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1、气相色谱法测定鸡肉中胆固醇含量的不确定度评定报告一、目的用气相色谱法测定鸡肉中胆固醇含量。采用国家标准GB/T9695.24-2008所规定的测定程序提取与净化二测量程序框图标准曲线的制备气相色谱法测定三、测量结果计鸡肉中胆固醇的含量X可表示为x Jm式中：c-样品溶液中胆固醇的浓度;m称样量。四、技术规定国家标准GBfT9695.24-2008规定了完整的测量程序。其有关规定大致如下。1 .仪器和试剂的技术指标(1)1.0 mol/L氢氧化钾溶液：用水将5.60 g氢氧化钾溶解并定容至(ML。(2)标准储备液：称取().lg标准品(精确至().0()()1 g)用三氯甲烷溶解，定容至().1
2、 L,配成浓度为1000 mg/mL的标准储备液。(3)标准曲线：将标准储备液用正己烷稀释至10, 20, 50, 100, 200 ug/mL。2 .程序(1)样品的制备：将样品用组织捣碎机充分捣碎，装入洁净容器，4冷臧避光保存。(2)皂化：称取0.5 g (精确至0.01g)样品于5() mL朔料离心管中，加入10 mL氢氧化钾溶液，再加入10 mL乙醇，涡旋混合均匀，加盖，于85 C-95c水浴振荡皂化1 h.(3)提取与净化：将皂化后的样品取出溶液冷却至室温，加入10 mL正己烷,振荡提取5min, 4000 rpm,离心2 min,取上层正己烷层至另一离心管中，10 mL正己烷重复提
3、取一次，合并正己烷相，加入5 mLi0%硫酸钠溶液，振荡提取5 min, 4000 ipm,离心2 min,取上层正己烷层过无水硫酸钠酸漏斗至鸡心瓶中4() 减压旋转蒸发至干，1mL正己烷定容供仪器测定。(4)标准溶液的制备：将标准储备液用正己烷稀释至10, 20, 50, 100, 200 Ug/mL,按(2) (3)操作处理。(5)计算样品中胆固醇的含量。五、不确定度来源和数学模型由于本测定规定采用国家标准GB/T9695.24-2008给出的经验方法来测量鸡肉中胆固醇含量。顾不考虑该方法本身的误差。因此在测量不确定度评定中只考虑与实验操作有关的的不确定度分量。样品溶液中胆固醇的浓度c用气
4、相色谱进行测量，其计算公式为式中：A-测得的胆固醇的峰面积；Bo-校正曲线的截距；B,-一校正曲线的斜率。鸡肉中胆固醇的含量X,其计算公式为X二 iBxm数学模型为式中：fs-由于标准物质的不确定度引入的修正因子;fm-由于样品称量的影响引入的修正因子；fY由于前处理引入的修正因子。六、不确定度分量1 .样品溶液中胆固醇的浓度C液相色谱串联质谱仪上测量的峰面积与内标化合物的比值，然后由校准曲线计算硝基吠喃代谢物的浓度C及其标准不确定度口(C)配制出浓度分别为()/(),20,5(),10(),20() ug/mL的五个校准标准溶液，各测量1次，共计6次，采用最小二乘法拟合校准曲线.表一测量数据
5、标准物质浓度ug/mL定量离子峰面积ARESPONSE004221.311027.4122892. 422062.9441542.6050124.857196. 03100244.3121208.53200495.88318895.99拟合校准曲线的方程为:A = B、c+ B。Bi =2.44996,B()=4.0947_ 0 + 10+20 + 50 + 100+200c =6=6333阳 / mLn2Sxx = Z(cE)Sxx=28956.87测量的实验标准偏差为Z（A 综一旦。）2）=v-入I一 20 - 4.0947 - 2.4496x02 +27.41-4.0947 - 2.44
6、96x 102 +62.94 - 4.0947 - 2.4496 x202 + 124.86 - 4.0947 - 2.4496x502 +244.31-4.0947 - 2.4496x 1002 +495.88 - 4.0947 - 2.4496x 20026-2(c) =6.005(c)=对被测样品测量一次，即p=2o测得样品溶液的浓度c（）=56.66 口 g/mL= 0.82,、6.00 fl 1 (56.66 63.33)2w(c) =J + 一 + 2.44996 V 2 628956.8756.662 .样品质量称量引入的不确定度样品称样量为：0.5。8，_根据所给出的质量允许差
