性能好，制