乙肝核心抗原anti-HBc标准操作程序SOP文件.docx

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1、ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-19anti-HBc版序：ABCD页码：第1页，共4页用途：用免疫学方法定性测定人血清或血浆中的乙肝核心抗原（HBcAg）。电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏Elecsys2010免疫测定分析仪。概述：乙肝病毒（HBV）由外壳HBsAg和内核HBcAg组成。后者含有183785个氨基酸。IIBV感染期间，一般会产生抗HBcAg抗体，并在HBsAg出现后即可从血清中检测到。在HBV感染康复者和HBsAg携带者中，抗HBcAg可持续存在，因此，抗HBcAg是提示过去或现在感染HBV的指标。偶尔，也有抗HBcAg阴性的HBV感染者（多见于免疫抑制病人）

2、。由于抗HBcAg可长时间存在，因此，在特殊人群中开展抗HBcAg筛选试验对预防乙型肝炎的传播有重要参考价值。抗HBc试验与其它乙型肝炎试验一同检测有助于乙型肝炎的诊断和监测。在其它乙型肝炎标志（HBsAg阴性者）缺乏的情况下，抗HBc可能是提示现存HBV感染的唯一指标。原理：采用竞争法原理，整个过程27分钟完成。 第1步：40l标本用还原试剂预处理。 第2步：加入HBc抗原液，标本中的抗- HBc与HBc抗原结合形成复合物。 第3步：加入生物素化的和钉标记的抗HBc抗体以及链霉亲和素包被的微粒，HBc抗原上仍然游离的位点被占据。形成的免疫复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第

3、4步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。Elecsys自动将标本产生的光电信号与从抗HBc定标液得出的Cutoff值相比较。试齐小M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6. 5mlo粒子浓度0.72mgl,生物素结合能力：470ng生物素mg粒子。含防腐剂。RO： DTT（白盖），1瓶，5ml：二硫苏糖醇,浓度llOmmol/1；枸椽酸缓冲液50mmolLRI： HBcAg （灰盖），1瓶,8ml： HBcAg （E. coli, rDNA）浓度高于25ngml,磷酸缓冲液0. loll, pH7

4、.4,含防腐剂。R2：生物素化的抗HBcAg抗体;Ru（bpy） 32+标记的抗HBcAg抗体（黑盖），1瓶，8ml：生物素化的抗HBcAg单克隆抗体浓度高于800ngml ； Ru （bpy） 32+标记的抗HBcAg单克隆抗体浓度高于130ngmL磷酸缓冲液0.hnoll, pH7.4,含防腐剂。Cal 1阴性定标液（白盖），2瓶，L0ml瓶人血清，含防腐剂Cal 2阳性定标液（黑盖），2瓶，L0ml瓶,抗HBc （人）浓度高于8PEIU*ml,人血清，抗HCV和抗HIV1+2无反应性。含防腐剂。ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-19anti-HBc版序：ABCD页码：第2页

5、，共4页*Paul Ehrlich研究所单位储存和稳定性：存放在2-8度，切莫倒置。未开封，可稳定至标明的保质期。M, RO、RI , R2试剂开封后,2-8度，8周；在仪器上(2010), 8周。Cal 1, Cal 2开封后，2-8 度，8周；在仪器上，5小时。注意：保证定标液不污染瓶盖。标本采集和准备：血清：按标准常规方法采集。血浆：肝素钠、EDTA-K3,枸椽酸钠或氟化钠/草酸钾抗凝。标本在2 8度可稳定5天，-20度可稳定3个月。标本可冻融5次。注意：冻融过的标本、有沉淀的标本、反复测定过的标本使用前需离心。加热灭活的标本可使用。检测步骤：提供的材料：货号：1820559, 100人

6、份的Elecsys抗HBc试剂盒包含： M链霉亲和素包被的微粒 RO DTT RI HBc Ag R2生物素化的抗HBc Ag抗体，三联毗咤钉标记的抗HBc Ag抗体 Cal 1阴性定标液 Cal 2阳性定标液需要的材料(未提供)： Elecsys 抗HBc质控品 1 和2 (PreciControl 抗HBc)货号 1876325 Elecsys通用稀释液货号1732277 Elecsys2010 分析仪 Elecsys 系统缓冲液(ProCell)货号 1662988 Elecsys测量池清洗液(CleanCell)货号 1662970 Elecsys 添加剂液(SysWash)货号 19

7、30346 Elecsys 系统清洗液(SysClean)货号 1298500方法：按仪器操作说明进行操作。检查试剂与消耗品是否充足。使用前需混匀微粒。仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参数，不需手工输入。如果特殊情况下仪器无法阅读条形码，可以手工输入15位数字。ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-19anti-HBc版序：ABCD页码：第3页，共4页Elecsys2010：将冷藏试剂预温到20度后放置于仪器的试剂盘上，避免产生泡沫。系统自动控制试剂温度和开/关试剂瓶盖。将抗HBc Cal 1和Cal 2放在分析仪的标本测试区。只在标定时打开瓶盖。条形码自动提供定标所

8、需的数据资料。定标完成后，将Cal 1和Cal 2放回2 8度保存。定标：每批试剂盒必须用新鲜试剂和抗HBc Cal l,Cal 2定标一次。另外，以下情况需要再次定标：Elecsys2010： 一个月（同一批号试剂） 7天（放置仪器上的同一试剂盒） 根据要求进行标定：如质控结果超出范围时； 根据规定进行多次标定。定标范围：（电化学发光信号计数）阴性定标液（Cal 1） 27, 000-200, 000阳性定标液（Cal2） 100-3000质控：Elecsys抗HBc质控品1和2 （PreciControl） 0质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验

9、室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。计算：仪器会自动根据Cal 1和Cal 2的测定值计算Cut-off值。每一个标本的结果以有反应性或无反应性以及Cutoff指数（标本信号/ Cutoff）报告。干扰因素：该方法不受黄疸（胆红素25mgdl）、溶血（血红蛋白L6gdl）、脂血（脂质1000mgdl）和生物素50ngml等干扰。接受高剂量生物素（5mg天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（676Uml） o 19种常用药物经试验对本测定无干扰。接受过小鼠单抗治疗或诊断的病人可能会出现假阳性反应。偶尔会遇到抗链酶亲和素抗体的干扰。Elecsys抗Bc测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。稀释：可用Elecsys通用稀释液或HBV阴性的人血清、血浆或胎牛血清稀释标本。ABCD医院免疫实验室文件编号：ABCD-02-19版序：ABCDanti-HBc页码：第4页，共4页结果解释：标本的Cutoff指数1.0判断为抗HBc无反应性。可判定该标本抗HBc阴性，不需进一步的试验。标本的Cutoff指数二1.0判断为抗HBc有反应性。必须用该试剂重复测定两次：如两次结果均为无反应性，则判定该标本抗HBc阴性；如两次检测中有一次是有反应性，则判定该标本抗Bc重复有反应性。