7、4丫=0.5 0,其置信水平p=99%,属正态分布，包含因子k=3。不确定度为：的（加）=电=5叫=1.667x IO- g- k 3相对标准不确定度：“/（m）=必蛆=1667 XK）4 = 3.334 x 10-4m 0.53 .标准物质引入的不确定度a）标准物质称量引入的不确定度标准物质称取量为：0.10 g,根据所给出的质量允许差Ay=0.5 mg,其置信水平p=99%,属正态分布，包含因子k=3。不确定度为：%（加）=0.1667mgk 3相对标准不确定度：如M=%=0.001667m 100b）标准物质引入的不确定度评定根据标准物质证书提供的信息，胆固醇的不确定度是1%。一般认为，
8、标准物质给出的是扩展不确定度，属正态分布，包含因子k=3,其相对不确定度为：%）=军=学=0003333k 3c）标准溶液定容引入的不确定度c.l容量瓶校准100mL容量瓶校准结果的不确定度为l%（k=2）,%(V)1 %=0.00052c.2温度容量瓶是在20 。下进行的校准，而在实验室室内温度在4 范围内变动。温度变动对体积测量的影响可以通过体积膨胀系数来进行计算。由于溶液的体积膨胀系数明显大于容量瓶容积的膨胀，因此只考虑前者的影响。水的体积膨胀系数为2.1x10-4 C,于是对体积测量所引入的不确定度分两为100mLx2.1xl0-4x43”(匕)=尸=0.05/?-V3c.3稀释溶液时
9、将体积增加到容量瓶刻度时得得不确定度将溶液体积稀释到所需标准体积的重复性可以通过实验测量得到。对典型的100mL容量瓶反复充满10次并进行称量，得到实验标准差为0.02 mL,于是引入的标准不确定度分量为2(七-元尸1=3 匕)3(匕)二02辽将三个分量合成，得到体积测量的不确定度分量为u3(V) = a/3w1(V)2+3w2(V)2+3w3(V)2w3(V) = 0.06245U (V) = 0.00062453 向1004 .试样均匀性样品前处理引入的不确定度试样均匀性和处理操作过程产生的不确定度的评定检测结果的重现性主要受操作人员的样品处理过程的一致性，样品的均匀性和仪器本身的性能因素
10、影响，该不确定度属A类评定，采用同一样品进行重复实验进行评估。其重复实验结果见表二。表二重复实验结果检测结果Xi(mg/kg)序歹I号123456789 平均值115.23115.56112.55118.25105.23110. 12118.77111.90102. 30113. 32单次测量结果的标准偏差:Sx=9.0236标准不确定度:Sx=3.19034相对不确定度为:=0.02815七、不确定度分量汇总表表三测量不确定度汇总表序号来源数值标准不确定度u（x）相度标准不确定度 Urel（X）1C胆固醇的质量浓度56.67 u g/mL0.820.0142fm称样量0.50g0.1667m
11、g3.334x1043fsl标准物质称取量0.010g0.1667mg0.0016674fs2标准物质的影响10.0033330.0033335fs3标准溶液定容体积100mL0.06245mL0.00062456fy样品前处理引入的不确定度113.32 yg/kg3.190340.02815八、合成标准不确定度合成标准不确定度”囤（X）为Ucrel(X) = Q l (C)+ iJ 2 向(帆)+3 (巾)+ 、由仁)+/“”)_ 0.0142 +(3.334 xlO-4)2 + 0.01667 2 + 0.003333 2 + 0.0006245 2 + 0.02815 2= 0.031667而胆固醇的含量X为X = 113.32mg / kg最后得,(X) = w/(X) X = 0.031667 X 113.32mg/kg = 3.5886九、扩展不确定度取包含因子k=2,则扩展不确定度U(X) = hit(X) = 2x 3.5886 = 7.1772 mg/kg十、不确定度报告按照国标GB/T 9695. 24-2008所规定的测量程序，被测样品中硝基吠喃代谢物的残留量为113.32 mg/kg。其扩展不确定度U(X”7.度72 mg/kgo它是由标准不确定度Um (X)和包含因子k=2的乘积得到的。
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