实验23种子生活力的快速测定.docx

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1、试验23种子生活力的快速测定种子生活力是指种子能够萌发的潜在力量或种胚具有的生命力。它是打算种子品质和有用价值大小的主要依据，与播种时的用种量直接有关。测定种子生活力常采纳发芽试验，即在相宜条件下,让种子吸水萌发，在规定天数内统计发芽的种子占供试种子的百分数。但是常规方法（直接发芽）测定种子生活力所需时间较长，特殊是有时为了应急需要，没有足够的时间来测定发芽率，遇到休眠种子也无法知道。而采纳以下的化学方法，则能在较短时间内获得结果。I氯化三苯基四氮哇法（TTC法）一、原理凡有生命活力的种子胚部，在呼吸作用过程中都有氧化还原反应，在呼吸代谢途径中由脱氢酶催化所脱下来的氢可以将无色的TTC还原为红

2、色、不溶性三苯基甲（TTF ）,而且种子的生活力越强，代谢活动越旺盛，被染成红色的程度越深。死亡的种子由于没有呼吸作用，因而不会将TTC还原为红色。种胚生活力衰退或部分丢失生活力，则染色较浅或局部被染色。因此，可以依据种胚染色的部位以及染色的深浅程度来判定种子的生活力。TTC （无色）TTF （红色）二、试验材料、试剂与仪器设施（一）试验材料玉米、小麦等种子。（二）试剂0. 5% TTC溶液：称取0.5gTTC放在烧杯中，加入少许95%乙醇使其溶解，然后用蒸锵水稀释至100 mL o溶液避光保存，若变红色，即不能再用。（三）仪器设施恒温箱，培育皿，刀片，烧杯，锻子，天平。三、试验步骤1 .浸种

3、将待测种子在3035 C温水中浸种（大麦、小麦6小时，玉米5小时左右），以增加种胚的呼吸作用。2 .显色 取吸胀的种子200粒，用刀片沿种子胚的中心线纵切为两半，将其中的一半置于2只培育皿中，每皿100个半粒，加入适量的0. 5% TTC溶液，以掩盖种子为度。然后置于30 恒温箱中1 h o观看结果，凡胚被染为红色的是活种子。将另一半在沸水中煮5 min杀死胚，作同样染色处理，作为对比观看。3 .计算活种子的百分率，假如可能的话与实际发芽率作一比较看是否相符？溟麝香草酚蓝法（BTB法）一、原理凡活细胞必有呼吸作用，汲取空气中的0 2放出CO 2。CO 2溶于水成为H2C03 , H 2 C03

4、解离成H +和HCO 3 一，使得种胚四周环境的酸度增加，可用澳麝香草酚蓝（BTB ）来测定酸度的转变。BTB的变色范围为pH6.0 7.6 ,酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为pH 7. 1 ） o色泽差异显著，易于观看。二、试验材料、试剂与仪器设施（一）试验材料玉米种子。（二）试剂0. 1% BTB溶液：称取BTB 0. 1 g ,溶解于煮沸过的自来水中（配制指示剂的水应为微碱性，使溶液呈蓝色或蓝绿色，蒸储水为微酸性不宜用），然后用滤纸滤去残渣。滤液若呈黄色，可加数滴稀氨水，使之变为蓝色或蓝绿色。此液贮于棕色瓶中可长期保存。（三）仪器设施恒温箱，天平，刀片，烧杯，银子，培育皿，

5、滤纸，漏斗。三、试验步骤1 .浸种同上述TTC法。2 . BTB琼脂凝胶的制备取0. 1% BTB溶液100 mL置于烧杯中，将1 g琼脂剪碎后加入，用小火加热并不断搅拌。待琼脂完全溶解后，趁热倒在4个干洁的培育皿中，使成一匀称的薄层,冷却后备用。3 .显色取吸胀的种子200粒，整齐地埋于预备好的琼脂凝胶培育皿中，种子胚朝下平放，间隔距离至少1 cm o然后将培育皿置于30 35 下培育12小时，在蓝色背景下观看,如种胚四周呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是死种子。4 .计算活种子百分率。用沸水杀死的种子作同样处理，进行对比观看。m红墨水染色法一、原理有生活力的种子其胚细胞的原生质具有半透性，有

6、选择汲取外界物质力量，某些染料如红墨水中的大红G不能进入细胞内，胚部不着色。而丢失生活力的种子其胚部细胞原生质膜丢失了选择汲取的力量，染料进入细胞内是胚部染色，所以可依据种子胚部是否染色来推断种子的生活力。二、试验材料、试剂与仪器设施（一）试验材料玉米、小麦等种子。（二）试剂5%红墨水。（三）仪器设施恒温箱，培育皿，刀片，烧杯，镣子。三、试验步骤1 .浸种同上述TTC法。2 .染色取己吸胀的种子200粒，沿胚的中线切为两半，将一半置于培育皿中，加入5%红墨水（以沉没种子为度），染色10 15 min （温度高时间可短些）。3 .观看染色后倒去红墨水，用水冲洗多次，至冲洗液无色为止。检查种子死活

7、，凡种胚不着色或着色很浅的为活种子；凡种胚与胚乳着色程度相同的为死种子。可用沸水杀死的种子作对比观看。4 .计算有生活力种子的百分率。IV纸上荧光法一、原理具有生活力的种子和已经死亡的种子，它们的种皮对物质的透性是不同的，而很多植物的种子中又都含有荧光物质。采用对荧光物质的不同透性来区分种子的死活，方法简洁，特殊是对十字花科植物的种子，尤为适用。二、试验材料与仪器设施（一）试验材料油菜、白菜等十字花科植物的种子。（二）仪器设施紫外荧光灯，镣子，培育皿，滤纸（无荧光）。三、试验步骤1 .将完整无损的种子（油菜、白菜等十字花科植物的种子）100粒，于2530 C水中浸泡23小时。2 .把已吸胀的种

8、子，以35mm间隔整齐地排列在培育皿中的湿滤纸上，滤纸上水分不能过多，以免荧光物质流散彼此影响。培育皿可以不必加盖，放置1.52小时，取去种子，将滤纸阴干。取出的种子仍按原来挨次排列在另一培育皿中（以备验证）。3 .将阴干的滤纸置于紫外荧光灯下进行观看，观看如能在暗室中进行，则效果更好。在放过种子的位置上如见到荧光圈，则为死种子。如要确证它们是死种子，可将排列在另一培育皿中的这些种子拣出来，集中在一只培育皿的湿滤纸上，而让不产生荧光圈的种子留在培育皿中，维持湿度，让其自然发芽。4 . 34天后纪录培育皿中发芽种子数。此方法的成败，首先打算于种子中荧光物质的存在,其次打算于种皮的性质。有些种子无论有无发芽力量，一经浸泡，即有荧光物质透出，大豆即属此类；也有些种子由于种皮的不透性，无论种子死活，都不产生荧光圈，很多植物的种子都会遇到这种个别现象，此时只要用机械方法擦伤种皮，可重复验证。相反，有时由于收获时受潮，种皮已裂开，也会产生荧光圈，试验时都应当留意。最好将浸泡液进行检查，没有荧光则适于作试验材料。思索题1 .试验结果与实际状况是否相符？为什么？2 .就你所知还有哪些快速方法，可以测定种子的发芽率？3 .试比较TTC法、BTB法、红墨水法以及纸上荧光法，测定的结果是否相同？为什么？