细胞培养基本方法.docx

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1、1操作台基本要求:zi.it合修闲右手的工作人员风基小布得.惯用左手筋工作人员SIIe放00工作MgiAnuta.2 .随着传代次数的增加，连续培养细胞系遗传物质不稳定，不得将细胞存放于-20或-80冰柜中，因为细胞存在次低温条件下活力迅速降低。3 .细胞污染：(1)细菌污染ABBB1工电Xua差图。星系M主K的2930的文脑杆型月城.I1US量位依下可QMDie第网的区域存荏-。做发泉的“小依.但是普个不18区分6的).格黑色方可mMw1T放大后可W1示出告个大廉肝了1fi.这些爆愚思京力”Vt.E2mKH径的OSfn网A电反色方色的iK度向力IOOqn.（2）酵母污染K23.用二相差图。艮

2、示M重塔界的29J蜩*HBI每可望弓冷明传/I星舞彩香复时含。生山龄/卜的岗.（3）霉菌污染初期PH值维持稳定，污染严重后PH值迅速升高，导致培养基浑浊。（4）病毒污染一般不会对与其宿主物种不同的细胞培养物造成不良影响，通过电子显微镜检查、一组抗体的免疫染色，E1ISA实验或者采用适当病毒引物的PCR技术可以检测出细胞为病毒污染。（5）支原体污染唯一检测支原体污染的方法是采用荧光染色、E1ISE.PCR.免疫染色、放射自显影4 .抗生素只能作为对付污染的最后手段而且只能短期使用，并应尽快撤出5 .适合贴壁的细胞和悬浮的细胞站培弗*mt适合包括原代峭曲在内的大多效15台己追成悬浮培养的姐胞以及氨

3、他一佚无帖用性的耀JKH例如需要*修代代.但是曷于通过命显.ISBftft.但是需爨备无进行细胞/皎靶存话事演!定.以收冽生长模式：可将埸养物林署以制酒生长.*1ff1（WtDTryp1E-Exprws,廉本白的）或机械方法JWK竭胸.无需通过或机收方法解启端陀.细胞工长受衰而不限制.因而产曼姻的生长受到又荏墙养“申木庚的另于r大培养现嗯.需要使用及过期织培齐处理的寿IU可使用未经蜗织培养处理的日叱行馆界.需要笊动（即：福晃式演怦）以便进行充分的气体交接.可速续收驮产物.用于绐幅学竽克等48T究领域可数收联产物.用于白雷的大生产及多旭研究例域.6 .基础培养基，减血清培养基，无血清培养基7 .

4、PH值：大多数正常哺乳动物细胞系PH为7.4；成纤维细胞系适合轻度偏碱（pH7.4-7.7）Sf9和sf21等昆虫细胞系最适合在PH值为6.2的环境中生长8 .温度：大多数人和哺乳动物细胞系在36至37最佳昆虫细胞在27为最佳禽类细胞在38.5最佳冷血动物（15O26C）9 .动物细胞形态划分：成纤维细胞，贴附生长上皮样细胞呈多角形，贴附淋巴母细胞样细胞呈球形，不贴附W:I型有长突触H型没有轴突10.细胞增长模式O246810天数.业，F1e1图星不了e的餐要与靖界时国之妁美塔/的曰电和技用后T长bRra.Af1HMBM*a.1t*MftMtti*.看侬中MmUM生MKW（即一夕或多上窗畀国I

5、MUB已占号用!为国怠人，止“（窜fm）,4施度大大依修立竟更停止11.何时传代？哺乳动物：生长的PH值通常表示乳酸储积，且有毒性，当PH迅速降低（）0.1-0.2PH单位），同时细胞浓度增大，则应对细胞进行传代。昆虫细胞PH值会上升但不超过6.412 .贴壁细胞的解离方球作用MAMnwr法帖壁的*.tt5/ieaAM-*”口0骷量qWMM台里艮胞、已长由二多展缉两nJ10蝴当位冷雄做分勤侵嵬虚霓.r*M8ttUMnMft*eBRf1TX.MJKWBTrypU-Mf1*M球性*.AMHMd.要仅用拿动物才力射#Mn9A13 .贴壁细胞的传代 2过蛔聚蟾鼻处方的瑞内履.SHtt 克全生畏场养*.

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10、Mmisa. 在夫1海博齐基体下昆虫嘲目与4IUIMa为本0泉夏花IHS大力一箧复眼夏便烟皿丸用.可用箱,口土作快.星事Ji一下界慝为了5般.之行itn.Vff：Jt设不受为需曼41畀瓶.因为这惮可能会遗建雄境旗缶.淳01胞的传代eefmtuMfttmii9-.由于立已0在生假0苏“中g淳.BIit元雪gno作用代募从皓号日表西”*工个过用辅力迅型.rrBff）ff1t2人mta鼻时不是行事长培不的更接.2M1awA!49fii.从目!在维界雅中，得范,第届重搐增养痢,比也也可以从用寺H中取出一分批K.得/下的圉黑Re弦蜗的与遭宣龄稳的空度森丹明总传代后七睫外购一般比MVfi.通浮培养春刀塔邦

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