人B细胞活化因子受体BAFFRELISA试剂盒使用说明书.docx

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1、人B细胞活化因子受体（BAFF-R）E1ISA试剂盒使用说明书人B细胞活化因子受体（BAFFR）E11SA试剂盒试验原理：本试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附试验（E11SA）.已知待测物质浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将待测物质和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中指标的浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制：试剂盒成份96孔配置48孔配置96/48人份酶标板1块板（96T）半块（48T）塑料膜板盖1块半块标准品1瓶(1.0m1)1瓶(0.5m

2、1)空白对照1瓶(1.0m1)1瓶(0.5m1)标准品稀释缓冲液1瓶(8.OmD1瓶(4.0m1)生物素标记抗体1瓶(8.0m1)1瓶(4.0m1)亲和链酶素HRP1瓶(12m1)1瓶(6.OmD洗涤缓冲液1瓶(20m1)1瓶(IOm1)底物A1瓶(6.OmD1瓶(3.OmD底物B1瓶(6.OmD1瓶(3.OmD停止液1瓶(6.0m1)1瓶(3.OmD自备料子：1.蒸僭水。2.加样器：5u1IOuK50u1IOOuE200、500u1.IOOOu1o3.振荡器及磁力搅拌器等。试剂盒样品收集、处理及保管方法：1、血清操作过程中躲避任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，IOOOXg

3、离心10分钟将血清和红细胞快速小心地分别。2、血浆EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。IoOOXg离心30分钟去除颗粒。3、细胞上清液1000g离心10分钟除颗粒和聚合物。4、组织匀浆将组织加入适量生理盐水捣碎。IOOOXg离心10分钟，取上清液5、保管假如样品不赶忙使用，应将其分成小部分70OC保管,躲避反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。假如血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37。C或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。操作注意事项：I试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不行保管。1试验中不用的板条应赶忙放回包装袋中，

4、密封保管，以免变质。1不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。1使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取停止液和底物A、B液时，躲避使用带金属部分的加样器。1使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。1底物A应挥发，躲避长时间打开盖子。底物B对光敏感，躲避长时间暴露于光下。躲避用手接触，有毒。试验完成后应赶忙读取OD值。1加入试剂的次序应全都，以保证全部反应板孔温育的时间一样。依照说明书中标明的时间、加液的量及次序进行温育操作。安全性：1 .躲避直接接触停止液和底物A、Bo一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。2 .试验中不要吃喝、吸烟或使用化妆品

5、。3 .不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。人B细胞活化因子受体(BAFFR)E11SA试剂盒试剂盒性能:1 .灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990、2 .特异性：不与其它细胞因子反应。3 .重复性：板内、板间变异系数均小于10虬操作步骤：1 .使用前，将全部试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。2 .依据待测样品数量加上标准品的数量决议所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品依据自身的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。3 .加入稀释好后的标准品50U1于反应孔、加入待测样品50

6、u1于反应孔内。赶忙加入50u1的生物素标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀，37。C温育45分钟。4 .甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液,用吸水纸拍干Q重复此操作4次。假如用洗板机洗涤，洗涤次数加添一次。5 .每孔加入IOoUI的亲和链酶素HRP,轻轻振荡混匀，37温育30分钟。6 .甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。假如用洗板机洗涤，洗涤次数加添一次。7 .每孔加入底物A、B各50u1,轻轻振荡混匀，37。C温育5分钟。躲避光照。8 .取出酶标板，快速加入50U1停止液，加入停止液后应赶忙测定结果。9 .在450nm波优点测定各孔的OD值。结果推断与分析：1、仪器值：于波长45OnnI的酶标仪上读取各孔的OD值2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的指标标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线，样品的含量可依据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度，再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。